崔細(xì)鵬，王 敏，彭 宇

（廣東溢多利生物科技股份有限公司，廣東 珠海 519060）

葡萄糖氧化酶（GOD）是一種利用分子氧催化葡萄糖，氧化生成葡萄糖酸，同時(shí)產(chǎn)生過(guò)氧化氫的需氧脫氫酶。GOD 應(yīng)用于動(dòng)物飼料中，具有降低動(dòng)物腸道pH、抑制有害菌增殖、促進(jìn)消化等作用，是一種“綠色”、安全的飼料添加劑。研究表明，添加GOD 100 和200 g·t-1可顯著提高櫻桃谷鴨的平均日增重，降低料重比[1]。而在斷奶仔豬日糧中添加GOD 120～300 U·kg-1對(duì)仔豬平均日增重、平均日采食量及料重比均無(wú)顯著影響，但顯著改變了仔豬的血清生化指標(biāo)[2]。由此可知，GOD 作為一種新型飼料酶制劑具有耗氧、殺菌等方面作用，可以提高飼料的養(yǎng)分消化率，維持動(dòng)物腸道菌群的平衡，降低腹瀉率，提高飼料轉(zhuǎn)化率，可在一定程度上替代抗生素、益生菌和酸化劑。本研究擬在白羽肉仔雞日糧中添加不同濃度水平的GOD，以考察其對(duì)黃羽肉雞生產(chǎn)性能、養(yǎng)分代謝和腸道組織結(jié)構(gòu)的影響。

1 材料與方法

1.1 酶制劑

試驗(yàn)用GOD為粉狀固體，酶活1 000 U·g-1，由廣東溢多利生物科技股份有限公司提供。GOD 酶活定義為：在37 ℃、pH 6.0的條件下，每min內(nèi)從過(guò)量底物中降解釋放1 μmol 產(chǎn)物所需的酶量定義為1個(gè)酶活力單位，即1 U。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物與設(shè)計(jì)

試驗(yàn)在廣東溢多利生物科技股份有限公司產(chǎn)學(xué)研試驗(yàn)基地進(jìn)行。選取200 只遺傳背景、批次相同、體重接近的健康1日齡羅斯308白羽肉仔雞（公母混合雛），采用單因子試驗(yàn)設(shè)計(jì)，隨機(jī)分為4 個(gè)試驗(yàn)組，每個(gè)試驗(yàn)組5 個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)10 只（公母各半）。試驗(yàn)分為前期（1～21 d）和后期（22～42 d）兩個(gè)階段，每階段后期進(jìn)行代謝實(shí)驗(yàn)。對(duì)照組飼喂玉米-豆粕型基礎(chǔ)日糧，試驗(yàn)組分別在基礎(chǔ)日糧中添加GOD 50、100 和200 U·kg-1。日糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平見表1。

1.3 飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)雞舍為全封閉式，采用3 層立式籠養(yǎng)。進(jìn)雞前對(duì)雞舍設(shè)備進(jìn)行消毒。人工控制光照，試驗(yàn)期紅外燈供暖，舍內(nèi)溫度控制：1～3 日齡35 ℃，4～7日齡33 ℃，8～14 日齡30 ℃，15 日齡～試驗(yàn)結(jié)束25 ℃。雞自由采食和飲水，清理糞盤1 次·d-1。飼養(yǎng)期間帶雞噴霧消毒2 次·周-1，按行規(guī)免疫程序進(jìn)行免疫接種。

表1 基礎(chǔ)日糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平

1.4 測(cè)定指標(biāo)與方法

1.4.1 生長(zhǎng)性能的測(cè)定

分別在試驗(yàn)開始第1 天和第21、42 天8：00 對(duì)各組雞空腹稱重（禁食12 h，僅供飲水），同時(shí)稱量各重復(fù)剩余飼料重。每日觀察雞只健康狀況，統(tǒng)計(jì)死亡率。計(jì)算各個(gè)階段的平均日采食量、平均日增重、耗料增重比和死亡率。

1.4.2 養(yǎng)分利用率和表觀代謝能的測(cè)定

通過(guò)外源指示劑法分別于17～21 日齡和38～42日齡進(jìn)行代謝試驗(yàn)。分別在14 日齡和35 日齡8：00飼喂加入二氧化鈦（分析純）0.3%的試驗(yàn)日糧，預(yù)飼3 d，期間觀察雞只采食情況，并于17和38日齡8：00 開始收糞，每隔4 h 收糞1 次，收糞3 次·d-1。以組為單位，把每次收集的糞樣混合均勻，挑除其中的羽毛、皮屑等，按糞便量的10%加入濃度為10%的硫酸溶液，混勻放入-20 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩Ｓ?1 和42 日齡8：00 結(jié)束收糞，收糞期共計(jì)4 d。糞樣自然解凍后放置于65 ℃烘箱中烘至恒重，回潮24 h后為風(fēng)干樣，粉碎過(guò)40目篩，混合均勻，裝入樣品袋中密封干燥保存，待測(cè)定用。

