戴 星,楊康平,尹戰(zhàn)海,馬 巍,楊益民,張黨鋒,周曉玲,張匡華,姚 璐

(1西安交通大學(xué)第一附屬醫(yī)院骨科,西安 710061;2西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)部基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院生理學(xué)與病理生理學(xué)系;*通訊作者,E-mail:lyao1117@xjtu.edu.cn)

1993年Kitamura等[1]從人嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞中分離出來(lái)一種含有52個(gè)氨基酸的蛋白,這種蛋白具有強(qiáng)大而持久的血管舒張效應(yīng),因其在人的腎上腺髓質(zhì)中分布最廣、含量最高而被命名為腎上腺髓質(zhì)素(adrenomedullin,ADM)。隨著進(jìn)一步深入的研究,人們發(fā)現(xiàn)ADM有強(qiáng)烈的促進(jìn)血管生成[2]和促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)作用[3],多種腫瘤組織中ADM的mRNA過度表達(dá),進(jìn)一步的研究更證明了ADM可以劑量依賴性地刺激培養(yǎng)的鼠血管平滑肌細(xì)胞的增生[4]。但之前關(guān)于ADM與腫瘤關(guān)系的研究多集中于消化系統(tǒng)腫瘤和部分腺癌(前列腺癌和乳腺癌等),鮮有關(guān)于骨腫瘤與ADM作用關(guān)系的研究。骨肉瘤作為骨腫瘤領(lǐng)域最常見的腫瘤類型,目前臨床上多采用手術(shù)治療、化療和放療等綜合療法,但骨肉瘤患者的生存率卻沒有得到本質(zhì)的提高[5]。本研究通過免疫組化、RT-PCR和放射免疫等方法,檢測(cè)ADM在骨肉瘤組織和正常組織之間的差異化表達(dá),為骨肉瘤靶向治療提供新的作用靶點(diǎn),阻斷或延緩骨肉瘤的生長(zhǎng)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移,這對(duì)于提高臨床治療效果,延長(zhǎng)患者生命具有重要意義。

1 材料與方法

1.1 組織標(biāo)本來(lái)源

骨肉瘤組織標(biāo)本來(lái)自于西安交通大學(xué)第一附屬醫(yī)院2015-01～2018-12收治的20例骨肉瘤確診患者,其中男性13例,女性7例,年齡16-63歲,平均年齡28歲。所入選的骨肉瘤患者均為初發(fā)病例,并且病人在采集標(biāo)本前從未行先期的放化療治療。所有骨肉瘤組織都采集于原發(fā)病灶,經(jīng)病理診斷確診且病歷資料完整,并排除轉(zhuǎn)移性或合并其他運(yùn)動(dòng)系統(tǒng)腫瘤者。詳細(xì)記錄入選者的個(gè)人信息、診斷、疾病的分期及有無(wú)轉(zhuǎn)移、腫瘤的特征等相關(guān)資料。手術(shù)中所取的瘤旁組織為遠(yuǎn)離瘤細(xì)胞的最遠(yuǎn)侵犯界限5 cm之外,且術(shù)后常規(guī)經(jīng)病理驗(yàn)證無(wú)腫瘤細(xì)胞浸潤(rùn)。對(duì)照組人群來(lái)自于因外傷導(dǎo)致骨折而入院行內(nèi)固定術(shù)的中青年患者,其中男性7例,女性3例,年齡22-45歲,平均年齡31.4歲,平素體健且經(jīng)入院檢查排除身體其他疾病。

血液標(biāo)本分為3組采集:腫瘤術(shù)前組、腫瘤術(shù)后組和健康人組。其中腫瘤患者術(shù)前血液標(biāo)本在入院時(shí)采集;腫瘤患者術(shù)后血液標(biāo)本在手術(shù)后2周時(shí)采集。腫瘤患者排除標(biāo)準(zhǔn):①對(duì)于入院前已經(jīng)進(jìn)行抗腫瘤的藥物治療;②因腫瘤復(fù)發(fā)而再次住院的骨肉瘤患者。健康組血液來(lái)自于經(jīng)健康體檢排除明顯器質(zhì)性疾病的人群。骨肉瘤組和健康對(duì)照組的年齡、性別均無(wú)明顯差異,所有患者及參與本實(shí)驗(yàn)人員均告知相關(guān)事項(xiàng)并簽訂知情同意書,本研究經(jīng)我院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)備案。

