莫愁

摘要：高效液相色譜（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）是在本世紀(jì)60年代末期，在經(jīng)典液相色譜法和氣相色譜法的基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的新型分離分析技術(shù)，它具有快速、高效、靈敏、準(zhǔn)確等優(yōu)點(diǎn)，在醫(yī)藥衛(wèi)生、食品、環(huán)保等各個(gè)領(lǐng)域已得到了廣泛的應(yīng)用。本文主要分析探討了高效液相色譜在中藥研究中的應(yīng)用情況，以供參閱。

關(guān)鍵詞：高效液相色譜;中藥;應(yīng)用

引言

高效液相色譜技術(shù)是一種重要的分離分析方法，于20世紀(jì)60年代末在經(jīng)典液相柱色譜的基礎(chǔ)上引進(jìn)氣相色譜的理論與技術(shù)，采用高壓輸液泵、高效固定相和高靈敏度的檢測(cè)器并加以改進(jìn)而發(fā)展形成。HPLC可分析高沸點(diǎn)、難揮發(fā)和對(duì)熱不穩(wěn)定的化合物，離子型化合物和高聚物乃至生物大分子等物質(zhì)。HPLC具有分離效能高、分析速度快、靈敏度高、色柱可反復(fù)使用、流動(dòng)相可選擇范圍寬、流出組易收集、操作自動(dòng)化、適用范圍廣和安全的優(yōu)點(diǎn)。

1高效液相色譜在中藥研究中的應(yīng)用

1.1在中藥含量測(cè)定方面的應(yīng)用

中藥材及中成藥的成分十分復(fù)雜，其有效成分不一，對(duì)不同藥物，其活性成分可能是單一的，也可能有多種成分共同作用，這就對(duì)控制藥品質(zhì)量提出了較高的要求。傳統(tǒng)的薄層色譜分析方法在精密度，準(zhǔn)確度和重現(xiàn)性方面都不能滿足中藥現(xiàn)代化的需求。高效液相色譜法以其建立含量測(cè)定方法簡(jiǎn)便易行、結(jié)果準(zhǔn)確可靠、重現(xiàn)性好、便于對(duì)各類藥物進(jìn)行質(zhì)量控制等眾多優(yōu)點(diǎn)，逐漸成為中藥材及各類制劑含量測(cè)定的首選方法。段啟等采用高效液相色譜法測(cè)定不同產(chǎn)地梔子中藏紅花素的含量所建立的方法，為中藥梔子的質(zhì)量評(píng)價(jià)提供了科學(xué)依據(jù)。在中成藥制劑方面，黃權(quán)芳等建立的壯藥清熱顆粒中木犀草素的含量測(cè)定方法，加樣回收率較高，重現(xiàn)性好，為其質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)化提供了參考資料。阮桂平等建立的HPLC可同時(shí)測(cè)定珠黃吹喉散中兩種有效成分兒茶素和鹽酸小檗堿的含量，可用于該制劑的質(zhì)量控制。

1.2在中藥指紋圖譜中的應(yīng)用

利用I-WLe技術(shù)進(jìn)行中藥的標(biāo)準(zhǔn)化，建立藥材或中成藥特征的色譜或光譜的圖譜是一種有效的方法。如在對(duì)中藥山茱萸藥材的括紋圖譜的研究中，采用相關(guān)系數(shù)法計(jì)算不同樣品指紋圖譜之問(wèn)相似度，結(jié)果表明指紋圖譜相似度大小與藥材品質(zhì)有關(guān)。

1.3在中藥炮制中的應(yīng)用

用化學(xué)分析方法來(lái)研究中藥炮制機(jī)理是中藥炮制研究的主要手段。近幾年來(lái)，HPLC法在中藥炮制研究中的應(yīng)用也有很大發(fā)展。賈天柱等采用高效液相法對(duì)肉豆蔻及其炮制品揮發(fā)油中肉豆蔻醚、黃樟醚進(jìn)行了測(cè)定。此法快速、準(zhǔn)確地證明肉豆蔻醚在炮制后有不同程度的降低，從而使毒性降低，闡明了炮制機(jī)理。趙淑杰等用HPLC法測(cè)定梔子產(chǎn)地加工炮制品酶解前后梔子甙含量，證明梔子經(jīng)蒸氣或沸水燙后，基本上起到了殺酶保甙的作用。王靜竹等，用HPLC法測(cè)定黃芪炮制品中黃芪甲甙含量，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，炮制對(duì)黃芪中黃芪甲甙含量的影響較大，從0.272mg/g～0.842mg/g不等，但總體上炮制品均比生品中黃芪甲甙的含量低。中醫(yī)認(rèn)為黃芪不同炮制品種，主治有所不同，可能的黃芪不同炮制過(guò)程中不同成分之間的消長(zhǎng)及新成分的生成有關(guān)，這些還有待于進(jìn)一步研究。傅梅紅等用HPLC法測(cè)定關(guān)白附生品及不同炮制品中次烏頭堿含量，結(jié)果表明姜礬煮、豆腐煮后次烏頭堿下降率為98%，而蒸4h后次烏頭堿下降率為100%，說(shuō)明了炮制解毒的機(jī)理是使主要毒性成分含量下降，此測(cè)定也給炮制工藝改進(jìn)工作打下了基礎(chǔ)。此外，楊江豐等采用柱切換高效液相色譜法測(cè)定了五加皮酒中橙皮甙及齊墩果酸的含量，該方法通過(guò)對(duì)不同性能的色譜柱或不同流動(dòng)相的選擇，能有效地把復(fù)雜制劑中的有效成分得到良好的分離，也可用前柱的富集作用測(cè)定中藥中微量活性物質(zhì)或選擇性地測(cè)定某個(gè)有效成分，為中藥研究提供了一個(gè)很好的實(shí)驗(yàn)方法。

