周宇博，吳紅斌

1.桂林醫(yī)學院 ( 桂林 541000);2.桂林醫(yī)學院附屬醫(yī)院中醫(yī)科(桂林 541000)

原發(fā)性痛經(jīng)(Primary dysmenorrhea，PD)是婦科中的常見病，發(fā)病率高、危害大與不孕、乳腺疾病等密切相關[1-2]。壯醫(yī)藥線點灸療法作為傳統(tǒng)療法在治療原發(fā)性痛經(jīng)有著明顯的臨床療效，具有簡便易行，無毒副作用的優(yōu)勢。但對于其作用機制不甚明確。寒濕凝滯型痛經(jīng)由于寒濕損傷陽氣失其溫煦推動而致血瘀導致，而血液流變學能夠較為客觀地反映中醫(yī)理論的血瘀狀態(tài)[3]，故本研究通過動物實驗，觀察壯醫(yī)藥線點灸療法對寒濕凝滯型痛經(jīng)模型大鼠的血栓素B2及血液流變學的影響，探究其治療機制。

材料與方法

1 實驗動物及分組 選購由桂林醫(yī)學院動物實驗中心提供的SPF級雌性SD大鼠50只，要求9～10周齡，性成熟未交配。隨機分為5組，即正常對照組、痛經(jīng)模型組、壯醫(yī)藥線點灸組、桂枝茯苓組、針灸組。適應性飼養(yǎng)一周后開始造模。

2 藥材及試劑 2號壯醫(yī)藥線(廣西中醫(yī)學院壯醫(yī)藥推廣中心)、針灸針(規(guī)格：0.30 mm×40 mm，華倫醫(yī)療用品有限公司)、桂枝茯苓膠囊(江蘇康緣藥業(yè)股份有限公司批號Z10950005)、苯甲酸雌二醇(杭州動物藥品廠，批號獸藥字(2013)110202511)、縮宮素(安徽宏業(yè)藥業(yè)有限公司，批號H34022979)、鹽酸腎上腺素(遠大醫(yī)藥，批號H42021700)、TXB2放免試劑盒。

3 試驗方法

3.1 造模方法：除A組外其他組連續(xù)12 d皮下注射雌二醇使子宮同步化，首日及第12天0.8 mg/只、第2天至第11天為0.4 mg/只/d。第5天后連續(xù)7 d按每次0.3mg/kg每日皮下注射腎上腺素2次。第1次注射后2 h，將大鼠浸入5℃～8℃水中5 min至無力攀爬、出現(xiàn)寒戰(zhàn)為宜。不擦干毛發(fā)放回飼養(yǎng)籠停食，2 h后再注射腎上腺素。在第12天末次給藥24 h內(nèi)、末次點灸30 min后腹腔注射縮宮素2U/只。

3.2 實驗方法：A組不造模不治療；B組造模但不治療。三組干預組于該組造模的第5天開始干預，C、E組實驗區(qū)備皮，參照方宗疇等《實驗大鼠針灸俞穴圖譜及針刺手法》取中極穴、雙側關元及三陰交。C組：在酒精燈上點燃藥線線端，熄滅明火，將帶火星的線端對準穴位，一按一滅即起為一壯，一穴灸五壯；D組用桂枝茯苓膠囊粉末水灌胃，劑量按50 kg成人體重折算每只大鼠灌胃量為人口服劑量的0.004倍；E組：取穴同藥線點灸組，取平補平瀉手法每穴留針15 min。

C、D組均將大鼠置于自制大鼠固定器中使其處于安靜狀態(tài)接受治療。每天1次，連續(xù)7 d。

4 觀察指標

4.1 血液流變學檢測：第12天干預結束后對每組大鼠用10%水合氯醛(0.2 ml/kg)進行麻醉。固定于操作臺上用靜脈采血針心臟采血4～5 ml置于肝素管抗凝，標記后行血液流變學檢測方法：采用全自動血液流變儀進行全血黏度(高、中、低切)、紅細胞壓積、紅細胞聚集指數(shù)、紅細胞電泳時間、紅細胞變形指數(shù)進行檢測。