1.2 主要試劑

1.3 免疫組化法檢測(cè)ADM在人骨肉瘤組織中的表達(dá)

將獲得的腫瘤組織塊制備石蠟塊,以4 μm的厚度連續(xù)切片,所有的切片分為3組,分別用于HE染色、ADM和陰性對(duì)照免疫組化研究,以PBS液代替一抗作為空白對(duì)照組。按照組織來(lái)源的不同部位,實(shí)驗(yàn)分3個(gè)組進(jìn)行:腫瘤組,瘤旁組織組和正常組織組,相同部位的切片重復(fù)2次。

1.3.1 實(shí)驗(yàn)步驟 將切片轉(zhuǎn)入二甲苯溶液中浸泡脫蠟,濃度梯度酒精溶液浸泡去除二甲苯。切片行抗原修復(fù)后,滴加封閉液滅活內(nèi)源性過氧化物酶。滴加一抗(1 ∶100稀釋的ADM)工作液反應(yīng)約1 h,然后轉(zhuǎn)移到4 ℃冰箱內(nèi)過夜。滴加50 μl生物素標(biāo)記的二抗(1%BSA-PBS稀釋),37 ℃孵育30 min,PBS沖洗3次。滴加50 μl辣根酶標(biāo)記鏈霉卵白素(PBS稀釋),37 ℃孵育30 min,PBS沖洗4次。加入DAB試劑盒中A、B和C液各1滴,室溫下顯色,純水洗滌后終止反應(yīng)。再次酒精梯度脫水,每級(jí)5 min,二甲苯透明,樹膠封片。

1.3.2 免疫組化結(jié)果的判定 ADM陽(yáng)性染色的主要表現(xiàn)是腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中出現(xiàn)黃褐色或棕色的顆粒。采用圖像分析系統(tǒng)軟件Qwin(V2.3,Leica,Inc),對(duì)每張切片在200倍鏡下選擇5個(gè)視野的陽(yáng)性細(xì)胞,分析其相對(duì)數(shù)量和染色強(qiáng)度。可分為四級(jí):Ⅰ級(jí),陰性,無(wú)陽(yáng)性細(xì)胞或僅可見極少量陽(yáng)性細(xì)胞;Ⅱ級(jí),弱陽(yáng)性,可見少量陽(yáng)性細(xì)胞,數(shù)量少于10%;Ⅲ級(jí),陽(yáng)性,視野下可見較多陽(yáng)性細(xì)胞,但數(shù)量不超過50%;Ⅳ級(jí),強(qiáng)陽(yáng)性,陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量超過50%。

1.4 RT-PCR檢測(cè)骨肉瘤組織中ADM mRNA

1.4.1 組織總RNA的提取 將新鮮組織標(biāo)本以液氮速凍后磨碎,每100 mg組織加入1 ml Trizol試劑,將組織勻漿。按照1 ∶0.2的比例向Trizol中加氯仿,用力震蕩后靜置5 min。12 000 r/min離心15 min后將上層水相轉(zhuǎn)入新的1.5 ml EP管中,加入異丙醇0.5 ml,混勻后放于-20 ℃中1 h后4 ℃ 12 000 r/min離心10 min。傾去上清,加1 ml DEPC,振蕩洗滌后低溫離心機(jī)7 500 r/min離心5 min。傾去上清,留取沉淀,將提取的RNA保存于-70 ℃冰箱中。

表1 RT-PCR引物序列

Table 1 Primer sequences for RT-PCR

基因上游引物 下游引物 擴(kuò)增片段ADM5′-TGCCCAGACCCTTATTCGG-3′5′-AGTTGTTCATGCTCTGGCGG-3′115 bpGAPDH5′-CAAATTCCATGGCACCGTC-3′5′-CCCATCTGATTTTGGAGGGA-3′101 bp

