蔣威華，熊廷川，王曉文，張晨光，伊麗娜，歐江華

新疆醫(yī)科大學(xué)第三臨床醫(yī)學(xué)院/新疆醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院乳腺外科，烏魯木齊830011

三陰性乳腺癌（triple negative breast cancer，TNBC）的研究一直是乳腺癌研究的熱點問題，其在診斷、治療和預(yù)后等方面困擾著不少學(xué)者。雖然分子生物學(xué)研究的不斷發(fā)展為腫瘤治療提供了新的途徑，但TNBC目前在基因水平的治療仍缺乏有力的證據(jù)，因此亟待尋找TNBC的新靶點以指導(dǎo)TNBC的診斷和治療。促分裂原活化的蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase，MAPK）對 TNBC的發(fā)生發(fā)展起重要作用，它是一組絲氨酸-蘇氨酸蛋白激酶，能被不同細胞外因素刺激激活，目前所發(fā)現(xiàn)的3條MAPK信號通路中，胞外信號調(diào)節(jié)激酶（extracellular signal-regulated kinase，ERK）通路和c-Jun氨基末端激酶/應(yīng)激活化的蛋白激酶（c-Jun N-terminal kinase/stress-activated protein kinase，JNK/SAPK）通路均在TNBC的發(fā)生機制中起重要作用[1-2]。表皮生長因子受體（epidermal growth factor receptor，EGFR）參與了很多復(fù)雜的細胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，作為原癌基因c-ErbB1的表達產(chǎn)物，其在間充質(zhì)、上皮及神經(jīng)源性組織中都有一定程度表達，對細胞的增殖分化有重要作用[3]，與TNBC細胞的生長密切相關(guān)[4]。本研究旨在研究MAPK及EGFR在TNBC中的表達及臨床意義，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2011年1月至2013年12月于新疆醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院住院手術(shù)經(jīng)病理證實為TNBC患者的病歷資料。納入標準：①首次治療并進行手術(shù)治療的患者；②雌激素受體（estrogen receptor，ER）、孕激素受體（progesterone receptor，PR）、人表皮生長因子受體2（human epidermal growth factor receptor 2，HER2）表達均為陰性的浸潤性乳腺癌；③有完整病理資料及隨訪資料。排除標準：ER、PR、HER2表達均為陰性的原位癌。根據(jù)納入、排除標準，共納入TNBC患者200例，年齡25～72歲，中位年齡48.5歲。選取TNBC患者的200例TNBC組織及80例癌旁組織（距腫瘤＞2 cm）進行研究。

1.2 檢測方法及結(jié)果判讀

采用免疫組織化學(xué)SP法測定組織中MAPK、EGFR的表達，實驗操作嚴格按照質(zhì)量控制內(nèi)容進行，采取雙盲法觀察切片。

1.2.1 MAPK結(jié)果判讀MAPK定位于細胞質(zhì)及部分細胞核，陽性細胞為細胞核、細胞質(zhì)或細胞膜呈棕黃色而背景清晰。隨機取5個高倍視野，同時每個視野計數(shù)100個細胞，根據(jù)染色強度及陽性細胞所占百分比進行評分。陽性細胞所占百分比：＜25%為1分，25%～50%為2分，51%～75%為3分，＞75%為4分。染色強度：無色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。兩項得分相乘為綜合評分，結(jié)果≥3分為陽性，＜3分為陰性。

1.2.2 EGFR結(jié)果判讀 EGFR定位于細胞膜。＞10%區(qū)域呈棕色或棕褐色染色，但細胞膜染色不連續(xù)者為1分；＞10%區(qū)域呈棕色或棕褐色染色且細胞膜染色連續(xù)，但形態(tài)不完整者為2分；＞10%區(qū)域呈棕色或棕褐色染色，細胞膜染色連續(xù)，且形態(tài)完整為3分。此外，細胞輕度棕褐色為1分，中度棕褐色為2分，重度棕褐色為3分。將兩項分值相加，總分≤2分為陰性，＞3分為陽性。

1.3 觀察指標

比較MAPK、EGFR在TNBC組織及癌旁組織中的表達差異及與TNBC患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期、預(yù)后的關(guān)系。局部復(fù)發(fā)是指同側(cè)乳腺、胸壁或區(qū)域淋巴結(jié)復(fù)發(fā)；遠處轉(zhuǎn)移為通過臨床特征、影像學(xué)檢查以及組織活檢以獲得確認，經(jīng)病理學(xué)診斷為乳腺癌的轉(zhuǎn)移。

1.4 隨訪

隨訪截至2018年6月。無瘤生存時間定義為患者手術(shù)開始至復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的時間，總生存時間定義為自患者確診之日至患者死亡的時間。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 18.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)處理。計數(shù)資料以例數(shù)及率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗；相關(guān)性分析采用Spearman秩相關(guān)分析；采用Kaplan-Meier法繪制生存曲線，Log-rank法比較生存情況。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 TNBC組織及癌旁組織中MAPK與EGFR表達情況的比較

TNBC組織中MAPK及EGFR的陽性表達率均明顯高于癌旁組織，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。（表1）

