時(shí)光麗

河南省中醫(yī)院(河南中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院)放射科，河南省鄭州市 450000

胰腺癌是一種常見(jiàn)的消化系統(tǒng)惡性腫瘤，早期發(fā)現(xiàn)率低，僅Ⅰ期與少數(shù)Ⅱ期患者可通過(guò)手術(shù)治療，但術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移率較高，預(yù)后較差。隨著生物學(xué)理論與技術(shù)的發(fā)展，抗血管生成治療等生物療法成為目前胰腺癌臨床治療的重要方法，同時(shí)，療效的動(dòng)態(tài)化評(píng)估是提高治療效果的重要途徑[1]。能譜CT具有物質(zhì)分離技術(shù)，能夠?qū)⑺?、鈣等不同基物質(zhì)進(jìn)行利用，獲取碘基圖像，并對(duì)相關(guān)物質(zhì)濃度值進(jìn)行定量分析，成為目前評(píng)估胰腺癌臨床療效的一種有效方法[2]。本研究通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，評(píng)估能譜CT成像對(duì)于胰腺癌抗血管治療效果的價(jià)值，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料 選擇22只BALB/c裸鼠[北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司，許可證號(hào):SCXK(京)2009-0003]作為試驗(yàn)動(dòng)物，均為雄性，周齡6～8周，體重18～20g，于無(wú)特定病原體(SPF)級(jí)屏障系統(tǒng)環(huán)境下進(jìn)行飼養(yǎng)，溫度始終維持在23～25℃，濕度始終維持在45%～50%，嚴(yán)格消毒整個(gè)飼養(yǎng)環(huán)境，人工控制12h晝夜變換變換光照，所食飼料與飲水均進(jìn)行消毒喂養(yǎng)，所有實(shí)驗(yàn)操作器材、相關(guān)用品均嚴(yán)格進(jìn)行滅菌處理，實(shí)驗(yàn)全過(guò)程均嚴(yán)格遵循無(wú)菌操作原則。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法 細(xì)胞培養(yǎng)方法：用含有10%胎牛血清的DMEM高糖培養(yǎng)基對(duì)人胰腺癌細(xì)胞株BxPC-3(上海奧陸生物科技有限公司)進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)，置于恒溫孵育箱內(nèi)進(jìn)行單層培養(yǎng)，培養(yǎng)環(huán)境設(shè)置：溫度37℃，CO2濃度5%，濕度飽和。

細(xì)胞接種方法：細(xì)胞株進(jìn)入對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期時(shí)，用0.25%濃度的胰蛋白酶溶液給予傳代消化，洗滌離心處理，計(jì)數(shù)，于裸鼠腋窩皮下接種0.1ml混懸液，混懸液中含單細(xì)胞量為1.0×107，觀察腫瘤生長(zhǎng)情況，每7d用游標(biāo)卡尺精確測(cè)量腫瘤大小。

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組方法：22只小鼠于種植腫瘤細(xì)胞14d后，隨機(jī)選擇20只荷瘤鼠并按照隨機(jī)數(shù)表法分為觀察組與對(duì)照組各10只。觀察組于腫瘤種植后15d、22d，向腹腔內(nèi)注入含有貝伐珠單抗的0.1ml生理鹽水溶液，確保每只小鼠貝伐珠單抗劑量為10mg/kg。對(duì)照組則僅給予生理鹽水注射。兩組小鼠均于腫瘤種植后28d給予能譜CT掃描。

