范婷婷 汪嘉麗（通訊作者）

（常州市食品藥品監(jiān)督檢驗中心 江蘇 常州 213000）

《中國藥典》2015年版二部[1]已收載格列齊特的有關(guān)物質(zhì)方法，但未收載雜質(zhì)B的檢測方法，雜質(zhì)B生物活性及毒理作用尚未查到相關(guān)報道，但作為格列齊特的合成中間體也要進行必要的控制。本實驗建立了對格列齊特原料藥中雜質(zhì)B的定量檢測方法及各溶劑對雜質(zhì)B檢出的影響，對進一步研究格列齊特及其它雜質(zhì)起到借鑒作用。

1.實驗部分

儀器：島津LC-20AD高效液相色譜儀，配有SPD-M30A高靈敏度檢測器；XP205電子天平（Mettler-Toledo公司）

試劑：甲醇（色譜純，賽默飛公司）；乙腈（色譜純，賽默飛公司）；二甲亞砜（色譜純，賽默飛公司）；超純水（Milli-Q制備）；格列齊特雜質(zhì)B（批號：180415-01-ZYL）；三氟乙酸（阿拉?。┤野罚▏幖瘓F化學試劑有限公司）。

2.方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：辛烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，Luna 5μm C8(2)100A LC Column 250×4.6mm；流動相：乙腈- [三氟乙酸-三乙胺-水（1:1:55）]（35:65）；流速：1.2ml/min；柱溫：35℃；檢測波長：235nm；進樣量：20μl。

2.2 供試品溶液的制備

取本品約50mg，精密稱定，置10ml量瓶中，加2.5ml DMSO使溶解，加水稀釋至刻度，搖勻，在4℃環(huán)境中冷卻30分鐘，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。以乙腈-水和甲醇-水作為供試品配制方法同上。

2.3 對照品溶液的制備

取雜質(zhì)B對照品約10mg，精密稱定，置50ml量瓶中，加DMSO使溶解并稀釋至刻度，精取1ml至50ml量瓶中，加入12ml DMSO并用水稀釋至刻度，再精取1ml置100ml量瓶中，加入24ml DMSO并用水稀釋至刻度，即得。以乙腈-水和甲醇-水作為對照品溶液配制方法同上。

2.4 線性

將濃度為0.08ug/ml、0.016ug/ml、0.032ug/ml、0.04ug/ml、0.08ug/ml的標準溶液，在選定的液相條件下進樣測定，以濃度為橫坐標，以峰面積為縱坐標，進行線性回歸計算，得到雜質(zhì)B的濃度與峰面積的線性回歸方程以不同溶劑溶解分別為y=1E+06x+2754.7[R2=0.9997，DMSO-水(24:76)]；y=1,424,735.7724x-631.6992[R2=0.9990，乙腈-水(24:76)]；y=1,235,124.9121x-986.52[R2=0.9982，甲醇-水(24:76)]。可見以DMSO-水做溶劑時線性最好，可進行定量計算。

2.5 以DMSO-水為溶劑的檢測方法的精密度、準確度、檢出限

精密度：對濃度分別為0.008ug/mL、0.032ug/mL和0.08ug/mL的雜質(zhì)B重復測定6次，根據(jù)數(shù)據(jù)結(jié)果，計算相對標準偏差。考察分析方法的精密度，見表1。結(jié)果表明，所有濃度梯度的相對標準偏差≤1.0%。滿足定量計算要求。

準確度：精密稱取未檢出雜質(zhì)B的陰性樣品50mg，分別加入0.08ug/mL濃度的雜質(zhì)B標準溶液4.0mL(6.4ppm)、5.0mL(8.0ppm)和6.0mL(9.6ppm)各三份并定容至10mL，以相同的操作條件，重復測定6次對其定量分析并計算樣品的回收率。結(jié)果見表2，范圍為99.1%～99.8%，表明所建立的分析方法得到的測定結(jié)果準確，可靠。

檢出限：在相同的色譜條件下，雜質(zhì)B的檢出限（LOD）為0.64ppm(S/N=3)；定量限（LOQ）為1.6ppm(S/N=10)。

表1 雜質(zhì)B檢測方法的精密度

表2 雜質(zhì)B檢測方法的準確度

2.6 以DMSO-水為溶劑的溶液的穩(wěn)定性

取本品以DMSO-水為溶劑的對照品溶液，于室溫下放置0,2,4,6,8,10,12h，進樣并記錄色譜圖。結(jié)果雜質(zhì)B的峰面積RSD為1.21%（n=5）。表明對照品溶液在12小時內(nèi)穩(wěn)定。

3.討論

綜上所述，首先本實驗建立了格列齊特雜質(zhì)B的微量檢出方法，該方法簡便、快捷、準確，增強了高效液相法檢測微量雜質(zhì)的靈敏度；其次，在本方法的基礎(chǔ)上考察了三種不同溶劑對雜質(zhì)B的影響，結(jié)果是以甲醇-水和乙腈-水作為溶劑時，線性與分離效果都沒有以DMSO-水作為溶劑時理想，可進行進一步研究；最后，應用本方法并以DMSO-水作為溶劑時線性及回收率良好，穩(wěn)定性強，可用于格列齊特中雜質(zhì)B的定量檢測。