反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)條件如下:37 ℃ 15 min(反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)),85 ℃ 5 s,合成的cDNA于-20 ℃保存。RT的反應(yīng)產(chǎn)物為總RNA相對(duì)應(yīng)的cDNA,以合成好的cDNA為模板,PCR反應(yīng)擴(kuò)增ADM基因。依次加入下列試劑,建立如下的反應(yīng)體系:2×Master Mix 12.5 μl,ADM cDNA 2 μl,上游引物(50 mmol/L)0.5 μl,下游引物(50 mmol/L)0.5 μl,最后加入ddH2O 9.5 μl至總體積為25 μl。94 ℃預(yù)變性3 min后,94 ℃變性30 s,退火30 s,72 ℃延伸45 s,共35個(gè)循環(huán),最后72 ℃延伸5 min。

1.4.3 瓊脂糖凝膠電泳 2%瓊脂糖凝膠50 ml充分混勻后室溫冷卻,加入10 mg/ml EB 4 μl,倒入準(zhǔn)備好的膠槽內(nèi),向槽內(nèi)加入1×TAE電泳緩沖液,再加入DNA marker 5 μl,依次加入樣本5-10 μl至凝膠的加樣孔中。接通電源,調(diào)節(jié)電壓為10-12 V,電泳30-35 min,待指示劑遷移至足夠距離后,關(guān)閉電源取出凝膠,置于凝膠成像系統(tǒng)中觀察電泳結(jié)果。以DNA marker為對(duì)照,判斷出現(xiàn)相應(yīng)大小的目的條帶是否為所需條帶。采用凝膠圖像分析系統(tǒng),照相并對(duì)電泳條帶進(jìn)行密度掃描后分析,以各組產(chǎn)物的光密度值(OD)與GAPDH的OD值相比計(jì)算目的基因的相對(duì)表達(dá)量。

1.5 放射免疫法檢測(cè)血漿中ADM含量

1.5.1 血漿樣本處理 血液標(biāo)本共采集50例,其中腫瘤術(shù)前組20例,腫瘤術(shù)后組20例,健康人組10例。血液標(biāo)本采用如下的方法處理:采集靜脈血2 ml,拔下針頭后,沿管壁慢慢注入含10% EDTA 30 μl的試管中,上下顛倒兩次,混勻。室溫放置約1 h后,3 000 r/min離心10 min,分離血漿后待測(cè)。如不立即測(cè)量,可將樣本密封后,置于2-8 ℃(保存不應(yīng)超過12 h)或-20 ℃(保存不超過2個(gè)月)儲(chǔ)存?zhèn)錅y(cè)。冰凍樣品測(cè)定前,使樣本置于室溫或常溫水中復(fù)融,測(cè)定前將樣品充分搖勻。

1.5.2 測(cè)定步驟 按人腎上腺髓質(zhì)素放射免疫分析試劑盒說明操作,將盒內(nèi)各凍干品成分加樣配制為溶液,搖勻,4-8 ℃溫育18-24 h。最后加入驢抗兔免疫分離劑,充分搖勻后室溫放置15 min,3 500 r/min離心15 min,棄上清,使用γ射線計(jì)數(shù)儀測(cè)各沉淀管中抗原-抗體標(biāo)記復(fù)合物的放射性計(jì)數(shù)。

1.5.3 數(shù)據(jù)處理 聯(lián)機(jī)電腦軟件可處理出結(jié)果,其計(jì)算原理如下。

百分結(jié)合率計(jì)算:設(shè)S0管計(jì)數(shù)為B0,各標(biāo)準(zhǔn)管或樣品管計(jì)數(shù)為B,非特異管計(jì)數(shù)為NSB,則百分結(jié)合率計(jì)算公式為:B/B0=(B-NSB)/(B0-NSB)×100%。

logit計(jì)算:各標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)或樣品管的logit值計(jì)算公式為:logit=ln(B/B0)/(1-B/B0)。

普通坐標(biāo)圖上以標(biāo)準(zhǔn)濃度取log值為橫坐標(biāo),對(duì)應(yīng)的logit值為縱坐標(biāo);或以標(biāo)準(zhǔn)濃度為橫坐標(biāo),對(duì)應(yīng)的B/B0為縱坐標(biāo)在logit-log坐標(biāo)圖上制出標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)待測(cè)樣品的B/B0可以從坐標(biāo)圖上查出樣品的濃度值。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 病例資料的整理

