覃 婷 田 矛 魏子豫

(1 廣西壯族自治區(qū)人民醫(yī)院產(chǎn)科,南寧市 530021，電子郵箱:2278919254@qq.com；2 首都醫(yī)科大學臨床醫(yī)學系，北京市 100069)

溶質(zhì)載體家族26成員4(solute carrier family 26 member 4，SLC26A4)基因位于染色體7q22.3-q31.1,編碼Pendrin蛋白。Pendrin蛋白是一種陰離子轉(zhuǎn)運蛋白，表達于內(nèi)耳毛細胞、腎臟閏細胞及甲狀腺細胞，位于細胞膜上，介導氯離子與碳酸氫根、碘離子與甲酸根的轉(zhuǎn)換。SLC26A4基因是大前庭水管綜合征與Pendred綜合征的主要致病基因，其突變將導致Pendrin蛋白合成減少或功能障礙，純合突變或復合雜合突變可導致先天或后天的語前聾或語后聾。本研究在廣西漢族與壯族新生兒中進行SLC26A4基因的攜帶者篩查，了解突變基因SLC26A4以及不同突變位點的基因頻率，為大前庭水管綜合征與Pendred綜合征的防治提供參考。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2015年8月至2017年12月在廣西壯族自治區(qū)人民醫(yī)院分娩的4 089例新生兒作為研究對象。納入標準：(1)父母直系血親三代均為廣西壯族者為壯族新生兒，父母三代均為廣西漢族者為漢族新生兒；(2)新生兒父母同意參加本研究并簽署知情同意書；(3)新生兒父母無臨床可觀察到的聽力障礙。排除標準：(1)早產(chǎn)兒及足月低體重兒；(2)合并有眼、骨、腎、皮膚等顯著出生缺陷的新生兒；(3)外耳及耳道發(fā)育異常的新生兒。將2 784例漢族新生兒設為漢族組，1 305例壯族新生兒為壯族組。兩組新生兒的性別、出生時孕周比較，差異均無統(tǒng)計學意義(均P>0.05)，見表1。

表1 兩組新生兒一般資料比較

1.2 標本采集 用注射器取所有新生兒出生斷臍后胎盤端臍帶臍血約4 mL，滴于干血片上形成3個直徑均為1 cm的血斑，風干后送檢。同時注射器中余下2 mL臍血送檢血紅蛋白電泳以明確收集到的標本為純胎兒血。

1.3 基因檢測方法 干血片打孔，采用DNA提取試劑盒(北京天根生物科技有限公司，目錄號：DP319)提取DNA。采用晶芯十五項遺傳性耳聾基因檢測試劑盒(微陣列芯片)及其配套儀器[博奧生物集團有限公司，國食藥器械(準)字2014第3400832號]進行多重聚合酶鏈式反應擴增、芯片雜交、洗滌及掃描，檢測SLC26A4基因的8個常見突變位點(2168A>G、IVS7-2A>G、1174A>T、1226G>A、1229C>T、1975G>C、2027T>A、IVS15+5G>A)。根據(jù)掃描微陣列芯片探針上的熒光雜交信號判讀突變位點及野生型。

1.4 統(tǒng)計學分析 采用SPSS 17.0軟件進行統(tǒng)計分析。計量資料以(x±s)表示，組間比較采用t檢驗；計數(shù)資料以例數(shù)(百分比)表示，組間比較采用χ2檢驗或Fisher確切概率法。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié) 果

壯族組檢出SLC26A4基因突變3例，其中IVS7-2A>G雜合突變2例，1229C>T雜合突變1例。漢族組檢出SLC26A4基因突變26例，其中IVS7-2A>G雜合突變19例，1229C>T雜合突變1例，2168A>G雜合突變4例，1174A>T雜合突變1例，IVS15+5G>A雜合突變1例。兩組均未檢出純合子或復合雜合突變及1226G>A、1975G>C、2027T>A突變。 壯族組突變基因SLC26A4以及突變位點IVS7-2A>G的基因頻率均小于漢族組(均P<0.05)，而兩組突變位點1229C>T、2168A>G、1174A>T、IVS15+5G>A的基因頻率差異均無統(tǒng)計學意義(均P>0.05)，見表2。