測(cè)定飼料與糞中外源指示劑二氧化鈦的含量，飼料和糞樣中水分、粗蛋白質(zhì)、粗脂肪、總鈣、總磷和總能含量參照GB/T 6435-2006 飼料中水分和其他揮發(fā)性物質(zhì)含量的測(cè)定、GB/T 6436-2002飼料中鈣的測(cè)定、GB/T 6437-2002 飼料中總磷的測(cè)定分光光度法[3]。計(jì)算公式見式1～2。

式中：A1、A2分別代表飼料和糞干物質(zhì)中總能或營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)含量；B1、B2分別代表飼料和糞中指示劑的含量[3]。

1.4.3 腸道pH

試驗(yàn)第43 天，從各組的每個(gè)重復(fù)分別隨機(jī)選取1 只接近改組平均體重的肉雞，頸動(dòng)脈放血處死，取出十二指腸、空腸和回腸，準(zhǔn)確稱量各腸段食糜重量。取各段食糜用1：10 的稀釋比例加入去離子水，用小型振蕩器（250 次·min-1）振蕩混合5 min，測(cè)定pH。

1.4.4 腸段組織結(jié)構(gòu)觀察

剝離出十二指腸、空腸、回腸，各自截取中段約3 cm 的腸道組織，用冰冷的生理鹽水緩緩沖洗，浸入pH 7.4的福爾馬林溶液中，用于制作石蠟切片。在光學(xué)顯微鏡下觀察，每個(gè)切片隨機(jī)抽取5個(gè)非連續(xù)性視野，每個(gè)視野統(tǒng)計(jì)3組數(shù)據(jù)，絨毛長(zhǎng)度是指絨毛頂端到絨毛基部的長(zhǎng)度，隱窩深度是指腸腺底部到兩絨毛之間基部開口處的距離。

1.5 統(tǒng)計(jì)分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS 16.0 軟件的One-Way ANOVA 方法進(jìn)行單因素方差分析，Duncan's 法進(jìn)行多重比較，結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤”表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同添加水平GOD對(duì)肉雞生長(zhǎng)性能的影響

不同添加水平GOD 對(duì)肉雞生長(zhǎng)性能的影響見表2。

由表2 可知，添加GOD 對(duì)各組肉雞死淘率無(wú)影響，試驗(yàn)期各組肉雞成活率均為100%。與對(duì)照組相比，日糧中添加GOD 100 和200 U·kg-1顯著提高肉雞1～21、22～42 和1～42 d平均日增重（P＜0.05）。日糧添加GOD對(duì)肉雞1～21 d平均日采食量無(wú)顯著影響（P＞0.05），但添加GOD 100 和200 U·kg-1顯著增加22～42 d 平均日采食量（P＜0.05），添加GOD 200 U·kg-1顯著增加1～42 d 平均日采食量（P＜0.05）。日糧中添加GOD 對(duì)肉雞22～42 d 耗料增重比無(wú)顯著影響（P＞0.05），但添加GOD 100 和200 U·kg-1顯著降低1～21和1～42 d耗料增重比。

2.2 不同添加水平GOD 對(duì)肉雞養(yǎng)分代謝利用率和表觀代謝能的影響

不同添加水平的GOD 對(duì)肉雞養(yǎng)分代謝利用率和表觀代謝能的影響見表3。

由表3可知，1～21 d添加GOD顯著提高肉雞干物質(zhì)和表觀代謝能的利用率（P＜0.05），添加GOD 100 和200 U·kg-1顯著提高粗蛋白質(zhì)的表觀利用率（P＜0.05）。GOD 對(duì)1～21d肉雞鈣和磷的利用率無(wú)顯著影響（P＞0.05）。22～42 d，添加GOD 100 和200 U·kg-1顯著增加肉雞干物質(zhì)、粗蛋白質(zhì)和表觀代謝能利用率（P＜0.05），添加GOD 200 U·kg-1顯著增加鈣的表觀利用率（P＜0.05）。

表2 不同添加水平的GOD對(duì)肉雞生產(chǎn)性能的影響

表3 不同添加水平GOD對(duì)肉雞養(yǎng)分利用率和表觀代謝能的影響

2.3 不同添加水平葡萄糖氧化酶對(duì)肉雞腸道pH 的影響

不同添加水平GOD 對(duì)肉雞腸道食糜pH 的影響見表4。

由表4 可知，添加GOD 對(duì)肉雞十二指腸和空腸食糜pH 無(wú)顯著影響（P＞0.05），但添加200 U·kg-1GOD顯著降低了肉雞回腸食糜pH（P＜0.05）。