病人的真實(shí)資料隱去,以病例號(hào)代替,病人性別、年齡、骨肉瘤的外科學(xué)分期、有無(wú)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移及放射免疫法測(cè)定的血漿ADM含量見表2。腫瘤大小根據(jù)MRI影像和病理標(biāo)本大小,以病灶的最長(zhǎng)徑計(jì)算(單位:cm),骨肉瘤的外科學(xué)分期基于Enneking提出的肌肉骨骼系統(tǒng)的G-T-M分級(jí)系統(tǒng)[6](G:病理分度,T:骨肉瘤與解剖學(xué)間室的關(guān)系,M:有無(wú)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移),其中Ⅰ期代表低度惡性,Ⅱ期代表高度惡性,Ⅲ期代表有區(qū)域性和轉(zhuǎn)移性腫瘤組織,再根據(jù)解剖間室分為間室內(nèi)A和間室外B。20例骨肉瘤患者,男性13例,女性7例。按外科學(xué)分期,ⅡA級(jí)7例(其中男性4例,女性3例),ⅡB級(jí)6例(其中男性4例,女性2例),ⅢA級(jí)4例(其中男性3例,女性1例),ⅢB級(jí)3例(其中男性2例,女性1例)。

表2 骨肉瘤患者病例資料及術(shù)前、術(shù)后ADM值變化

Table 2 Information of patients with osteosarcoma and changes of ADM before and after operation

病例號(hào)性別年齡(歲)分期遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移腫瘤直徑(cm)ADM(pg/ml)術(shù)前術(shù)后1男54ⅢB多發(fā)9.948.619.82男20ⅡA無(wú) 7.235.812.53男28ⅡA無(wú) 5.633.714.34女24ⅡB無(wú) 5.942.215.45男31ⅡB無(wú) 8.441.516.66男24ⅢA肺 10.544.319.47女32ⅡA無(wú) 6.233.414.88男19ⅡB無(wú) 7.337.618.99女26ⅡB無(wú) 6.636.816.110男34ⅡB無(wú) 6.939.518.211男23ⅡA無(wú) 5.734.815.912女63ⅢA肺 9.146.318.713男17ⅢB多發(fā)9.747.319.814男22ⅢA肺 10.247.918.315男25ⅡB無(wú) 8.744.216.516女23ⅡA無(wú) 6.334.315.817男16ⅢA肺 9.242.316.418女21ⅢB多發(fā)9.549.318.119男31ⅡA無(wú) 8.041.716.520女27ⅡA無(wú) 5.842.315.4

2.2 血漿ADM含量

20例骨肉瘤患者術(shù)前血漿ADM含量(41.19±5.235 9)pg/ml，10例健康人血漿ADM含量為(12.46±1.148 1)pg/ml，具體見表3,兩組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=17.006 3,P<0.05);同時(shí)20例骨肉瘤患者術(shù)前血漿ADM含量與術(shù)后血漿ADM含量[(16.87±1.972 5)pg/ml]相比明顯降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=19.438 8,P<0.05),提示隨著腫瘤的切除ADM的表達(dá)量也隨之降低。本實(shí)驗(yàn)同時(shí)發(fā)現(xiàn)Ⅱ期骨肉瘤組血漿ADM水平[(38.29±3.782 3)pg/ml]與Ⅲ期骨

肉瘤組[(46.57±2.494 5)pg/ml]相比較,兩組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=5.183 2,P<0.05),說明存在遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的骨肉瘤患者血漿ADM表達(dá)水平高于那些沒有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的患者,提示ADM水平的高低與骨肉瘤的遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。

表3 健康人群血漿ADM含量

Table 3 Plasma ADM levels in healthy controls

編號(hào)性別年齡(歲)血漿ADM(pg/ml)1男2612.32女3311.63男2910.94男2712.85女2412.36男2211.87男2814.98男4512.69女4111.710男3913.7

