摘要：臨床上豬瘟病毒病在豬群中傳播感染與豬體內(nèi)免疫抗體水平有一定關(guān)系。為進(jìn)一步探討豬瘟免疫抗體和病原之間的關(guān)系，此次研究選擇使用ELISA檢測(cè)技術(shù)和RT-PCR檢測(cè)技術(shù)，分別對(duì)某規(guī)模化養(yǎng)殖場(chǎng)隨機(jī)采集的57頭母豬新鮮血清樣品和扁桃體樣品進(jìn)行了豬瘟抗體水平檢測(cè)和病毒檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果顯示豬瘟抗體陽性率為74.07%，離散度為41.79%，平均抗體阻斷率為54.38%，表明該養(yǎng)殖場(chǎng)的豬瘟抗體陽性率剛達(dá)到國(guó)家規(guī)定的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，抗體離散度顯著升高。臨床上豬體內(nèi)豬瘟病毒抗體水平和豬瘟病毒之間傳播存在一定聯(lián)系，但不論豬群豬瘟疫苗免疫是否合格，均會(huì)存在豬瘟感染的可能，某些野毒株會(huì)導(dǎo)致豬群內(nèi)產(chǎn)生大量患病豬，在今后養(yǎng)殖中，要為養(yǎng)殖戶制定更加詳細(xì)、針對(duì)化的防控方案，以提高免疫效果，降低疫病發(fā)生可能。

關(guān)鍵詞：豬瘟病毒;免疫抗體;病原檢測(cè)

中圖分類號(hào)：S858.28 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：B doi：10.3969/j.issn.2096-3637.2019.08.007

0 引言

豬瘟是由豬瘟病毒感染引起的一種急性熱性高度接觸性病毒性傳染性疾病，豬是該種病毒的唯一傳播宿主。不同年齡和品種的豬均可以感染該種病毒?；疾∝i和帶毒豬是養(yǎng)殖場(chǎng)的主要傳染源，患病豬和健康豬直接接觸能實(shí)現(xiàn)病毒的快速傳播蔓延。患病豬能直接通過口腔、鼻腔、分泌物和尿液糞便排毒。近年，我國(guó)動(dòng)物防疫高度重視豬瘟疫苗免疫接種，在很大程度上控制豬瘟疫病的流行和傳播。但近年，隨著疫苗免疫接種普及度不斷增加，豬瘟發(fā)病呈現(xiàn)新的流行特點(diǎn)，慢性豬瘟、非典型性豬瘟在生豬養(yǎng)殖主產(chǎn)區(qū)域時(shí)有發(fā)生，呈現(xiàn)地方流行或散發(fā)流行，豬瘟仍然是規(guī)模化養(yǎng)殖場(chǎng)需要重點(diǎn)防控的病毒性疾病。為進(jìn)一步掌握豬瘟免疫抗體和病毒檢測(cè)情況，選擇了一個(gè)曾經(jīng)發(fā)生過豬瘟的規(guī)?；B(yǎng)豬場(chǎng)，隨即采集了該養(yǎng)殖場(chǎng)57頭母豬的血清樣品和扁桃體樣品進(jìn)行豬瘟抗體水平檢測(cè)和病毒檢測(cè)，希望通過本次研究為規(guī)模化養(yǎng)豬場(chǎng)控制豬瘟疫病提供科學(xué)依據(jù)，現(xiàn)將具體研究?jī)?nèi)容介紹如下。

1 材料與方法

1.1 材料

選擇山東省某規(guī)?；B(yǎng)殖場(chǎng)養(yǎng)殖的57頭母豬，并保證57頭母豬進(jìn)行了豬瘟疫苗免疫，免疫期在1個(gè)月以上，采集57頭母豬的新鮮血清樣品和扁桃體樣品。本次抗體水平檢測(cè)與病毒檢測(cè)所選擇的試劑盒均來自于省級(jí)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室。在整個(gè)試驗(yàn)中，主要會(huì)應(yīng)用到96孔酶標(biāo)儀、冰箱、高速冷凍離心機(jī)、梯度PCR儀器、電泳儀、紫外線凝膠成像儀[1]。

