林莉

人巨細(xì)胞病毒（HCMV）屬于皰疹病毒家族，正常人感染HCMV后通常無明顯癥狀，但是如果胎兒或嬰幼兒等免疫功能低下人群感染HCMV會增加先天性畸形、黃疸、肝炎、肺炎、腦炎和紫癜的發(fā)生風(fēng)險，嚴(yán)重影響兒童的正常生長發(fā)育。本研究選取我院收治的100例巨細(xì)胞病毒感染急性期患兒作為研究對象，探討MBL基因多態(tài)性及血漿蛋白水平與兒童HCMV感染的相關(guān)性，現(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1.1 臨床資料本研究選取我院呼吸內(nèi)科于2015年1月～2017年12月收治的100例巨細(xì)胞病毒感染患兒作為HCMV組，同時選取此期間內(nèi)100例健康體檢的兒童作為對照組。HCMV感染組中，男61例，女 39例；年齡 1～24個月，平均（9.19±2.39）個月；其中肝功能異常82例、肺炎15例、癲癇2例、腸炎6例、血小板減少性紫癜3例、發(fā)熱和淋巴結(jié)腫大等15例、兩個或多個系統(tǒng)器官功能損害19例。對照組中，男59例，女41例；年齡1～24個月，平均（9.33±2.12）個月；兩組在性別、年齡方面具有可比性（P＞0.05）。HCMV感染組所有患兒均符合我國第二屆全國小兒巨細(xì)胞病毒感染學(xué)術(shù)會議上制定的《巨細(xì)胞病毒診斷方案（1998年）》[1]中關(guān)于HCMV感染的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)。排除標(biāo)準(zhǔn)：①先天性心臟病患兒；②X線胸片及CT顯示間質(zhì)性肺炎患兒；③甲、丙、丁和戊型肝炎病毒抗體（HBsAg、HBeAg、抗-HBc）陽性者；④抗單純皰疹病毒IgM、風(fēng)疹病毒IgM、弓形體IgM和EB病毒IgM抗體陽性者；⑤痰培養(yǎng)、痰呼吸道病毒免疫熒光法檢測、肺炎支原體和沙眼衣原體檢測和沙眼衣原體抗體檢測陽性者[2]。

1.2 方法

1.2.1 試劑 人血漿MBL蛋白試劑采用Hycult Biotech公司（荷蘭）生產(chǎn)的試劑盒；TaqDNA聚合酶采用TaKaRa生物工程有限公司生產(chǎn)的相關(guān)產(chǎn)品。

1.2.2 MBL基因型檢測 采集受檢者外周血1～2ml，采用苯酚-氯仿法[3]抽提基因組DNA，MBL基因型檢測采用ELISA法[4]，具體方法按照說明書要求進行。

1.3 評價標(biāo)準(zhǔn)治療后，對于臨床癥狀消失、血清抗HCMV-IgM轉(zhuǎn)陰患兒即可歸為恢復(fù)期組[5]。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法采用SPSS 16.0統(tǒng)計軟件對所得資料進行統(tǒng)計學(xué)分析，計量資料采用±s表示，單因素分析使用t檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 MBL基因完整基因型頻率HCMV感染組的高水平表達基因型YA/YA頻率明顯低于對照組，而低水平基因型YA/XA，YA/YB，XA/XA頻率明顯高于對照組（P＜0.05）；HCMV感染組的野生完整基因型HYPA/HYPA頻率明顯低于對照組，且變異基因型中HYPA/LYPB的頻率明顯高于其他基因型（P＜0.05），見表1。

2.2 血漿MBL蛋白濃度HCMV感染組、恢復(fù)期組的血漿MBL蛋白濃度明顯低于對照組，其中恢復(fù)期組的血漿MBL蛋白濃度明顯低于HCMV感染組（P＜0.05），見表2。

表1 兩組MBL基因完整基因型頻率對比[n（%）]

