姚榮成 劉韜 何波 楊仁華 沈志強(qiáng) 陳鵬

摘 要 目的：考察七參連濕疹膏對(duì)特應(yīng)性皮炎（AD）模型豚鼠的改善作用，并探討其可能機(jī)制。方法：將雌性豚鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組，模型對(duì)照組，基質(zhì)對(duì)照組（七參連濕疹膏基質(zhì)，1 g/kg），七參連濕疹膏低、中、高劑量組（0.5、1、2 g/kg）和丁酸氫化可的松乳膏組（0.5 g/kg），每組10只。以卵清蛋白為抗原，激發(fā)豚鼠皮膚變態(tài)反應(yīng)以復(fù)制AD模型。末次激發(fā)48 h后，正常對(duì)照組和模型對(duì)照組豚鼠涂以生理鹽水，基質(zhì)對(duì)照組豚鼠涂以七參連濕疹膏基質(zhì)，各給藥組豚鼠涂以相應(yīng)藥物；每天2次，連續(xù)14 d。記錄各組豚鼠給藥前后的紅斑、水腫、抓痕等癥狀評(píng)分；采用蘇木精-伊紅染色法觀察豚鼠皮膚組織形態(tài)學(xué)特征；采用TUNEL法檢測(cè)豚鼠皮膚組織角質(zhì)形成細(xì)胞凋亡情況；采用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法檢測(cè)豚鼠皮膚組織干擾素γ（IFN-γ）水平。結(jié)果：與正常對(duì)照組比較，模型對(duì)照組和基質(zhì)對(duì)照組豚鼠皮膚組織中均可見(jiàn)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)、表皮角化過(guò)度、棘層增厚等癥狀，其紅斑、水腫、抓痕評(píng)分及總評(píng)分和皮膚組織中IFN-γ水平均顯著升高，角質(zhì)形成細(xì)胞凋亡數(shù)均顯著減少（P<0.01）。與模型對(duì)照組和基質(zhì)對(duì)照組比較，各給藥組豚鼠上述癥狀均有不同程度的減輕，其中各給藥組豚鼠給藥后的紅斑、水腫、抓痕評(píng)分及總評(píng)分以及七參連濕疹膏中、高劑量組和丁酸氫化可的松乳膏組豚鼠皮膚組織中IFN-γ水平均顯著降低，且給藥組上述評(píng)分均顯著低于同組給藥前（P<0.05或P<0.01）；各給藥組豚鼠角質(zhì)形成細(xì)胞凋亡數(shù)均顯著增加（P<0.05或P<0.01）。結(jié)論：七參連濕疹膏對(duì)AD模型豚鼠具有一定的改善作用，這種作用可能與促進(jìn)角質(zhì)形成細(xì)胞凋亡、降低皮膚組織INF-γ水平有關(guān)。

關(guān)鍵詞 七參連濕疹膏；特應(yīng)性皮炎；癥狀評(píng)分；角質(zhì)形成細(xì)胞；干擾素γ；豚鼠；機(jī)制

Study on Improvement Effects of Qishenlian Eczema Cream on the Atopic Dermatitis Model Guinea Pigs

YAO Rongcheng1，LIU Tao2，HE Bo3，YANG Renhua3，SHEN Zhiqiang3，CHEN Peng3（1. Dept. of Drug and Equipment， Qujing First Peoples Hospital， Yunnan Qujing 655000， China； 2. Dept. of Pharmacy， Honghe Vocational College of Health， Yunnan Honghe 661100， China； 3. Pharmaceutical College ， Kunming Medical University/Yunnan Province Key Lab of Pharmacology for Natural Products， Kunming 650500， China）