1.4在中藥藥物動(dòng)力學(xué)中的應(yīng)用

趙淑紅等采用HPLC測(cè)定血漿藥物濃度，采用SHIM-PACKVPODS色譜柱，流動(dòng)相為甲醇乙腈水（5：10：85），檢測(cè)波長(zhǎng)為271nm，流速1.0Ml/min，用DAS軟件計(jì)算藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)。通過(guò)此方法，研究了秦艽中龍膽苦苷在家兔體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)規(guī)律并建立了家兔血漿中龍膽苦苷的HPLC檢測(cè)方法。賈巍等用HPLC測(cè)大鼠血漿中紅景天苷的濃度，色譜柱AlltimaC18柱（150mm×4.6mm，5m），流動(dòng)相為甲醇水（20：80），柱溫室溫，流速1.0mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)275nm，應(yīng)用WinNolin藥物動(dòng)力學(xué)軟件處理實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，并探討在大鼠體內(nèi)紅景天苷的藥物動(dòng)力學(xué)過(guò)程，研究為紅景天的新藥設(shè)計(jì)、劑型評(píng)價(jià)及臨床應(yīng)用提供了科學(xué)的依據(jù)。

2高效液相色譜在中藥分析中的應(yīng)用前景

中藥研究的大趨勢(shì)是全成分分析，通過(guò)對(duì)從單味藥到復(fù)方的不同配伍、煎煮時(shí)間等的研究，才能發(fā)現(xiàn)中藥中化學(xué)成分的變化規(guī)律，找到中藥機(jī)理之間的有機(jī)聯(lián)系。中藥成分繁多，且各種成分的性質(zhì)遍布所有極性段、酸堿范圍。實(shí)現(xiàn)多成分分析的最簡(jiǎn)單途徑即在一根足夠長(zhǎng)的色譜柱上，采用溫和的流動(dòng)相，在足夠久的時(shí)間內(nèi)洗脫。但這與現(xiàn)代分析要求的簡(jiǎn)便快速相違。通過(guò)大量的應(yīng)用研究表明，高效毛細(xì)管電泳在分析中藥成分，尤其在分析高極性化學(xué)成分方面有較大優(yōu)勢(shì)，在分析大量的復(fù)方制劑方面顯示了較高的能力。由于毛細(xì)管幾乎不會(huì)出現(xiàn)高效液相色譜分析中常出現(xiàn)的柱床污染現(xiàn)象，而且用過(guò)的毛細(xì)管柱只需很短的時(shí)間進(jìn)行沖洗后，即可以進(jìn)行第二個(gè)樣品的分析，快速高效且分辨率很高。新興的毛細(xì)管電色譜是集高效液相色譜和毛細(xì)管電泳優(yōu)勢(shì)于一身的一種新型電分離微柱液相色譜技術(shù)，它是將高效液相色譜的多種填料微粒移到毛細(xì)管中，以樣品與固定相間的相互作用作為分離機(jī)制，以電滲流為流動(dòng)相驅(qū)動(dòng)力的色譜過(guò)程。最近，一些先進(jìn)的檢測(cè)儀器成功的用在了高效液相色譜分析法上，使得高效液相色譜的應(yīng)用更廣泛，并充分利用高效快速、選擇性好、靈敏度高等優(yōu)點(diǎn)，建立更加系統(tǒng)的成分分析方法。通過(guò)與質(zhì)譜聯(lián)用、梯度洗脫、柱切換技術(shù)、配合先進(jìn)的檢測(cè)技術(shù)，以及與分子生物學(xué)、現(xiàn)代分子藥理學(xué)相結(jié)合，必將在中藥分析中發(fā)揮很大作用。

結(jié)束語(yǔ)

總而言之，HPLC是一種新興的技術(shù)手段，與許多傳統(tǒng)分析方法相比具有多方面的優(yōu)勢(shì)。目前，很多學(xué)者正致力于其在天然藥物方面更為廣泛的應(yīng)用研究。相信隨著科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，HPLC必將藥物研究領(lǐng)域展現(xiàn)更好的應(yīng)用前景，日后也會(huì)有更多先進(jìn)、快捷的分析方法不斷涌現(xiàn)及更新。