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        雞矢藤顆粒劑干預(yù)大鼠肝纖維化模型TGF-β1/Smad通路試驗

        2019-10-15 08:36:00呂傳柱
        食品與機械 2019年9期
        關(guān)鍵詞:抗肝膠原生長因子

        袁 勇 呂傳柱 -

        (1. 海南醫(yī)學(xué)院,海南 ???570102;2. 海南醫(yī)學(xué)院急救與創(chuàng)傷研究教育部重點實驗室,海南 ???570102;3. 海南醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院海南省急危重癥臨床醫(yī)學(xué)研究中心,海南 海口 570102)

        肝纖維化是一種慢性漸進性病理過程,多發(fā)于肝硬化、肝癌等多種肝病中。導(dǎo)致肝纖維化的原因有很多,如酒精性肝損傷、活動性病毒性肝炎、脂肪肝、藥物性肝損傷等,最終導(dǎo)致彌漫性膠原或非膠原物質(zhì)在肝內(nèi)大量沉積,其核心病理改變是肝內(nèi)發(fā)現(xiàn)肝星狀細(xì)胞(Hepaticstellate cells,HSCs)激活并大量增殖,成肌纖維細(xì)胞樣細(xì)胞是病理改變的最后呈現(xiàn)形式[1-2]。在HSCs激活并增殖的過程中,各種致纖維化介質(zhì)如轉(zhuǎn)化生長因子β1(transfo-rminggrowth fatorbata,TGF-β1)會大量分泌,大量研究[3-6]表明,轉(zhuǎn)化生長因子β1是造成肝纖維化進展的最主要細(xì)胞因子,能使肝星狀細(xì)胞激活和大量分泌膠原或非膠原物質(zhì),與肝纖維化的進展有強關(guān)聯(lián)性。而IL-1β、IL-6、TNF-α是肝臟炎癥反應(yīng)的關(guān)鍵炎癥因子,常用于評價肝纖維化中因炎癥造成肝損傷程度[7]。

        中醫(yī)認(rèn)為肝纖維化程度和肝臟產(chǎn)生大量瘀血密切相關(guān),抗肝纖維化治療過程中可以選用活血化瘀類中藥[8]。雞矢藤是著名南藥之一,廣泛生長于瓊海,具有活血止痛的功效[9-11]。已有研究[12]發(fā)現(xiàn),雞矢藤可以抑制TGF-β1mRNA的表達,減緩肝纖維化的進程,但其表達的具體傳導(dǎo)通路還有待進一步探究。試驗擬對雞矢藤干預(yù)大鼠肝纖維化模型的TGF-β1/Smad通路進行探究,以期為篩選有效抗肝纖維化中藥研究提供借鑒案例。

        1 材料與方法

        1.1 主要試劑與藥物

        雞矢藤顆粒劑:廣州一方藥業(yè)公司;

        Trizol試劑:純度99%,美國英杰生命技術(shù)有限公司;

        白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)試劑盒:武漢華美生物工程有限公司。

        1.2 方法

        1.2.1 引物序列 引物TGF-β1序列和內(nèi)參照引物序列參照參考文獻[12]。引物Smad3序列:Forward 5’CCAGGCCTCTTGATGGTCGT3’;Reverse 5’GGCGGAAGTTCTGTTAGAAT3’。引物Smad7序列:Forward 5’CTTTCGCTTGGGTCAACTCTC3’;Reverse 5’TGGGATCACGCATATATTTCC3’。

        1.2.2 動物分組、造模及給藥 參照文獻[12]。

        1.2.3 Smad3和Smad7 mRNA表達檢測 熒光實時定量法[12]。

        1.2.4 TGF-β1檢測 參照文獻[12]。

        1.2.5 血清指標(biāo)(IL-1β、IL-6、TNF-α)檢測 ELISA法[13]。

        1.3 數(shù)據(jù)處理

        2 結(jié)果及分析

        2.1 各組大鼠血清IL-1β、IL-6、TNF-α的水平

        如表1所示,C組與A組差異極顯著(P<0.01),與B組差異顯著(P<0.05)。說明雞矢藤對肝纖維化有理想療效。

        表1各組大鼠IL-1β、IL-6、TNF-α的水平?

        Table 1 Comparison of IL-1β,IL-6 and TNF-alevels in rats in each group(n=10)

        ng/mL

        ? *表示A組的各項指標(biāo)與B組和C組有極顯著差異(P<0.01);△表示B組的各項指標(biāo)與C組有顯著差異(P<0.05)。

        2.2 各組TGF-β1、Smad3和Smad7的mRNA的表達水平

        如表2所示,對于TGF-β1mRNA的表達,C組與A組差異顯著(t=2.245,P<0.05),與B組差異極顯著(t=1.142,P<0.01);對于Smad3 mRNA的表達,C組與A組差異顯著(t=2.149,P<0.05),與B組差異極顯著(t=1.206,P<0.01);對于Smad7 mRNA的表達,C組與A組差異顯著(t=2.201,P<0.05),與B組差異極顯著(t=1.007,P<0.01)。說明雞矢藤可以明顯抑制TGF-β1mRNA和Smad3 mRNA的表達,促進Smad7 mRNA的表達。

        表2各組TGF-β1、Smad3和Smad7的mRNA的表達水平?

        Table 2 Comparison of mRNA expression values of TGF-β1,Smad3 and Smad7 in each group(n=10)

        組別TGF-β1/GAPDHSmad3/GAPDHSmad7/GAPDHA0.896 2±0.112 4*0.905 4±0.105 6**2.927 6±0.190 7***B2.875 6±0.204 42.875 6±0.204 43.458 4±0.114 5C1.156 8±0.105 4△1.025 0±0.004 6△△4.689 1±0.203 7△△△

        ? *表示B組的TGF-β1指標(biāo)與C組比有顯著差異(t=1.142,P<0.01),**表示B組的Smad3指標(biāo)與C組比有顯著差異(t=1.206,P<0.01),***表示B組的TGF-β1指標(biāo)與C組比有顯著差異(t=1.007,P<0.01);△表示C組的TGF-β1指標(biāo)與A組比有差異(t=2.245,P<0.05),△△表示C組的Smad3指標(biāo)與A組比有差異(t=2.149,P<0.05),△△△表示B組的Smad3指標(biāo)與A組比有差異(t=2.201,P<0.05)。

        3 結(jié)論

        雞矢藤可以疏肝和胃,具有一定的活血止痛功效,在臨床中可以起到降酶保肝護肝之效。Smad3 mRNA-(TGF-β1mRNA)-Smad7 mRNA的軸性作用通道在抗肝纖維化的作用機制中發(fā)揮著作用。當(dāng)肝內(nèi)彌漫性細(xì)胞外基質(zhì)(膠原或非膠原)過度沉積,HSCs激活并增殖的過程中,各種致纖維化介質(zhì)如轉(zhuǎn)化生長因子β1會大量分泌,由此會促進肝纖維化進一步進展,具體表現(xiàn)在Smad3 mRNA的表達會隨之增加。采用雞矢藤抗肝纖維化的干預(yù)治療后,各種致纖維化介質(zhì)如轉(zhuǎn)化生長因子β1會分泌減少,由此會阻斷肝纖維化進一步進展,具體表現(xiàn)在Smad7 mRNA的表達會隨之增加。至于是否存在反饋機制,有待進一步研究。

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