表1 TNBC組織及癌旁組織中MAPK與EGFR表達情況的比較[n（%）]

2.2 TNBC組織中MAPK與EGFR表達的相關(guān)性

TNBC組織中MAPK與EGFR的表達呈正相關(guān)（r=0.494，P＜0.01）。

2.3 不同臨床特征TNBC患者的TNBC組織中MAPK及EGFR表達情況的比較

不同臨床分期及有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的TNBC患者的TNBC組織中MAPK蛋白表達情況比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=6.982、4.547，P＜0.05）；不同臨床分期及有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的TNBC患者的TNBC組織中EGFR蛋白表達情況比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=16.515、9.362，P＜0.05）。（表2）

表2 不同臨床特征TNBC患者的TNBC組織中MAPK及EGFR的表達情況

2.4 TNBC組織中MAPK及EGFR的表達情況與復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的關(guān)系

至隨訪截止日期，200例TNBC患者中共55例（27.5%）患者出現(xiàn)復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移。55例復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移TNBC患者的TNBC組織中MAPK、EGFR陽性表達率分別為54.5%（30/55）和65.5%（36/55），均明顯高于無復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移患者的33.8%（49/145）和37.9%（55/145），差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=7.186、12.181，P＜0.01）。

2.5 TNBC組織中MAPK及EGFR的表達情況與生存的關(guān)系

MAPK陽性表達患者5年無瘤生存率為62.0%，明顯低于MAPK陰性表達患者的79.3%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=7.354，P＜0.01）。EGFR陽性表達患者5年無瘤生存率為60.4%，明顯低于EGFR陰性表達患者的82.6%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=12.404，P＜0.01）。（圖1、圖2）

圖1 MAPK陽性表達（n=79）及陰性表達（n=121）TNBC患者的無瘤生存曲線

圖2 EGFR陽性表達（n=91）及陰性表達（n=109）TNBC患者的無瘤生存曲線

3 討論

目前，基于分子水平的研究可使人類腫瘤被重新分類為多種亞型，不同亞型在疾病進展和對治療的反應(yīng)方面不同。TNBC是乳腺癌的一種特殊亞型，其對許多治療方法均具有抗性，由于缺乏有效的治療選擇，研究人員一直在探索與TNBC細胞增殖有關(guān)的分子途徑，闡明其分子機制，從而幫助改善預(yù)后。

MAPK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路是TNBC關(guān)鍵的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑之一[5-6]。乳腺癌患者較短的生存時間與升高的MAPK活性相關(guān)，而EGFR過度表達或持續(xù)激活可活化MAPK[7]。在TNBC的進展過程中，EGFR通過與配體結(jié)合的方式形成同源或異源二聚體，然后激活磷脂酰肌醇3-羥激酶/蛋白激酶B（phosphatidylinositol 3-hydroxy kinase/protein kinase B，PI3K/PKB，又稱PI3K/AKT）、MAPK/ERK等多條信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，起到促進腫瘤細胞增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移等作用[8]。本研究中MAPK及EGFR在TNBC組織中的陽性表達率分別為39.5%與45.5%，與國內(nèi)研究報道相似[9]，通過相關(guān)性分析，結(jié)果顯示MAPK與EGFR的表達呈正相關(guān)（r=0.494，P＜0.01），提示二者在TNBC的發(fā)生發(fā)展過程中可能存在協(xié)同作用。

研究顯示，MAPK及EGFR高表達的患者易出現(xiàn)早期復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移，預(yù)后也較差[10-12]。但也有不同結(jié)論者，國內(nèi)外有研究顯示MAPK陽性表達與患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況無關(guān)[2,9]，而本研究結(jié)果顯示MAPK及EGFR陽性表達不僅與TNBC患者的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，也與患者的臨床分期有關(guān)，TNBC患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和臨床分期是判斷預(yù)后的重要依據(jù)，并可為臨床治療方案的選擇提供一定參考。MAPK及EGFR可作為TNBC分子靶向治療新的嘗試方向，應(yīng)考慮針對TNBC患者的不同MAPK及EGFR表達狀態(tài)，而采取不同的個體化治療，進一步改善患者的預(yù)后。

隨訪結(jié)果顯示，MAPK及EGFR的表達均與患者復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移有關(guān)，復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移患者MAPK及EGFR的陽性表達率均明顯高于無復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移患者，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。在無瘤生存率方面，MAPK及EGFR陽性表達患者預(yù)后較陰性表達患者差，無瘤生存率更低。這與國外報道一致[13-14]，說明了MAPK及EGFR在TNBC的發(fā)生發(fā)展過程中起到了一定作用，有可能成為TNBC患者生存情況的預(yù)測指標和治療新靶點?？赏ㄟ^調(diào)控MAPK通路抑制TNBC細胞的生長，而達到治療目的[15-16]。

本研究為回顧性研究，且樣本量較小，建議擴大樣本量深入分析，以期獲得兩分子指標的臨床指導(dǎo)價值?？傊?，MAPK及EGFR蛋白的過表達及活化，在TNBC的發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮了一定作用，可考慮作為TNBC基因治療的新靶點。