1.2 方法

首先，豬瘟抗體水平檢測(cè)。豬瘟抗體水平檢測(cè)采用ELISA檢測(cè)技術(shù)，選擇使用豬瘟抗體檢測(cè)試劑盒，按照使用說明書的相關(guān)步驟進(jìn)行操作。如果抗體阻斷率不小于40%，表示抗體呈陽性;阻斷率不大于30%，表示抗體呈陰性。阻斷率為30%～40%，應(yīng)該在檢測(cè)結(jié)束后對(duì)該動(dòng)物進(jìn)行再次檢測(cè)。豬群中豬瘟抗體阻斷率超過40%達(dá)到100%，或者超過50%達(dá)到85%，離散度小于25%，表示所選擇的母豬群豬瘟抗體水平較高，免疫效果較好。離散度如果為25%～40%表示免疫效果一般。其次，豬瘟病毒檢測(cè)。豬瘟病毒檢測(cè)選擇使用RT-PCR檢測(cè)技術(shù)，試驗(yàn)操作過程按照試劑盒的使用說明書進(jìn)行。整個(gè)反應(yīng)過程包括94℃預(yù)變性4min，相同的溫度下變形45s，56℃環(huán)境退火45s，72℃環(huán)境下延伸1min，35個(gè)循環(huán)。72℃再延伸10min。整個(gè)試驗(yàn)操作結(jié)束后，將反應(yīng)物選擇使用1%的瓊脂糖凝膠進(jìn)行電泳處理，最后選擇使用紫外線凝膠成像儀對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行分析[2]。

2 結(jié)果

2.1 豬瘟抗體檢測(cè)

隨機(jī)采集曾經(jīng)發(fā)生過豬瘟的某規(guī)模化養(yǎng)殖場(chǎng)的57頭母豬的新鮮血清樣品，選擇使用相應(yīng)的檢測(cè)技術(shù)，對(duì)豬瘟抗體水平進(jìn)行了有效檢測(cè)檢測(cè)，結(jié)果顯示豬瘟抗體陽性率為74.07%，離散度為41.79%，平均抗體阻斷率為54.38%。按照國(guó)家豬瘟強(qiáng)制免疫抗體陽性率的相關(guān)要求，母豬群的抗體陽性率應(yīng)該維持在70%以上，這樣才能判定整個(gè)群體免疫合格。根據(jù)檢測(cè)結(jié)果可知，該養(yǎng)殖場(chǎng)的抗體免疫合格率剛達(dá)到合格標(biāo)準(zhǔn)，抗體離散度相對(duì)較高。

2.2 豬瘟病毒檢測(cè)

采用RT-PCR檢測(cè)技術(shù)對(duì)某養(yǎng)殖場(chǎng)的57頭母豬血液樣品和扁桃體樣品進(jìn)行豬瘟病毒檢測(cè)，如果在272bp目的條帶出現(xiàn)一條特異性的條帶，則表示該頭母豬存在豬瘟病毒感染情況[3]，根據(jù)檢測(cè)結(jié)果顯示有3頭母豬已經(jīng)感染了豬瘟病毒，豬瘟病毒陽性率為5.26%。因此，該養(yǎng)殖場(chǎng)的母豬雖然外表不存在任何發(fā)病情況，但存在豬瘟病毒隱性感染情況。由此也證明，隨著疫苗免疫接種頻率的增加，豬瘟呈現(xiàn)新的流行趨勢(shì)，呈現(xiàn)慢性發(fā)病或隱性發(fā)病，需要進(jìn)一步加強(qiáng)監(jiān)測(cè)，采取有效措施，切實(shí)防控豬瘟疫情的傳播蔓延。

2.3 豬瘟抗體水平與豬瘟病毒物流行傳播之間的關(guān)系

通過采取ELISA檢測(cè)技術(shù)和RT-PCR檢測(cè)技術(shù)，分別對(duì)某規(guī)?；B(yǎng)殖場(chǎng)隨機(jī)采集的57頭母豬新鮮血清樣品和扁桃體樣品進(jìn)行豬瘟抗體水平檢測(cè)和病毒檢測(cè)，進(jìn)一步分析了兩者之間的關(guān)系。結(jié)果表明，當(dāng)母豬群體中豬瘟抗體阻斷率不大于30%時(shí)，豬瘟病毒的陽性率為14.3%;豬瘟的抗體阻斷率為30%～90%時(shí)，豬瘟病毒的陽性感染率僅為2%;豬瘟抗體阻斷率大于90%，豬瘟病毒陽性率會(huì)超過60%。由此可知，在生豬養(yǎng)殖中，無論豬群是否進(jìn)行嚴(yán)格合格的疫苗免疫接種，豬群都可能感染豬瘟病毒。