ABSTRACT OBJECTIVE： To investigate the improvement effects of Qishenlian eczema cream on the atopic dermatitis （AD） model guinea pigs， and to investigate its possible mechanism. METHODS： Female guinea pigs were randomly divided into normal control group， model control group， matrix control group （Qishenlian eczema cream matrix， 1 g/kg）， Qishenlian eczema cream low-dose， medium-dose and high-dose groups （0.5， 1， 2 g/kg） and Hydrocortisone butyrate cream group （0.5 g/kg）， with 10 guinea pigs in each group. Using ovalbumin as antigen， the skin allergy of guinea pigs was stimulated to induce AD model. Forty-eight hours after the last excitation， guinea pigs were smeared with normal saline in normal control group and model control group， while those were smeared with Qishenlian eczema cream matrix in matrix control group， and administration groups were treated with relevant medicine， twice a day， for consecutive 14 d. The scores of erythema， edema and scratch before and after administration were recorded in each group. The morphological characteristics of skin were observed by HE staining. TUNEL method was used to detect the apoptosis of keratinocytes in skin tissue. The level of IFN-γ in skin lesions was detected by ELISA. RESULTS： Compared with normal control group， inflammatory cell infiltration， hyperkeratosis of epidermis and thickening of spinous layer were observed in skin tissue of guinea pigs in model control group and matrix control group； the scores of erythema， edema and scratch and their total score， the level of IFN-γ in skin tissue were increased significantly； the apoptosis number of keratinocytes was decreased significantly （P<0.01）. Compared with model control group and matrix control group， above symptoms of medication groups were relieved to different extents； the scores of erythema， edema and scratch and their total score after medication in medication groups， the level of IFN-γ in skin tissue in Qishenlian eczema cream medium-dose and high-dose groups and Hydrocortisone butyrate cream group were decreased significantly， and above scores in medication groups were significantly lower than before medication （P<0.05 or P<0.01）； the apoptosis number of keratinocytes was increased significantly in medication groups （P<0.05 or P<0.01）. CONCLUSIONS： Qishenlian eczema cream has certain improvement effect on AD model guinea pigs， the mechanism of which may be associated with promoting the keratinocyte apoptosis， reducing the level of INF-γ in skin tissue.

KEYWORDS Qishenlian eczema cream； Atopic dermatitis； Symptom score； Keratinocyte apoptosis； IFN-γ； Guinea pigs； Mechanism

濕疹（Eczema）是皮膚科臨床常見(jiàn)的一類(lèi)變態(tài)反應(yīng)性皮膚病，主要包括變應(yīng)性接觸性皮炎（Allergic contact dermatitis，ACD）、濕疹和特應(yīng)性皮炎（Atopic dermatitis，AD）。目前，學(xué)者普遍認(rèn)為濕疹是由機(jī)體內(nèi)、外因共同作用所致，且易反復(fù)發(fā)作[1-2]。其中，AD是由活化的T輔助淋巴細(xì)胞2（Th2）、嗜酸性粒細(xì)胞和肥大細(xì)胞之間復(fù)雜的相互作用所導(dǎo)致的，以炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)為主要機(jī)制，以反復(fù)發(fā)作、多形性皮損、皮膚干燥、劇烈瘙癢等為基本臨床特征的炎癥性皮膚病，其發(fā)病可能與遺傳因素所致的免疫失常、皮膚屏障功能障礙以及環(huán)境因素等密切相關(guān)[3-4]。AD的臨床治療主要包括含糖皮質(zhì)激素、鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶抑制劑的外用藥物治療和含抗組胺藥、抗炎癥介質(zhì)藥物、糖皮質(zhì)激素及免疫抑制劑的系統(tǒng)治療[5]。但上述藥物可能造成嗜睡、口干、乏力、皮膚色素沉著及皮膚萎縮等不良反應(yīng)，長(zhǎng)期應(yīng)用可能導(dǎo)致耐藥現(xiàn)象的發(fā)生，且存在一定的停藥反應(yīng)（如皮損加重、激素依耐性皮炎等），導(dǎo)致其臨床應(yīng)用受到極大限制[6-7]。

中醫(yī)認(rèn)為，濕疹的發(fā)病主因?yàn)椤帮L(fēng)”“濕”“熱”[8-9]。有研究指出，中醫(yī)藥對(duì)濕疹的治療獨(dú)具優(yōu)勢(shì)，能通過(guò)多種途徑祛風(fēng)利濕、清熱潤(rùn)燥、抗過(guò)敏，具有療效好、副作用少的優(yōu)點(diǎn)，受到學(xué)者的普遍關(guān)注[9]。七參連濕疹膏由黃連、苦參、蒼術(shù)、重樓、三七、白鮮皮、爐甘石、花椒、冰片、甘草等藥材組成，具有清熱燥濕、活血消腫、祛風(fēng)止癢之功效，臨床用于治療因風(fēng)濕熱毒瘀阻所致的AD，效果肯定[10-11]，但其基礎(chǔ)研究證據(jù)有限。為此，本研究以卵清蛋白（OVA）誘導(dǎo)的AD模型豚鼠為對(duì)象，對(duì)七參連濕疹膏的藥效學(xué)進(jìn)行評(píng)價(jià)，并探索其可能的作用機(jī)制，旨在為該藥的臨床應(yīng)用及機(jī)制明確提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料