能譜CT檢查方法：采用GE Discovery CT750 HD 寶石能譜 CT進(jìn)行檢查。檢查前消毒裸鼠，并向腹腔內(nèi)注射濃度為6%的水合氯醛溶液，注射劑量100mg/kg，裸鼠麻醉后，將裸鼠以俯臥位固定于動(dòng)物固定架上，固定其軀干與四肢，注意保暖。啟動(dòng)能譜掃描模式(GSI)，掃描全部腫瘤組織與肝臟組織，管電流600mA，管電壓80kV與140kV，層厚0.625mm，螺距0.984，探測(cè)器0.625mm×64，F(xiàn)OV 250×250，矩陣512×512，螺旋掃描速度0.6s/360°。常規(guī)平掃后，經(jīng)尾靜脈采用高壓注射器注入含濃度300mI/ml碘海醇的生理鹽水0.08ml，注射速率0.02ml/s，在4s內(nèi)完成注射，注射后10s、20s、60s時(shí)，分別給予增強(qiáng)掃描，同樣掃描腫瘤組織與肝臟組織，掃描參數(shù)設(shè)置與平掃相同。

圖像處理方法：所有圖像均上傳至GE AW4.4工作站，挑選腫瘤顯示最佳KeV圖像，在圖像中的腫瘤最大徑層面上，分別于腫瘤邊緣區(qū)、中心區(qū)、肝臟內(nèi)非血管區(qū)域設(shè)置大小相同的ROI區(qū)域，避開(kāi)壞死灶、鈣化灶、出血區(qū)。連續(xù)選擇2個(gè)層面ROI，取2次的平均值，記錄ROI內(nèi)碘含量，根據(jù)碘基圖計(jì)算，計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)化碘含量值，計(jì)算公式為標(biāo)準(zhǔn)化碘含量值=測(cè)得的腫瘤組織碘含量/同期相肝臟碘含量。

染色處理：腫瘤種植第28天行能譜CT檢查后，頸椎脫臼法處死裸鼠，提取裸鼠體內(nèi)腫瘤組織，給予HE染色與腫瘤微血管密度(MVD)染色處理。將染色后的切片置于×100倍鏡下觀察并明確腫瘤內(nèi)血管密度最大處，再置于×200倍鏡對(duì)5個(gè)視野內(nèi)的微血管進(jìn)行計(jì)數(shù)，取5次計(jì)數(shù)的平均值。一個(gè)微血管就是在鏡下顯示為棕黃色或棕褐色的一個(gè)內(nèi)皮細(xì)胞或內(nèi)皮細(xì)胞叢，當(dāng)結(jié)構(gòu)不相連時(shí)，其分支結(jié)構(gòu)也對(duì)應(yīng)一個(gè)血管計(jì)數(shù)，但不對(duì)厚壁血管或超過(guò)50μm管徑的血管進(jìn)行計(jì)數(shù)。

1.3 觀察指標(biāo) 比較三期掃描時(shí)兩組裸鼠的腫瘤邊緣區(qū)、腫瘤中心區(qū)的碘含量標(biāo)準(zhǔn)化值，分析三期增強(qiáng)掃描腫瘤組織碘含量與MVD的相關(guān)性。

2 結(jié)果

2.1 兩組裸鼠三期增強(qiáng)掃描時(shí)的腫瘤邊緣區(qū)與腫瘤中心區(qū)碘含量標(biāo)準(zhǔn)化值 兩組實(shí)驗(yàn)裸鼠三期增強(qiáng)掃描時(shí)的腫瘤邊緣區(qū)碘含量標(biāo)準(zhǔn)化值均顯著高于腫瘤中心區(qū)(P<0.05)；觀察組腫瘤邊緣區(qū)、腫瘤中心區(qū)三期增強(qiáng)掃描碘含量標(biāo)準(zhǔn)化值均顯著低于對(duì)照組相應(yīng)數(shù)值(P<0.05)，見(jiàn)表1。

表1 兩組裸鼠三期增強(qiáng)掃描時(shí)的腫瘤邊緣區(qū)與中心區(qū)碘含量標(biāo)準(zhǔn)化值

注：觀察組與對(duì)照組腫瘤中心區(qū)、邊緣區(qū)的三期增強(qiáng)掃描值比較，*P<0.05，#P<0.05。

2.2 兩組裸鼠MVD值比較 染色處理后微血管計(jì)數(shù)分析顯示，觀察組MVD值為17.18±1.71，對(duì)照組為47.11±3.82，兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

