雷劉燕，周麗紅，吳曉薇，周淑君

(麗水市中心醫(yī)院婦產(chǎn)科，浙江 麗水 323000)

子癇前期是指妊娠前血壓正常的孕婦在妊娠20孕周后，以孕婦出現(xiàn)蛋白尿及高血壓為特征的妊娠期特發(fā)性疾病，其發(fā)病率可高達(dá)8%，是導(dǎo)致孕婦和胎兒死亡的重要因素，但其發(fā)病機(jī)制目前尚未明確[1]。有關(guān)文獻(xiàn)報道，脂聯(lián)素具有抗炎、改善機(jī)體胰島素抵抗、抗動脈粥樣硬化的作用，對重度子癇前期等多種疾病的發(fā)生發(fā)展具有一定的保護(hù)作用[2]。胎兒從母體獲取營養(yǎng)的唯一途徑是臍動脈，因此通過檢測臍動脈阻力指數(shù)(umbilical artery resistance index，UA-RI)、臍動脈搏動指數(shù)(umbilical artery pulsatility index，UA-PI)及臍動脈收縮期和舒張期血流比值(umbilical arterysystolic/diastolic ratio，UA-S/D)可充分了解胎盤-胎兒循環(huán)有無出現(xiàn)病變及病變嚴(yán)重程度。有關(guān)研究顯示，通過實(shí)時監(jiān)測臍動脈超聲血流變化可顯著降低高危孕婦及圍產(chǎn)兒的死亡率[3]。因此，本研究對正常足月妊娠產(chǎn)婦和重度子癇前期孕婦的胎盤組織進(jìn)行分析，旨在探討重度子癇前期孕婦胎盤組織脂聯(lián)素表達(dá)水平與胎兒臍動脈超聲血流指數(shù)對圍產(chǎn)兒結(jié)局的預(yù)測價值，為重度子癇前期的臨床診斷和治療提供重要的觀察指標(biāo)及血流動力學(xué)判斷依據(jù)。

1資料與方法

1.1研究對象

隨機(jī)選取2015年6月至2017年1月在麗水市中心醫(yī)院就診的54例正常足月妊娠產(chǎn)婦為對照組，54例重度子癇前期孕婦為研究組。研究組納入標(biāo)準(zhǔn)：①孕婦符合重度子癇前期的相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)[4]；②單胎，年齡≥18歲；③自愿簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：①妊娠前合并嚴(yán)重高血壓、糖尿病、冠心病等基礎(chǔ)疾?。虎诤喜?yán)重肝腎功能不全；③胎兒畸形或多囊卵巢綜合征者。對照組納入標(biāo)準(zhǔn)：于本院定期產(chǎn)檢，足月妊娠；單胎，年齡≥18歲。排除標(biāo)準(zhǔn)：伴有妊娠并發(fā)癥或合并癥；既往伴有嚴(yán)重急慢性疾??；伴有胎兒發(fā)育不全或先天性疾病等。

1.2研究方法

1.2.1收集資料及臍動脈血流的檢測

收集兩組孕婦的年齡、孕次、產(chǎn)次、分娩孕周、孕前身體質(zhì)量指數(shù)(body mass index，BMI)及新生兒體重、身長、胎盤重量等資料。通過GE Vivid7彩色多普勒超聲儀監(jiān)測兩組孕婦分娩前一天胎兒的臍動脈血流情況，探頭頻率為3.5MHz，取容積<2mm，臍動脈與脈沖多普勒取樣線間夾角為60°，選擇5個清晰脈沖頻，檢測胎兒的UA-RI、UA-PI、UA-S/D。

1.2.2胎盤的取材

于產(chǎn)婦娩出胎盤后切取一塊1.0cm×1.0cm×1.0cm的組織，采用0.9%NaCl溶液清洗干凈后，采用10%甲醛溶液固定，包埋，切片，用于檢測胎盤組織中脂聯(lián)素蛋白的表達(dá)水平。另切除一塊0.5cm×0.5cm×0.5cm的新鮮胎盤組織，采用0.9%NaCl溶液清洗干凈后，于-80℃的冰箱保存，用于檢測胎盤組織中脂聯(lián)素mRNA相對表達(dá)量。