4.2 子宮組織血栓素B2(TXB2)檢測：心臟采血后剖腹分離出子宮，用精密電子天平稱取相同重量的同段子宮(200 mg)用冰生理鹽水洗凈后剪碎在冰浴下加入5 ml冰生理鹽水，研磨勻漿制成均漿液，以2500 r/min在4℃離心15 min取上清液置于離心管，低溫(-20℃)保存待測。采用放免法按照TXB2放免試劑盒說明書操作方法測定子宮組織中TXB2的含量。

結 果

1 大鼠全血黏度的比較 正常對照組全血黏度(高、中、低切)均比模型組低(P<0.05)，說明寒濕凝滯型痛經(jīng)會導致全血黏度異常升高，模型組各指標均高于三組治療組可見三種干預方法均能降低全血黏度；藥線點灸組與針刺組及桂枝茯苓組療效對比顯示在全血黏度中的高切顯著低于桂枝茯苓組(P<0.05)，而全血黏度中的低切高于針灸組(P<0.05)，其余指標比較則無顯著性差異(P>0.05)。見表1。

2 其他血液流變學指標比較 模型組紅細胞電泳時間、紅細胞聚集指數(shù)、紅細胞壓積及紅細胞剛性指數(shù)均比正常對照組高(P<0.05)，說明寒濕凝滯型痛經(jīng)會導致血液流變學各項指標異常升高；且均高于三個干預組說明三組干預能改善痛經(jīng)模型大鼠的血液流變性；藥線組與另兩組治療組比較顯示在大鼠紅細胞壓積低于桂枝茯苓組(P<0.05)，而紅細胞聚集指數(shù)高于針灸組(P<0.05)，其余指標比較則無顯著性差異(P>0.05)。見表2。

表1 五組全血黏度比較(MPa·s)

注：與藥線點灸組比較，★P<0.05；與痛經(jīng)模型組對比，*P<0.05

表2 各組大鼠其他血液流變學指標比較

注：與藥線點灸組比較，★P<0.05；與痛經(jīng)模型組對比，*P<0.05

3 各組大鼠子宮組織血栓素B2的結果比較 與痛經(jīng)模型組的子宮組織血栓素B2比正常組及三個干預組均高，可見寒濕凝滯型痛經(jīng)會導致子宮組織血栓素B2異常高表達，且三種干預措施能抑制其濃度升高，改善痛經(jīng)程度；另外與藥線點灸組濃度高于正常對照組但比痛經(jīng)模型組和桂枝茯苓組低(P<0.05)。與針灸組對比無統(tǒng)計學意義(P>0.05)?？芍幘€點灸療法在降低TXB2的程度強于口服桂枝茯苓而與針灸相當(圖1)。

