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        探討無菌檢查中和劑β-內(nèi)酰胺酶IV的作用范圍及水解效果

        2019-10-14 02:07:28吳揚文靜王鑫沈祝飛
        國外醫(yī)藥(抗生素分冊) 2019年4期

        吳揚 文靜 王鑫 沈祝飛

        (杭州北望生物技術(shù)有限公司,杭州 310015)

        β-內(nèi)酰胺類抗生素是指化學結(jié)構(gòu)中具有β-內(nèi)酰胺環(huán)的一大類抗生素,包括臨床最常用的青霉素與頭孢菌素,以及新發(fā)展的頭霉素類、硫霉素類、單環(huán)β-內(nèi)酰胺類等其他非典型β-內(nèi)酰胺類抗生素。此類抗生素具有殺菌活性強、毒性低、適應(yīng)癥廣及臨床療效好等優(yōu)點。根據(jù)《中國藥典》2015版的要求,β-內(nèi)酰胺類抗生素可選用β-內(nèi)酰胺酶去除其抗菌活性,來排除其對供試品無菌檢查結(jié)果的影響。目前大多廠家用戶對β-內(nèi)酰胺酶的適用范圍尚不清楚,存在混淆使用的現(xiàn)象。本研究選取β-內(nèi)酰胺酶II和β-內(nèi)酰胺酶IV 對常見β-內(nèi)酰胺類抗生素分別進行水解實驗,為抗生素生產(chǎn)廠家無菌檢查選擇更具專屬性的β-內(nèi)酰胺酶提供參考依據(jù)[1]。

        1 材料與方法

        1.1 材料

        1.1.1 儀器

        LDZX-50KBS立式高壓蒸汽滅菌鍋(上海申安醫(yī)療器械廠),SW-CJ-1F潔凈工作臺(蘇州安泰空氣技術(shù)有限公司),DNP-9052電熱恒溫培養(yǎng)箱(上海精宏實驗設(shè)備有限公司)。

        1.1.2 菌種

        大腸埃希菌[ATCC(B) 25922](浙江省微生物研究所提供)。

        1.1.3 培養(yǎng)基

        胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基(批號1564325)、胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基(批號1729809),均來源于OXOID公司。

        1.1.4 樣品

        抗生素藥敏紙片均來源于杭州微生物試劑有限公司,各藥敏紙片含量見表1。

        1.1.5 酶

        β-內(nèi)酰胺酶II(批號:7041725D,杭州北望生物技術(shù)有限公司提供,酶活性≥200萬單位/支);β-內(nèi)酰胺酶IV(批號:6021745D,杭州北望生物技術(shù)有限公司提供,酶活性≥200萬單位/支)。

        1.2 方法

        1.2.1 供試液制備

        取供試品1支(≥200萬單位/支)稀釋至每毫升50萬單位,貯存?zhèn)溆茫A存溫度2~8℃,貯存時間不超過12 h。

        1.2.2 菌液制備

        接種大腸埃希菌[ATCC(B) 25922]的新鮮培養(yǎng)物至胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中,30~35℃培養(yǎng)18~24h。

        1.2.3 試驗組

        胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基經(jīng)121℃、20 min高壓蒸汽滅菌后,冷卻至45~50℃;分別添加β-內(nèi)酰胺酶II和β-內(nèi)酰胺酶IV至胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基中,每皿添加活性為50萬單位;再取100 μL大腸埃希菌菌懸液(濃度為106cfu/mL)用涂布棒均勻涂布在平皿中,用無菌鑷子取藥敏紙片平整的貼至平皿上,并做好標記,放置在35℃的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24~48h。

        1.2.4 空白對照組

        方法同試驗組,但是胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基中不添加β-內(nèi)酰胺酶,空白組藥敏紙片均應(yīng)有抑菌圈。

        1.2.5 判定標準

        抑菌圈直徑大于20mm以上為極敏感,15~20mm為高敏感,10~14 mm為中敏感,10mm以下為低敏感,0mm為不敏感。

        2 結(jié)果

        培養(yǎng)結(jié)束后,量取試驗組與空白對照組的抑菌圈3次,根據(jù)抑菌圈的大小差異判斷供試品是否有中和抗生素活性的能力。頭孢類抗生素分解效果對比結(jié)果見表2,培南類及其他抗生素分解效果對比結(jié)果見表3。

        表1 常見的β-內(nèi)酰胺類抗生素藥敏紙片及其含量

        3 結(jié)論

        表2、表3結(jié)果表明,β-內(nèi)酰胺酶II能夠分解大多數(shù)頭孢類抗生素,β-內(nèi)酰胺酶IV作為一種新型的β-內(nèi)酰胺酶,既對頭孢類抗生素有分解效果,還能分解培南類的抗生素,并且對舒巴坦這類β-內(nèi)酰胺酶抑制劑有較好的抗性。相比之下,β-內(nèi)酰胺酶IV的作用譜范圍更廣泛,作用效果更好。

        表2 頭孢類抗生素分解效果對比

        表3 培南類及其他抗生素分解效果對比

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