1.1 儀器

MK3型酶標(biāo)儀（美國(guó)Thermo Fisher Scientific公司）；RM2235型石蠟切片機(jī)（德國(guó)Leica公司）；CX21 FS1型光學(xué)顯微鏡（日本Olympus公司）；03024R型高速冷凍型離心機(jī)（美國(guó)Scilogex公司）；Scientz-950E型超聲波破碎儀（寧波新芝生物科技股份有限公司）。

1.2 藥品與試劑

七參連濕疹膏（批準(zhǔn)文號(hào)：國(guó)藥準(zhǔn)字B20020421，批號(hào)：20160402，規(guī)格：15 g/支）；七參連濕疹膏基質(zhì)（由氫氧化鉀、三乙醇胺、乙醇、硬脂酸、甘油、硬脂醇、液體石蠟等組成，批號(hào)：20160402）均購(gòu)自云南藍(lán)綠康藥業(yè)有限公司；丁酸氫化可的松乳膏[陽(yáng)性對(duì)照，天津金輝藥業(yè)有限公司，批準(zhǔn)文號(hào)：國(guó)藥準(zhǔn)字H10940095，批號(hào)：20151002，規(guī)格：0.1%（10 g ∶ 10 mg）]；OVA（中國(guó)醫(yī)藥集團(tuán)上?；瘜W(xué)試劑公司，批號(hào)：F20010702，純度：98%）；干擾素γ（IFN-γ）酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（ELISA）檢測(cè)試劑盒（美國(guó)RayBiotech公司，批號(hào)：0828150131）；TUNEL試劑盒（武漢博士德生物工程有限公司，批號(hào)：07E16BM）；十二烷基硫酸鈉（SDS）（美國(guó)Amresco公司，批號(hào)：151-21-3）；醫(yī)用白凡士林（甘肅潤(rùn)康藥業(yè)有限公司，批號(hào)：20140604）；蘇木精-伊紅（HE）染色試劑盒（北京雷根生物技術(shù)有限公司，批號(hào)：201550730）；DAB顯色試劑盒（北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司，批號(hào)：60882801）；RIPA裂解液（碧云天生物技術(shù)公司，批號(hào)：P0013B）；其余試劑均為分析純，水為蒸餾水。

1.3 動(dòng)物

普通級(jí)雌性豚鼠，2月齡，體質(zhì)量320～350 g，由昆明醫(yī)科大學(xué)提供，動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（滇）K2015-0005。所有動(dòng)物均于通風(fēng)環(huán)境中飼養(yǎng)，自由飲食飲水，適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

2 方法

2.1 分組、造模與給藥

將豚鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組，模型對(duì)照組，基質(zhì)對(duì)照組（七參連濕疹膏基質(zhì)，1 g/kg），七參連濕疹膏低、中、高劑量組[0.5、1、2 g/kg；劑量根據(jù)本課題組前期皮膚刺激性和過(guò)敏性試驗(yàn)結(jié)果（安全劑量≤2 g/kg）設(shè)定]和丁酸氫化可的松乳膏組（0.5 g/kg；該藥藥品說(shuō)明書(shū)并未注明外用劑量，本研究劑量根據(jù)均勻涂滿(mǎn)致敏皮膚區(qū)域預(yù)估），每組10只。除正常對(duì)照組外，其余各組豚鼠均按文獻(xiàn)[12]方法復(fù)制豚鼠AD模型：在每只動(dòng)物背部?jī)蓚?cè)去毛，每側(cè)面積約為2 cm×3 cm。豚鼠腹腔注射戊巴比妥鈉（50 mg/kg）進(jìn)行麻醉，在左側(cè)去毛處皮內(nèi)注射OVA-氫氧化鋁溶液（每10 mL生理鹽水中含OVA 10 μg、氫氧化鋁0.5 mg）100 μL。注射1周后，用紗布（3 cm×4 cm）將10%OVA+10%SDS+30%凡士林+50%水（g/mL，下同）敷于去毛處，保持48 h；注射后3周后，用紗布（3 cm×4 cm）將10%OVA+5%SDS+37%凡士林+48%水敷于去毛處，保持48 h；休息1周后，用雙層紗布（1 cm×1 cm）將10%OVA+70%凡士林+20%水敷于去毛處，保持24 h，進(jìn)行抗原激發(fā)反應(yīng)。右側(cè)去毛處用不含OVA、SDS、氫氧化鋁、凡士林的濕紗布同法處理，作為自身對(duì)照。末次激發(fā)48 h后，對(duì)致敏的左側(cè)皮膚進(jìn)行處理：正常對(duì)照組和模型對(duì)照組豚鼠均涂以生理鹽水（1 mL/kg），基質(zhì)對(duì)照組豚鼠涂以七參連濕疹膏基質(zhì)，各給藥組豚鼠均涂以相應(yīng)藥物；每天2次，連續(xù)14 d。