3 討論

近年，隨著國(guó)家和地方對(duì)豬瘟免疫重視程度不斷提升，豬瘟疫情流行呈現(xiàn)新的流行特點(diǎn)，常呈現(xiàn)非典型經(jīng)過，發(fā)病率降低，很多豬呈現(xiàn)帶毒情況。在生豬養(yǎng)殖中，種豬帶毒是導(dǎo)致豬瘟在豬群中傳播蔓延的主要原因。在生豬養(yǎng)殖中做好豬瘟疫苗免疫接種，不管是對(duì)當(dāng)下還是將來防控豬瘟疫情都具有十分重要的現(xiàn)實(shí)意義。但隨著免疫接種頻率越來越高、接種越來越廣、防疫密度越來越強(qiáng)，在免疫次數(shù)增加和免疫劑量增加的情況下，豬瘟疫情仍未得到有效的控制，在很多地方常呈現(xiàn)地方流行和散發(fā)流行。近年，不少規(guī)?；B(yǎng)殖場(chǎng)的豬群免疫力呈現(xiàn)逐年下降的趨勢(shì)。本次研究所選擇的養(yǎng)殖場(chǎng)在2015年發(fā)生過一次豬瘟疫情，并進(jìn)行嚴(yán)格的封鎖、隔離撲殺和凈化處理，并對(duì)養(yǎng)殖戶進(jìn)行了宣傳教育，引導(dǎo)養(yǎng)殖戶定期對(duì)豬群進(jìn)行疫苗免疫接種。但試驗(yàn)結(jié)果顯示，該規(guī)模化養(yǎng)殖場(chǎng)母豬豬瘟抗體水平較低，抗體離散度相對(duì)較高，豬群個(gè)體之間的抗體水平存在很大差異性。

在生豬養(yǎng)殖中，為有效防范豬瘟疫情造成嚴(yán)重威脅，要指導(dǎo)發(fā)生過豬瘟疫情的養(yǎng)殖場(chǎng)進(jìn)行嚴(yán)格的凈化處理。對(duì)豬群凈化是以種豬凈化為主，這是防控豬瘟疫情傳播蔓延的有效手段。目前豬群凈化方法主要包括抗體水平檢測(cè)和病原檢測(cè)2種。抗體水平檢測(cè)就是通過對(duì)豬群的抗體水平進(jìn)行有效檢測(cè)，對(duì)首次檢測(cè)不合格的豬群進(jìn)行強(qiáng)化免疫接種，免疫接種4周后采集該豬群的新鮮血清進(jìn)行再次檢測(cè)，對(duì)于第2次檢測(cè)仍然不合格的豬將其淘汰處理。大量研究結(jié)果表明，對(duì)豬群中的毒株進(jìn)行有效的淘汰和凈化處理，可以顯著提高養(yǎng)殖場(chǎng)母豬的繁殖能力和仔豬的成活率。而病原檢測(cè)主要選擇血清檢測(cè)方法，將攜帶有病毒的豬群檢測(cè)出來直接淘汰處理，并對(duì)檢測(cè)為陰性的豬群進(jìn)行免疫強(qiáng)化。豬瘟病原檢測(cè)的方法多種多樣，主要包括熒光檢測(cè)法、RT-PCR檢測(cè)法。另外，大量研究結(jié)果表明處于隱性感染的母豬或持續(xù)感染豬瘟病毒會(huì)干擾母豬集體疫苗免疫效果，影響疫苗對(duì)動(dòng)物機(jī)體的保護(hù)力。

4 結(jié)束語

母豬感染豬瘟病毒引起抗體水平變化是一個(gè)十分復(fù)雜的過程，需要進(jìn)一步加強(qiáng)研究，深入探究抗體水平和病原感染之間的關(guān)系，以進(jìn)一步制定針對(duì)性的防控措施，降低豬瘟疫病傳播流行概率，提高養(yǎng)殖效益。

參考文獻(xiàn)

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[2]王興輝，蒙炳超，龔才偉，等.黔南州某種豬場(chǎng)豬瘟免疫凈化探索[J].中國(guó)畜禽種業(yè)，2017，13（8）：94-95.

[3]龔冬仙，周燈榮.規(guī)模豬場(chǎng)豬瘟免疫抗體的監(jiān)測(cè)結(jié)果與啟示[J].浙江畜牧獸醫(yī)，2002（3）：27.

作者簡(jiǎn)介：王篤華（1979-），女，山東諸城人，本科，獸醫(yī)師，研究方向：動(dòng)物疚病診療。