表2 兩組突變基因SLC26A4及突變位點的基因頻率比較(%)

注：▲為Fisher確切概率法；某基因頻率=(2×該基因純合子例數(shù)+1×雜合子例數(shù))/(2×調(diào)查個體總數(shù))×100%。

3 討 論

SLC26A4基因是大前庭水管綜合征與Pendred綜合征的主要致病基因。SLC26A4基因突變類型多樣，目前已經(jīng)報道的突變有200余種[1]，其中主要為點突變及少數(shù)堿基的缺失或重復及插入。不同種族中SLC26A4基因的突變熱點有很大差異，歐洲大前庭水管綜合征患者的突變熱點為707T>C與1246A>C，而日本與韓國患者的SLC26A4基因突變熱點為2168A>G[2]。

封紀珍等[3]對石家莊9 421名新生兒行耳聾基因篩查，結(jié)果顯示突變基因SLC26A4的基因頻率為0.827 9%，其中突變位點IVS7-2A>G、2168A>G的基因頻率分別為0.727 1%、0.100 8%。本研究中，漢族、壯族新生兒突變基因SLC26A4的基因頻率分別為0.467%、0.115%，突變位點IVS7-2A>G的基因頻率分別為0.341%、0.077%，均低于上述結(jié)果；漢族新生兒突變位點2168A>G的基因頻率為0.072%，與上述結(jié)果相近，而壯族新生兒未檢出2168A>G突變。潘麗等[4]對珠海地區(qū)新生兒進行耳聾基因篩查，發(fā)現(xiàn)SLC26A4基因主要突變熱點為IVS7-2A>G、2168A>G。本研究中，漢族新生兒SLC26A4基因突變熱點亦為IVS7-2A>G、2168A>G，而壯族新生兒SLC26A4基因突變熱點則為 IVS7-2A>G、1229C>T。這提示耳聾基因SLC26A4的基因頻率及突變熱點均存在地域與民族差異。

本研究結(jié)果顯示，壯族組突變基因SLC26A4的基因頻率小于漢族組(P<0.05)。假設廣西壯族人群的大前庭水管綜合征發(fā)病率與漢族人群相似，則說明壯族人群中可能存在本研究檢測的8個常見突變位點以外的突變熱點。闕婷等[5]采用飛行時間質(zhì)譜技術(shù)對7 100例廣西新生兒進行耳聾基因篩查，該研究未包含1226G>A突變位點的檢測，但是增加了281C>T突變位點的檢測，并檢出3例281C>T突變。而本研究的基因芯片技術(shù)無法篩查出281C>T突變。此外，在本研究的4 089例新生兒中，未檢測出1226G>A、1975G>C、2027T>A突變位點。但是，劉閩等[6]在230例廣西耳聾患者中檢測出1例1226G>A、1975G>C、2027T>A位點復合雜合突變；同時應用測序技術(shù)對SLC26A4基因雜合突變的患者進行SLC26A4基因測序，發(fā)現(xiàn)芯片及飛行時間質(zhì)譜均無法檢測出IVS11+47T>C及1548insC突變。因此，在廣西人群尤其是廣西壯族人群中進行SLC26A4基因篩查時，仍有必要納入1226G>A位點，同時281C>T、IVS11+47T>C、1548insC突變也應加入廣西新生兒的耳聾基因篩查中。

綜上所述，壯族新生兒耳聾基因SLC26A4的基因頻率低于漢族新生兒；壯族新生兒的突變熱點為IVS7-2A>G、1229C>T，漢族新生兒突變熱點為IVS7-2A>G、2168A>G，且壯族新生兒位點突變IVS7-2A>G的基因頻率低于漢族新生兒。建議在廣西新生兒尤其是壯族新生兒耳聾基因篩查中，增加281C>T、IVS11+47T>C、1548insC突變位點的檢測。