2.2 癥狀評(píng)分

造模后，分別于給藥前后按如下標(biāo)準(zhǔn)對(duì)各組豚鼠致敏側(cè)的皮膚癥狀進(jìn)行評(píng)分[12]——（1）紅斑：無(wú)為0分，輕微紅斑為1分，明顯紅斑但無(wú)痂皮為2分，中、重度紅斑伴輕、中度痂皮為3分，重度紅斑伴重度痂皮為4分；（2）水腫：無(wú)為0分，輕度為1分，中、重度為2分；（3）抓痕：無(wú)為0分，有為1分。總評(píng)分為上述各項(xiàng)評(píng)分之和。

2.3 皮膚組織形態(tài)學(xué)觀察

末次用藥24 h后，處死豚鼠，取致敏側(cè)（正常對(duì)照組取同側(cè)）皮膚組織適量，用10%中性福爾馬林溶液固定24 h后，切片（厚度約4 μm），經(jīng)HE染色后，使用光學(xué)顯微鏡觀察各組豚鼠皮膚組織的病理學(xué)變化和炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)情況[鏡下炎癥細(xì)胞（主要是淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞）呈點(diǎn)狀，以藍(lán)色為主。其中，淋巴細(xì)胞小而圓，胞漿稀少，核呈紫藍(lán)色；單核細(xì)胞體積大，胞漿淡紅，核卵呈圓形、深藍(lán)色]。

2.4 皮膚組織角質(zhì)形成細(xì)胞凋亡情況檢測(cè)

采用TUNEL法檢測(cè)。取各組豚鼠致敏側(cè)（正常對(duì)照組取同側(cè)）皮膚組織適量，用10%中性福爾馬林溶液固定24 h后，切片（厚度約5 ?m），經(jīng)常規(guī)貼片、烤片后，行常規(guī)脫蠟、水化，用TUNEL試劑盒染色，再用DAB顯色，以水終止顯色反應(yīng)，行常規(guī)乙醇梯度脫水、二甲苯透明，中性樹(shù)膠封片。于光學(xué)顯微鏡下觀察并拍照，直接計(jì)數(shù)視野中TUNEL染色陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)[呈深棕褐色的細(xì)胞即為凋亡陽(yáng)性角質(zhì)形成細(xì)胞（胞核著色，呈圓形）]。每個(gè)組織切片取4個(gè)視野分別進(jìn)行計(jì)數(shù)后，取均值作為該切片的TUNEL陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)；每個(gè)樣本取3張組織切片進(jìn)行上述計(jì)數(shù)后，取均值作為該樣本的TUNEL陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)。

2.5 皮膚組織中IFN-γ水平檢測(cè)

采用ELISA法檢測(cè)。取各組豚鼠致敏側(cè)（正常對(duì)照組取同側(cè)）皮膚組織適量，用眼科剪剪碎，于液氮下研磨后，加入RIPA裂解液800 μL，于冰浴下超聲（功率：100 W，頻率：20 kHz）勻漿30 s，以3 000 r/min離心20 min后，收集上清液，以酶標(biāo)儀于450 nm波長(zhǎng)處檢測(cè)IFN-γ水平，嚴(yán)格按照相應(yīng)試劑盒說(shuō)明書(shū)操作。

2.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 21.0 軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以x±s表示，組間比較采用單因素方差分析（One-way ANOVA）或LSD檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 各組豚鼠紅斑、水腫、抓痕評(píng)分及總評(píng)分比較

給藥前，模型對(duì)照組、基質(zhì)對(duì)照組和各給藥組豚鼠的紅斑、水腫、抓痕評(píng)分及總評(píng)分均較正常對(duì)照組顯著升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）；給藥后，各給藥組豚鼠的上述評(píng)分均較模型對(duì)照組和基質(zhì)對(duì)照組顯著降低，且顯著低于同組給藥前，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05或P<0.01），詳見(jiàn)表1。