1.2.3脂聯(lián)素蛋白表達(dá)的檢測

采用免疫組織化學(xué)法檢測胎盤組織中脂聯(lián)素蛋白的表達(dá)情況。通過兔抗人脂聯(lián)素多克隆抗體(由上海閃晶分子生物科技有限公司提供)對胎盤組織行SP染色。通過奧林巴斯熒光顯微鏡(由上海賴氏電子科技有限公司提供)采集照片。若滋養(yǎng)細(xì)胞中的細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞膜呈現(xiàn)黃褐色顆粒或棕黃色顆粒為陽性表達(dá)。選擇5個視野觀測組織細(xì)胞，并計算平均光密度值。

1.2.4脂聯(lián)素mRNA表達(dá)的檢測

采用定量聚合酶聯(lián)反應(yīng)(real-time polymerasechain reaction，PCR)檢測脂聯(lián)素蛋白mRNA的表達(dá)情況。通過RNA提取試劑(由深圳市康初源有限公司提供)提取總RNA，完成逆轉(zhuǎn)錄后，通過燃料法行定量PCR檢測。本研究中的各種引物均由北京萬生優(yōu)達(dá)生物科技有限公司提供。以2-△△Ct值對目的基因相對表達(dá)量進(jìn)行定量分析。

1.3統(tǒng)計學(xué)方法

2結(jié)果

2.1兩組孕婦和圍產(chǎn)兒的一般資料比較

研究組孕婦年齡、孕前BMI均較對照組高(均P<0.01)；研究組孕婦分娩孕周顯著低于對照組(P<0.01)；研究組胎盤重量、新生兒出生體重均較對照組低(均P<0.01)，身長較對照組短(P<0.01)；兩組的孕次、產(chǎn)次比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(均P>0.05)，見表1。

2.2兩組胎兒臍動脈血流參數(shù)的比較

研究組UA-RI、UA-PI及UA-S/D均較對照組高(均P<0.01)，見表2。

表1 兩組孕婦和圍產(chǎn)兒一般資料的比較結(jié)果

表2 兩組胎兒臍動脈血流參數(shù)的比較結(jié)果

2.3兩組孕婦胎盤組織中脂聯(lián)素mRNA、蛋白表達(dá)的比較

研究組孕婦胎盤組織中脂聯(lián)素mRNA和蛋白表達(dá)水平均較對照組明顯升高(均P<0.01)，見表3。

表3 兩組孕婦胎盤組織中脂聯(lián)素mRNA和蛋白表達(dá)的比較結(jié)果

2.4相關(guān)性分析

研究組脂聯(lián)素mRNA表達(dá)量與發(fā)病孕周、新生兒出生體重及分娩孕周均呈負(fù)相關(guān)(均P<0.01)，與UA-S/D及孕前BMI均呈正相關(guān)(均P<0.01)，見表4；研究組UA-S/D與發(fā)病孕周、新生兒出生體重及分娩孕周均呈負(fù)相關(guān)(均P<0.01)，見表5。

表4 脂聯(lián)素mRNA表達(dá)量的相關(guān)性分析

表5 UA-S/D的相關(guān)性分析

3討論

3.1子癇前期的病理機(jī)制

關(guān)于子癇前期的病理機(jī)制目前雖尚未明確，然而有研究指出子宮動脈擴(kuò)張障礙及滋養(yǎng)細(xì)胞侵入不足均可增加子宮胎盤循環(huán)阻力，導(dǎo)致胎盤灌注不足，出現(xiàn)缺血缺氧的情況，降低系統(tǒng)性血管內(nèi)皮功能，出現(xiàn)高血壓、蛋白尿等臨床癥狀[5]。

3.2脂聯(lián)素與重度子癇前期發(fā)病的相關(guān)性

脂聯(lián)素是一種存在于脂肪組織且含量豐富的蛋白因子，對妊娠期孕婦具有較好的保護(hù)作用，同時具有抗炎、改善機(jī)體胰島素抵抗、抗動脈粥樣硬化的作用，其在脂肪酸氧化與血糖代謝等過程中發(fā)揮著重要作用[6]。由于子癇前期與血管內(nèi)皮炎癥反應(yīng)、損傷及胰島素抵抗等關(guān)系密切，故脂聯(lián)素可作為研究子癇前期發(fā)病機(jī)制的重要蛋白因子之一。有關(guān)文獻(xiàn)報道，通過脂聯(lián)素可誘導(dǎo)一氧化氮及血管內(nèi)皮氧化酶的分泌，參與到子癇前期的發(fā)病過程中，而24孕周至孕足月期間，臍血中脂聯(lián)素的表達(dá)水平顯著高于母血，可見脂聯(lián)素的主要來源是胎盤[7]。