2.3 腫瘤組織碘含量與MVD相關(guān)性 能譜CT三期增強(qiáng)掃描顯示，腫瘤邊緣區(qū)碘含量標(biāo)準(zhǔn)化值與MVD相關(guān)性系數(shù)分別為0.938(P<0.05)、0.819(P<0.05)、0.955(P<0.05)，呈顯著的正相關(guān)性。

3 討論

能譜CT能夠?qū)⒒旌夏芰砍上衲Ｊ睫D(zhuǎn)換為單能量成像模式(keV)，不僅能夠提供傳統(tǒng)的影像學(xué)掃描圖像，還能夠提供單能量圖像、基物質(zhì)圖像、能譜曲線、有效原子序數(shù)等圖像與信息，通過(guò)物質(zhì)分離技術(shù)，能夠充分利用水、鈣等不同基物質(zhì)，并根據(jù)生成的基物質(zhì)圖像，對(duì)基物質(zhì)濃度進(jìn)行定量檢測(cè)與定性分析。能譜CT的偽影去除效果佳，可有效優(yōu)化圖像質(zhì)量，對(duì)比圖像噪聲比，并運(yùn)用數(shù)字減影系統(tǒng)與瞬時(shí)轉(zhuǎn)換的高壓發(fā)生器等成像系統(tǒng)，在圖像質(zhì)量方面獲得更高的優(yōu)越性。在腫瘤診斷與治療評(píng)估中，能譜CT能夠運(yùn)用物質(zhì)分離技術(shù)，將水、碘設(shè)置為基物質(zhì)，并生成碘基圖，運(yùn)用碘基圖定量分析病灶攝碘情況，間接反映腫瘤血供情況[3-5]。

碘基圖在碘濃度分析中具有高度的敏感性，而CT增強(qiáng)掃描使用的對(duì)比劑主要物質(zhì)成分為碘，因此，通過(guò)增強(qiáng)掃描生成的碘基圖像在分析腫瘤血供情況方面有顯著的優(yōu)勢(shì)[6-8]。本研究顯示，能譜CT能夠?qū)δ[瘤邊緣區(qū)、腫瘤中心的三期增強(qiáng)掃描碘含量進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化值定量分析。采用貝伐珠單抗進(jìn)行抗血管治療后，腫瘤內(nèi)部組織結(jié)構(gòu)有了變化，能夠進(jìn)入腫塊中的碘也會(huì)出現(xiàn)變化，這種變化會(huì)反映在腫瘤組織的碘含量變化中，選擇ROI進(jìn)行計(jì)算比較，能夠分析不同組織部位的碘含量值差異[9-10]。本研究顯示，兩組實(shí)驗(yàn)裸鼠三期增強(qiáng)掃描時(shí)的腫瘤邊緣區(qū)碘含量標(biāo)準(zhǔn)化值均顯著高于腫瘤中心區(qū)(P<0.05)；觀察組腫瘤邊緣區(qū)、腫瘤中心區(qū)三期增強(qiáng)掃描碘含量標(biāo)準(zhǔn)化值均顯著低于對(duì)照組相應(yīng)數(shù)值(P<0.05)，經(jīng)過(guò)抗血管治療后，腫瘤內(nèi)部的碘含量顯著降低。經(jīng)過(guò)后續(xù)切片染色分析，腫瘤邊緣區(qū)碘含量標(biāo)準(zhǔn)化值與MVD呈顯著的正相關(guān)性(P<0.05)，表明碘含量能夠間接反映治療前后微血管變化情況，是抗血管生成治療效果評(píng)估的一個(gè)可靠指標(biāo)[5]。

綜上分析，實(shí)驗(yàn)提示，能譜CT能夠?qū)铙w內(nèi)的腫瘤組織碘含量進(jìn)行定量分析，有效反映腫瘤組織血流灌注情況，以此評(píng)估腫瘤抗血管生成治療效果。