3.2 各組豚鼠皮膚組織形態(tài)學(xué)觀察

正常對(duì)照組豚鼠表皮無(wú)增厚，真皮下層未見(jiàn)毛細(xì)血管擴(kuò)張或炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，真皮層結(jié)構(gòu)規(guī)整，無(wú)明顯細(xì)胞間或細(xì)胞內(nèi)水腫。模型對(duì)照組豚鼠真皮淺層小血管周?chē)梢?jiàn)輕度以淋巴細(xì)胞為主的炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，毛細(xì)血管數(shù)量增多，內(nèi)皮細(xì)胞腫脹并增生，皮膚表皮角化過(guò)度，棘層肥厚?；|(zhì)對(duì)照組豚鼠皮膚組織被覆鱗狀上皮，角化過(guò)度，表皮層的顆粒層及棘層增厚，真皮淺層有慢性炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，以淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞為主。各給藥組豚鼠皮膚上述癥狀均有不同程度的改善，其中七參連濕疹膏高劑量組和丁酸氫化可的松組改善更明顯，詳見(jiàn)圖1。

3.3 各組豚鼠皮膚組織角質(zhì)形成細(xì)胞凋亡情況比較

正常對(duì)照組豚鼠皮膚組織中可見(jiàn)著色明顯的圓形陽(yáng)性染色細(xì)胞，且伴有核固縮；模型對(duì)照組和基質(zhì)對(duì)照組豚鼠皮膚組織中的角質(zhì)形成細(xì)胞增殖明顯增多、凋亡明顯減少，其陽(yáng)性染色細(xì)胞數(shù)均較正常對(duì)照組顯著減少，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）；各給藥組豚鼠皮膚組織中角質(zhì)形成細(xì)胞凋亡明顯增多，其陽(yáng)性染色細(xì)胞數(shù)均較模型對(duì)照組和基質(zhì)對(duì)照組顯著增加，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05或P<0.01），詳見(jiàn)圖2、表2。

3.4 各組豚鼠皮膚組織中IFN-γ水平比較

與正常對(duì)照組比較，模型對(duì)照組和基質(zhì)對(duì)照組豚鼠皮膚組織中IFN-γ水平均顯著升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）；與模型對(duì)照組和基質(zhì)對(duì)照組比較，七參連濕疹膏中、高劑量組和丁酸氫化可的松乳膏組豚鼠皮膚組織中IFN-γ水平均顯著降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05或P<0.01），詳見(jiàn)表2。

4 討論

AD動(dòng)物模型包括OVA激發(fā)豚鼠模型、NC/Nga小鼠模型、半抗原誘導(dǎo)小鼠模型、轉(zhuǎn)基因和基因敲除小鼠模型，其中OVA激發(fā)豚鼠模型較為常用[13]。OVA是雞蛋清中所含的主要蛋白質(zhì)，是AD病情加重的主要變應(yīng)原，其腹腔注射、皮膚接觸或霧化吸入均能誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物發(fā)生AD[14]；此外，OVA反復(fù)激發(fā)豚鼠AD模型的病理基礎(chǔ)與該癥的發(fā)病機(jī)制較為一致[15]。因此，本研究選擇OVA誘導(dǎo)AD模型豚鼠作為對(duì)象。目前，臨床就糖皮質(zhì)激素外用治療濕疹已達(dá)成共識(shí)，臨床證據(jù)表明，丁酸氫化可的松乳膏的臨床療效確切，且安全性較高[16-17]，故本研究選用該藥作為陽(yáng)性對(duì)照藥物。

七參連濕疹膏組方中的黃連、苦參、蒼術(shù)、白鮮皮可清熱燥濕、瀉火解毒、殺菌止癢，重樓、三七可清熱消腫、活血止痛，爐甘石可收斂生肌，花椒、冰片可殺蟲(chóng)止痛，甘草可緩急止痛、調(diào)和諸藥；諸藥合用，共奏清熱燥濕、活血消腫、祛風(fēng)止癢之功效[10-11]。本研究考察了七參連濕疹膏對(duì)AD豚鼠模型的改善作用，結(jié)果顯示，造模后、給藥前，模型對(duì)照組、基質(zhì)對(duì)照組和各給藥組豚鼠皮膚組織均可見(jiàn)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)、表皮角質(zhì)化過(guò)度、棘層增厚等癥狀，其紅斑、水腫、抓痕評(píng)分及總評(píng)分均較正常對(duì)照組顯著升高，提示模型復(fù)制成功。經(jīng)不同劑量七參連濕疹膏或丁酸氫化可的松乳膏處理后，各給藥組豚鼠皮膚組織上述癥狀均有不同程度的好轉(zhuǎn)，且七參連濕疹膏高劑量組和丁酸氫化可的松組改善更明顯；各給藥組豚鼠紅斑、水腫、抓痕評(píng)分及總評(píng)分均較模型對(duì)照組和基質(zhì)對(duì)照組顯著降低，且顯著低于同組治療前，提示七參連濕疹膏對(duì)OVA誘發(fā)的AD具有一定的治療作用。