2.3 ADM在骨肉瘤組織和瘤旁組織中的表達(dá)

免疫組化結(jié)果顯示骨肉瘤組織中瘤細(xì)胞有明顯的ADM標(biāo)記,呈強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá),主要定位于瘤細(xì)胞的外膜和細(xì)胞質(zhì)中,出現(xiàn)粗大的棕黃色顆粒,遍布整個(gè)視野(見圖1A);從腫瘤組織到瘤體邊緣的過渡中,ADM蛋白的表達(dá)逐漸減弱;瘤旁組織ADM的陽(yáng)性表達(dá)比骨肉瘤組織明顯減弱,僅局部組織呈現(xiàn)輕微的淡染(見圖1B)。

不同組織間的ADM表達(dá)強(qiáng)度見表4。

表4 不同組織中ADM的表達(dá)強(qiáng)度

Table 4 ADM expression intensity in different tissues

分類 強(qiáng)陽(yáng)性陽(yáng)性弱陽(yáng)性陰性陽(yáng)性率(%)骨肉瘤 1162195癌旁組織0251335正常組織011820

圖1 ADM在不同組織中的表達(dá)Figure 1 ADM expression in different tissues

2.4 骨肉瘤組織中ADM mRNA的表達(dá)

人骨肉瘤組織呈ADM mRNA陽(yáng)性表達(dá),可見擴(kuò)增片段長(zhǎng)度115 bp(ADM)和101 bp(GAPDH)兩條特異性條帶。上述實(shí)驗(yàn)重復(fù)兩次,均為陽(yáng)性表達(dá),結(jié)果一致(見圖2A)。其中在20例標(biāo)本中,骨肉瘤組織中均檢出ADM mRNA陽(yáng)性表達(dá);瘤旁組織中ADM mRNA陽(yáng)性表達(dá)12例,8例微量表達(dá);正常組織中ADM mRNA均呈微量表達(dá)。各組ADM mRNA半定量結(jié)果見圖2B,其中標(biāo)本1號(hào)是正常組織,ADM mRNA半定量值為0.21;標(biāo)本2-3號(hào)是瘤旁組織,ADM mRNA半定量值分別為0.55和0.62;標(biāo)本4-6號(hào)是骨肉瘤組織,ADM mRNA半定量值分別為1.71,1.86和1.78。骨肉瘤組織中的ADM mRNA表達(dá)量明顯高于瘤旁組織,兩組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=43.122 2,P<0.05)。

圖2 不同組織中ADM mRNA的表達(dá)Figure 2 ADM mRNA expression in different tissues

3 討論

腎上腺髓質(zhì)素(ADM)是一種人體自身產(chǎn)生的血管活性物質(zhì),由52個(gè)氨基酸組成,屬于降鈣素基因相關(guān)肽(calcitonin gene-related peptide,CGRP)家族成員[7]。ADM作為一種活性肽,具有強(qiáng)大而持續(xù)的降血壓作用;它可以促進(jìn)小鼠成纖維細(xì)胞的增殖并表現(xiàn)為劑量依賴性;它還作用于降鈣素受體樣受體(calcitonin receptor-like receptor,CRLR)與特異性受體活性調(diào)節(jié)蛋白(receptor activity modifying protein,RAMP),產(chǎn)生環(huán)磷酸腺苷(cyclic adenosine monophosphate,cAMP),活化蛋白激酶A(protein kinase A,PKA),提高心肌細(xì)胞內(nèi)鈣,增加心肌收縮力。