2.4 不同添加量的葡萄糖氧化酶對(duì)肉雞腸道組織結(jié)構(gòu)的影響

不同添加水平GOD 對(duì)肉雞腸道組織形態(tài)的影響見表5、圖1～3。

由表5、圖1～3 可知，肉雞日糧中添加GOD 對(duì)十二指腸、空腸和回腸的絨毛高度、隱窩深度、絨毛高度/隱窩深度均無(wú)顯著影響（P＞0.05）。

表4 不同添加水平GOD對(duì)肉雞腸道食糜pH的影響

表5 不同添加水平GOD對(duì)肉雞腸道組織形態(tài)的影響

圖1 不同添加水平GOD對(duì)十二指腸腸道形態(tài)的影響

圖2 不同添加水平GOD對(duì)空腸腸道形態(tài)的影響

圖3 不同添加水平GOD對(duì)回腸腸道形態(tài)的影響

3 討論

GOD 在動(dòng)物胃腸道消化酶作用下產(chǎn)生的葡萄糖酸和過(guò)氧化氫能通過(guò)消耗腸道中的氧氣，通過(guò)改善動(dòng)物腸道微生態(tài)平衡和腸道形態(tài)，提高動(dòng)物消化能力，促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)。目前GOD 對(duì)黃雞、豬和肉鴨生長(zhǎng)性能的影響已有研究，未見在白羽肉雞上報(bào)道[1-2,4]。白羽肉雞生長(zhǎng)周期短，飼養(yǎng)密度高，因此GOD 能否通過(guò)提高營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消化率，改善腸道環(huán)境和形態(tài)來(lái)提高肉雞生長(zhǎng)性能需要進(jìn)一步研究。

3.1 添加不同水平的GOD 劑對(duì)白羽肉仔雞生產(chǎn)性能的影響

龐家滿等研究結(jié)果表明，GOD 制劑對(duì)黃羽肉雞的日增重和料重比有顯著影響，添加葡萄糖氧化酶制劑對(duì)黃羽肉雞的干物質(zhì)、有機(jī)物質(zhì)、粗蛋白質(zhì)、粗脂肪的消化代謝有顯著影響（P＜0.05）[4]。GOD 在動(dòng)物胃腸道酶解產(chǎn)生的葡萄糖酸可以提升胃的酸性環(huán)境、激活胃蛋白酶活性，以及酶解產(chǎn)生的少量過(guò)氧化氫和消耗腸道中的氧氣，能有效抑制有害菌、促進(jìn)有益菌生長(zhǎng)、改善動(dòng)物腸道微生態(tài)平衡和腸道形態(tài)，從而改善動(dòng)物腸道健康和消化能力，提高動(dòng)物對(duì)飼料營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消化和吸收，促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)。

3.2 不同添加水平的GOD 對(duì)肉雞養(yǎng)分代謝利用率和表觀代謝能的影響

養(yǎng)分表觀消化率是衡量飼料營(yíng)養(yǎng)價(jià)值的重要指標(biāo)。消化率受飼料本身的性質(zhì)、加工和飼喂方法、動(dòng)物種類與年齡、測(cè)定分析方法等因素影響。GOD在胃腸道內(nèi)發(fā)揮酸化劑的作用，能夠激活胃蛋白酶，加快飼料中粗蛋白質(zhì)的消化。本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加GOD 能夠顯著提高肉雞對(duì)干物質(zhì)、粗蛋白質(zhì)和總能的消化率，與前人研究結(jié)果一致[5]。說(shuō)明飼糧中添加GOD 能夠提高肉雞對(duì)飼糧養(yǎng)分的消化吸收，從而提高生長(zhǎng)性能。

3.3 不同添加水平的GOD 對(duì)肉雞腸道組織結(jié)構(gòu)的影響

小腸黏膜的上皮絨毛高度和隱窩深度與腸黏膜的吸收能力存在很大的關(guān)聯(lián)，絨毛變短、隱窩變深說(shuō)明絨毛萎縮，吸收能力下降絨毛的高度與隱窩深度比值越大說(shuō)明腸上皮表面積越大，消化和吸收能力越強(qiáng)[6]。本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，飼料中添加GOD可降低肉雞腸道pH，與對(duì)照組相比，3個(gè)試驗(yàn)組十二指腸pH降低2.03%、2.34%、3.75%，差異不顯著（P＞0.05），空腸pH 降低1.43%、2.86%、4.13%，差異不顯著（P＞0.05），回腸pH降低2.47%、5.07%、9.18%，其中處理3 組的回腸pH 與對(duì)照組差異顯著（P＜0.05）。試驗(yàn)各組的十二指腸和空腸的絨毛高度、隱窩深度、絨毛高度/隱窩深度均差異不顯著（P＞0.05），且腸黏膜均結(jié)構(gòu)完整，腸絨毛及隱窩均發(fā)育良好，未發(fā)現(xiàn)葡萄糖氧化酶對(duì)肉雞腸道組織有影響。

4 結(jié)論

肉雞日糧中添加GOD 100～200 U·kg-1能顯著降低回腸食糜pH，提高干物質(zhì)、粗蛋白質(zhì)、鈣和表觀代謝能利用率，從而提高肉雞生產(chǎn)性能。