本研究發(fā)現(xiàn)，兩組的脂聯(lián)素蛋白在胎盤組織絨毛細(xì)胞中均有表達(dá)，且主要分布在胎盤絨毛滋養(yǎng)層細(xì)胞中，但是研究組孕婦胎盤組織中脂聯(lián)素蛋白表達(dá)量(0.34±0.11)較對照組(0.11±0.03)高，推測與緩解機(jī)體內(nèi)炎癥反應(yīng)相關(guān)。研究組孕婦胎盤組織中脂聯(lián)素mRNA表達(dá)量(4.12±1.33)較對照組(1.09±0.32)高，可見脂聯(lián)素高表達(dá)于重度子癇前期孕婦胎盤組織中。有研究報道，當(dāng)重度子癇前期患者的血清脂聯(lián)素下降時，可有效提高其生存率[8]。另有研究發(fā)現(xiàn)，重度子癇前期患者的血清脂聯(lián)素是上升的，這是由于患者為降低機(jī)體內(nèi)堆積過多脂肪產(chǎn)生的一種應(yīng)激反應(yīng)[9]。本研究發(fā)現(xiàn)，研究組脂聯(lián)素mRNA表達(dá)量與發(fā)病孕周、新生兒出生體重及分娩孕周均呈負(fù)相關(guān)，與UA-S/D及孕婦BMI均呈正相關(guān)，其原因可能是脂聯(lián)素誘導(dǎo)胎盤組織分泌相應(yīng)的受體，調(diào)節(jié)葡萄糖代謝機(jī)制，改善胰島素抵抗，從而影響宮內(nèi)胎兒的生長發(fā)育。

3.3臍動脈超聲血流指數(shù)異常與重度子癇前期發(fā)病的相關(guān)性

重度子癇前期是造成圍產(chǎn)兒不良結(jié)局的致病因素之一。目前臨床上主要通過彩色多普勒超聲檢測胎兒臍動脈血流情況，以加強(qiáng)對重度子癇前期圍產(chǎn)兒的監(jiān)測，減少剖宮產(chǎn)、引產(chǎn)的發(fā)生率，提高圍產(chǎn)兒的生存率。目前臨床上主要通過檢測UA-RI來評估胎盤血流灌注情況。本研究通過檢測胎兒UA-RI、UA-PI、UA-S/D來監(jiān)測臍動脈血流情況，發(fā)現(xiàn)研究組的UA-RI、UA-PI及UA-S/D均較對照組高，且研究組脂聯(lián)素mRNA表達(dá)量與UA-S/D及孕婦BMI均呈正相關(guān)；研究組UA-S/D與發(fā)病孕周、新生兒出生體重及分娩孕周均呈負(fù)相關(guān)，其原因可能是子癇前期損傷血管內(nèi)皮功能，引發(fā)胎盤絨毛小動脈發(fā)生痙攣、血管腔狹窄、水腫及梗死，導(dǎo)致胎盤絨毛毛細(xì)血管面積顯著下降，影響胎盤的正常功能，減少了臍動脈舒張末期血流量，使UA-RI升高，引發(fā)子宮肌層及蛻膜層血管硬化，進(jìn)而出現(xiàn)大片胎盤絨毛水腫及胎盤小葉梗死，減少營養(yǎng)供給，從而影響宮內(nèi)胎兒的生長發(fā)育。

綜上所述，重度子癇前期孕婦胎盤組織的脂聯(lián)素mRNA、蛋白表達(dá)量及胎兒臍動脈超聲血流指數(shù)均顯著增加，提示圍產(chǎn)兒產(chǎn)生不良結(jié)局幾率較大。重度子癇前期孕婦分娩孕周較正常妊娠孕婦明顯下降，而胎兒臍動脈超聲血流指數(shù)與孕周密切相關(guān)。因此胎兒臍動脈超聲血流指數(shù)異常是因重度子癇前期孕婦孕周下降引起的，亦或是因重度子癇前期的發(fā)病而引起，目前仍未完全明確，需今后排除孕周的影響以進(jìn)一步分析。