進(jìn)一步的深入研究發(fā)現(xiàn)ADM還具有強(qiáng)烈的促進(jìn)血管生成和促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)作用。Haddad等[8]總結(jié)既往研究結(jié)果,提出ADM可能是多數(shù)人類惡性腫瘤的自分泌生長(zhǎng)因子,在他們的研究中很多組織(乳腺、前列腺、腸道、腦和肺等)來(lái)源的腫瘤細(xì)胞系幾乎都能分泌ADM。Zhang等[9]檢測(cè)了卵巢惡性腫瘤患者和正常人群血漿中的ADM值,結(jié)果顯示患者血漿中ADM明顯升高。Li等[10]研究證明,卵巢上皮癌中的ADM表達(dá)與腫瘤的分期和預(yù)后相關(guān),腫瘤的分期越晚則ADM的表達(dá)越強(qiáng),手術(shù)治療后血漿內(nèi)ADM含量明顯下降,但如果很快又升高常常提示預(yù)后不佳。Bozkurt等[11]進(jìn)一步證明如果在組織中檢測(cè)出ADM陽(yáng)性表達(dá)越高,與之對(duì)應(yīng)的術(shù)后病理檢查的組織學(xué)分級(jí)中分化越低。同時(shí)進(jìn)行微血管密度的檢測(cè),采用CD34作為標(biāo)記物,發(fā)現(xiàn)微血管密度數(shù)值的變化總是伴隨著ADM的表達(dá)而變化。Dong等[12]的研究證明ADM具有血管生成素的作用,可刺激小雞尿囊絨膜新血管的生成,這與堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子作用相似。這些提示ADM與腫瘤的生長(zhǎng)密切相關(guān),尤其是ADM在腫瘤側(cè)枝循環(huán)和微血管建立中的重要作用,可能在某種程度上促進(jìn)了惡性腫瘤細(xì)胞的快速生長(zhǎng),并導(dǎo)致腫瘤最終遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的機(jī)制之一。

上述關(guān)于ADM與腫瘤的相關(guān)研究多集中在上皮細(xì)胞來(lái)源的腫瘤或者腺癌(乳腺癌、前列腺癌、胰腺癌等),但對(duì)于像骨肉瘤這樣來(lái)源間葉組織的實(shí)體性腫瘤,目前國(guó)內(nèi)外較少關(guān)注ADM在人骨肉瘤組織的表達(dá)情況,對(duì)于ADM與骨腫瘤發(fā)生、發(fā)展之間的關(guān)系,更是尚不明確。本文通過對(duì)臨床骨肉瘤標(biāo)本的免疫組化染色發(fā)現(xiàn),ADM在人骨肉瘤組織呈強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá);從腫瘤組織到瘤體邊緣的過渡中,ADM蛋白的表達(dá)逐漸減弱;瘤旁組織ADM的陽(yáng)性表達(dá)比骨肉瘤組織明顯減弱,僅局部組織呈現(xiàn)輕微的淡染。RT-PCR檢測(cè)ADM mRNA的表達(dá),得到了與免疫組化相似的結(jié)果,即ADM在腫瘤組織和其他組織中存在差異化表達(dá)。我們進(jìn)一步檢測(cè)了ADM在血漿的中含量,正常人的血漿也有ADM表達(dá),但骨肉瘤患者血漿ADM含量遠(yuǎn)高于正常人群,且表現(xiàn)為分期晚且存在遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的患者血漿ADM表達(dá)水平遠(yuǎn)高于那些沒有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的患者。這些實(shí)驗(yàn)結(jié)果都提示ADM在人骨肉瘤組織呈陽(yáng)性表達(dá),從ADM的變化趨勢(shì)上可以推斷ADM與骨肉瘤的生長(zhǎng)密切相關(guān),ADM表達(dá)水平的高低可能與骨肉瘤的惡性程度和臨床預(yù)后密切相關(guān),這與之前ADM在其他腺癌上的觀察結(jié)果相近[13]。

骨肉瘤的生長(zhǎng)和進(jìn)展都依賴于血管生成的過程,骨肉瘤從單個(gè)的瘤細(xì)胞生長(zhǎng)到一定體積,僅僅依靠周圍組織液的滲透來(lái)完成營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和代謝廢物的交換遠(yuǎn)遠(yuǎn)不夠,并且骨肉瘤生長(zhǎng)迅速常常導(dǎo)致瘤體內(nèi)部處于缺氧狀態(tài),因而必須建立起新的血液供應(yīng)以滿足骨肉瘤生長(zhǎng)的需要[14]。ADM作為一個(gè)潛在的腫瘤血管生長(zhǎng)因子[15],可以刺激骨肉瘤新生微血管的增生,緩解骨肉瘤內(nèi)部的缺氧狀態(tài),ADM在骨肉瘤進(jìn)一步演進(jìn)過程中的作用值得我們更多的關(guān)注,通過討論ADM在骨肉瘤發(fā)生發(fā)展中的作用,以期為骨肉瘤的診斷與治療等提供一個(gè)新的分子生物學(xué)指標(biāo),而建立以ADM為核心的治療方案很有可能成為治療骨肉瘤的新途徑。