注：與藥線點灸組比較，★P<0.05；與痛經(jīng)模型組對比，*P<0.05

圖1痛經(jīng)模型大鼠子宮組織血栓素B2的結果

討 論

原發(fā)性痛經(jīng)屬于中醫(yī)“痛經(jīng)”、“經(jīng)行腹痛”的范疇[4]。根據(jù)前期的研究發(fā)現(xiàn)寒濕凝滯型是原發(fā)性痛經(jīng)臨床常見的證型[5]，多由經(jīng)期前后感受寒涼，過食生冷或處于寒濕環(huán)境以致寒濕之邪客于沖任、胞中，損傷陽氣，使其溫煦推動，血為寒凝，經(jīng)血阻滯胞宮、胞脈，氣血運行不暢，“不通則痛”導致痛經(jīng)。寒濕凝滯是寒邪侵襲機體引起體內(nèi)血行不暢，血脈不通，血液瘀滯等中醫(yī)的病理表現(xiàn)[3，6]。本實驗模擬寒濕凝滯證形成的病因，將大鼠置于冰水中復制動物模型，大鼠出現(xiàn)喜扎堆、口唇泛白等表現(xiàn)符合該中醫(yī)證候的特點。資料[7-8]證明，寒濕凝滯證一般都伴有血液流變學異常。血液流變學是血液病理變化的重要參數(shù)，能反映血液的黏滯性，濃稠性，聚集性和凝固性的特性。全血黏度，紅細胞聚集，紅細胞壓積，紅細胞剛性等指標的升高，提示血液呈高黏滯的狀態(tài)，能夠較為客觀的地反映中醫(yī)理論的血瘀狀態(tài)[9]。本實驗結果顯示寒濕凝滯型原發(fā)性痛經(jīng)模型組血流變各項指標升高，我們認為是在寒冷的侵襲下交感神經(jīng)興奮，引起血管壁損傷，使血管通透性增加，血液黏稠、血運不暢。血液處于黏濃聚的異常狀態(tài)，一方面容易堵塞血管形成血栓，另一方面，血液流動異常也是激活血小板聚集，進而形成血栓的重要原因[10]。血小板活化時啟動前列腺素代謝，生成具有相反生物活性的PGI2和TXA2。TXA2增多可導致血管痙攣加重，血栓形成加速，加重血瘀[11-12]。實驗結果顯示寒濕凝滯型原發(fā)性痛經(jīng)組織中TXB2顯著高于正常組，說明在模型組TXA2過表達，致使血小板聚集及血管收縮強度增加，加重血液凝集的表現(xiàn)。本研究發(fā)現(xiàn)寒濕凝滯型痛經(jīng)的發(fā)生可能與組織中血栓素B2(TXB2)異常高表達有關，高表達的TXB2使得機體全身血液流變性和凝血機制失調(diào)，導致濃、黏、凝、聚的血液流變學異常變化，進而胞宮氣血不暢“不榮則痛、不通則痛”。盆腔子宮周圍微血栓形成，子宮的缺血乏氧的狀態(tài)進一步加重子宮平滑肌痙攣最終形成痛經(jīng)。

壯醫(yī)藥線點灸療法是壯醫(yī)最具特色的療法之一，在臨床上治療寒濕凝滯型痛經(jīng)日漸成熟、效果可靠[13-14]。壯醫(yī)認為痛經(jīng)的發(fā)生主要是因勒(血)不暢，瘀阻龍路，以致咪花腸(胞宮)堵塞所致[15]。本實驗根據(jù)中醫(yī)經(jīng)絡理論選用治療痛經(jīng)病的主穴關元、中極屬任脈，且均位于胞宮周圍，可疏通局部氣血，具有溫陽補腎、培元固本、通調(diào)沖任的作用。三陰交為足三陰經(jīng)之交會穴，可調(diào)理三經(jīng)氣血。壯醫(yī)藥線點灸療法通過直接灸灼患者體表的一定穴位或部位，以其藥效及溫熱的局部刺激在人體的龍路、火路的體表氣聚部位施以調(diào)氣作用，使局部的血管、毛孔擴張，疏調(diào)龍路火路氣機，調(diào)理“噓勒”(氣血)以達散寒逐瘀、行氣活血、通經(jīng)止痛之功效。胞宮，沖任氣血暢通則經(jīng)行腹痛消失，進而達到止痛之目的。實驗研究證實壯醫(yī)藥線點灸治療寒濕凝滯型痛經(jīng)的機制為通過對以上穴位的溫熱刺激，使得藥效經(jīng)由經(jīng)絡深達臟腑并能降低異常高表達的血栓素B2(TXB2)，抑制血小板聚集和血栓形成，從

而改善血液流變學及子宮血供，使氣血充足，胞宮得養(yǎng)進而緩解子宮平滑肌病理性痙攣，達到治療痛經(jīng)之效。