表2 各組血漿 MBL 蛋白濃度對比（g/L，±s）

表2 各組血漿 MBL 蛋白濃度對比（g/L，±s）

注：與對照組比較，*P＜0.05；與HCMV感染組比較，#P＜0.05

組別 最小值 最大值 平均值HCMV感染組（n=100）21 3372 778.52±34.33*恢復(fù)期組（n=52）24 2519 619.36±26.37*#對照組（n=100）4 6165 1039.38±39.97

3 討論

MBL是一種天然的免疫分子，是C型凝集素超家族的主要成員。MBL由3條多肽鏈組成，每條鏈中包括一個凝集素區(qū)，能夠?qū)Σ≡w上的甘露糖、N-乙酰葡萄糖、葡萄糖及巖藻糖等碳水化合物進行識別[6]；同時，MBL能夠與病毒中多種糖基相結(jié)合，進而達到中和病毒、阻斷病毒擴散的作用，是人體先天免疫的第一道防線。MBL主要通過C3b使病毒被吞噬細(xì)胞吞噬，并阻斷病毒與細(xì)胞受體結(jié)合，使之無法進入細(xì)胞，并在體內(nèi)形成攻膜復(fù)合體溶解病毒，進而達到使病毒失活的目的。HCMV感染患兒MBL啟動子區(qū)和結(jié)構(gòu)區(qū)變異，使血清MBL蛋白水平下降，無法有效抵抗病毒入侵，提高活動性感染的發(fā)生風(fēng)險。

目前，國內(nèi)外大量研究涉及到MBL基因變異、血漿MBL蛋白水平與感染性疾病之間的相關(guān)性探討，但是對于三者之間的聯(lián)系尚無一致結(jié)論。有研究只進行結(jié)構(gòu)基因檢測，而忽略了單核苷酸多態(tài)性對MBL蛋白濃度的影響；還有的學(xué)者只進行MBL蛋白濃度檢測，忽略了MBL蛋白作為一種急性反應(yīng)蛋白在疾病期升高的可能性，這些研究都沒有全面考慮MBL的特性，從而影響了研究結(jié)果的準(zhǔn)確性[6，7]。

為了提高研究結(jié)果的準(zhǔn)確性，本研究對MBL啟動子區(qū)和外顯子1區(qū)在內(nèi)的6個常見核苷酸變異位點進行全面檢測，同時對HCMV感染組急性期和恢復(fù)期的MBL蛋白濃度進行檢測，結(jié)果顯示，HCMV感染組的高水平表達基因型YA/YA頻率明顯低于對照組，而低水平基因型YA/XA，YA/YB，XA/XA頻率明顯高于對照組；HCMV感染組的野生完整基因型HYPA/HYPA頻率明顯低于對照組，且變異基因型中HYPA/LYPB的頻率明顯高于其他基因型。此外，研究還發(fā)現(xiàn)HCMV感染組、恢復(fù)期組的血漿MBL蛋白濃度明顯低于對照組，其中恢復(fù)期組的血漿MBL蛋白濃度明顯低于HCMV感染組。

本研究中，研究對象均為年齡≤2歲的嬰幼兒，由于患兒的免疫系統(tǒng)發(fā)育尚不完善，尤其是HCMV感染組患兒的巨噬細(xì)胞吞噬和抗原呈遞功能的降低，免疫器官與免疫細(xì)胞存在不同程度的損傷，CD4+/CD8+T細(xì)胞比值下降或倒置，致使T細(xì)胞亞群比例失調(diào)，因此MBL在HCMV感染中的作用更為重要。但是，MBL與HCMV感染的關(guān)系有待于進一步研究，而且在研究樣本中未見C型和D型變異，只有B型變異，考慮與C型和D型變異在我國人群中較為罕見有關(guān)。

綜上所述，兒童HCMV感染的發(fā)生與MBL基因多態(tài)性所致血漿MBL蛋白水平偏低相關(guān)，推測MBL對HCMV感染具有一定的抑制作用。