濕疹的發(fā)生發(fā)展與角質(zhì)形成細(xì)胞的凋亡密切相關(guān)，該癥的主要病變部位為皮膚表皮，角質(zhì)形成細(xì)胞則是表皮的主要組成細(xì)胞。當(dāng)AD發(fā)生時(shí)，皮膚組織中的T淋巴細(xì)胞被激活，后者產(chǎn)生的炎癥細(xì)胞因子可通過(guò)殺傷介質(zhì)誘導(dǎo)角質(zhì)形成細(xì)胞凋亡，從而啟動(dòng)角質(zhì)形成細(xì)胞的修復(fù)機(jī)制，使得該細(xì)胞快速增殖，最終導(dǎo)致AD的表皮、棘層增厚；與此同時(shí)，過(guò)度增生的角質(zhì)形成細(xì)胞可分泌多種細(xì)胞因子，使得局部組織再次損傷，進(jìn)一步加重AD所致的炎癥反應(yīng)，形成惡性循環(huán)[18-19]。本研究結(jié)果顯示，正常對(duì)照組豚鼠皮膚組織中可見(jiàn)明顯的著色陽(yáng)性細(xì)胞，且伴有核固縮，提示角質(zhì)形成細(xì)胞呈凋亡狀態(tài)；模型對(duì)照組和基質(zhì)對(duì)照組豚鼠皮膚組織中的陽(yáng)性染色細(xì)胞顯著減少，提示角質(zhì)形成細(xì)胞增殖明顯增多、凋亡明顯減少；經(jīng)不同劑量七參連濕疹膏處理后，各給藥組豚鼠皮膚組織中陽(yáng)性染色細(xì)胞均較模型對(duì)照組和基質(zhì)對(duì)照組顯著增加，提示七參連濕疹膏可抑制角質(zhì)形成細(xì)胞增殖、促進(jìn)其凋亡。

AD是由T細(xì)胞介導(dǎo)的遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)，以Ⅳ型變態(tài)反應(yīng)為主，其中Th1/Th2的動(dòng)態(tài)失衡導(dǎo)致的IFN-γ等細(xì)胞因子分泌紊亂在AD的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮著重要作用[20-21]。IFN-γ不僅能促進(jìn)Th1細(xì)胞的成熟、抑制Th2細(xì)胞的增殖，同時(shí)還能抑制B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生免疫球蛋白E（IgE），從而減少超敏反應(yīng)的發(fā)生[22]。由此可見(jiàn)，IFN-γ是反映Th1/Th2細(xì)胞免疫應(yīng)答參與程度及平衡狀態(tài)的重要指標(biāo)之一。有臨床研究表明，AD患者血清中IFN-γ水平升高，Th1細(xì)胞亞群功能明顯增強(qiáng)，并伴有Ⅳ型變態(tài)反應(yīng)的臨床和病理表現(xiàn)[23]。本研究結(jié)果顯示，模型對(duì)照組和基質(zhì)對(duì)照組豚鼠皮膚組織中IFN-γ水平較正常對(duì)照組顯著升高，提示AD可能促發(fā)并維持了機(jī)體內(nèi)炎癥細(xì)胞的浸潤(rùn)。經(jīng)給藥處理后，七參連濕疹膏中、高劑量組和丁酸氫化可的松乳膏組豚鼠皮膚組織中IFN-γ水平均較模型對(duì)照組和基質(zhì)對(duì)照組顯著降低，提示七參連濕疹膏可降低AD模型豚鼠體內(nèi)炎癥細(xì)胞因子水平。

綜上所述，七參連濕疹膏對(duì)AD模型豚鼠具有一定的改善作用，這種作用可能與促進(jìn)角質(zhì)形成細(xì)胞凋亡、降低皮膚組織IFN-γ水平有關(guān)。但AD的發(fā)病機(jī)制復(fù)雜且誘發(fā)因素較多，具體作用機(jī)制仍有待后續(xù)研究進(jìn)一步深入探索。

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（收稿日期：2018-10-08 修回日期：2019-04-02）

（編輯：張?jiān)拢?/p>