陳永香，文芳，吳金健，吳章穎，訾聃***

(1.貴州醫(yī)科大學(xué) 臨床醫(yī)學(xué)院,貴州 貴陽 550004； 2.貴州醫(yī)科大學(xué)附院 臨床研究中心,貴州 貴陽 550004； 3.貴州醫(yī)科大學(xué)附院 婦產(chǎn)科，貴州 貴陽 550004)

卵巢癌(ovarian cancer)位列女性最常發(fā)生癌癥的第8位[1]，而上皮性卵巢癌(epithelial ovarian carcinoma，EOC)占卵巢癌的90%，因其早期臨床癥狀不明顯，易于轉(zhuǎn)移及廣泛播種，70%的患者在診斷時已處于晚期[2]。由于卵巢癌較易發(fā)生侵襲轉(zhuǎn)移和腫瘤復(fù)發(fā)，5年生存率僅40%[3]。目前針對卵巢癌的治療主要是手術(shù)聯(lián)合化療，但治療效果往往不盡如人意，約60%～85%的卵巢癌患者在完成初級治療后復(fù)發(fā)[4]。在對腫瘤的研究中，趨化因子受體4(Chemokine receptor 4，CXCR4)可作為疾病進(jìn)展的標(biāo)志物[5]， CXCR4還參與了腫瘤的耐藥性[6]；表面黏附分子CD133常在成體干細(xì)胞中表達(dá)，通過抑制分化來維持干細(xì)胞特性；CD44是參與細(xì)胞與細(xì)胞相互作用(黏附和遷移)的細(xì)胞表面糖蛋白[7]。本研究擬通過檢測卵巢良惡性腫瘤組織中CXCR4、CD44及CD133的表達(dá)來探究3者對上皮性卵巢癌的影響。

1 資料與方法

1.1 基本資料

收集2015年8月-2017年4月EOC(漿液性卵巢癌、黏液性卵巢癌、混合性上皮性癌)患者病理蠟塊標(biāo)本88例作為EOC組，其中早期卵巢癌(FIGOⅠ-Ⅱ期)26例、晚期卵巢癌(FIGOⅢ-Ⅳ期)62例，年齡17～74歲、平均(49.23±12.49)歲；同期卵巢良性腫瘤(漿液性囊腺瘤、黏液性囊腺瘤) 80例作為對照組(NC組)，年齡18～65歲、平均(38.51±10.77)歲。所有納入本研究的患者的臨床資料完整，手術(shù)標(biāo)本病理診斷由貴州醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院病理科完成。

1.2 研究方法

采用免疫組織化學(xué)方法檢測兩組標(biāo)本CXCR4、CD44及CD133的表達(dá)情況。收集標(biāo)本用4%多聚甲醛固定，脫水、包埋并切片，切片厚4 μm，并行常規(guī)HE染色，免疫組織化學(xué)操作步驟按說明書上進(jìn)行。采用雙盲閱片，半定量積分法判定結(jié)果，以細(xì)胞核、細(xì)胞膜或細(xì)胞質(zhì)呈黃色顆粒為陽性；依照細(xì)胞陽性著色程度(抗原含量)，可分為弱陽性(+)1分、中等陽性(++)2分、強陽性(+++)3分；依照陽性細(xì)胞數(shù)量，可分為弱陽性(+)1分、指陽性細(xì)胞數(shù)在25%以下，中等陽性(++)2分、指陽性細(xì)胞數(shù)在25%～49%，強陽性(+++)3分、指陽性細(xì)胞數(shù)在50%以上。兩組得分相乘，<3者為陰性，>4者為陽性，>6者為強陽性；至少隨機觀察5～10個高倍視野，取其均值。

1.3 觀察指標(biāo)

觀察CXCR4、CD44及CD133在兩組腫瘤組織中的表達(dá)情況。收集EOC患者臨床病理資料包括年齡、病理類型、臨床分期、腹水中找到惡性細(xì)胞、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及大網(wǎng)膜轉(zhuǎn)移情況，了解CXCR4、CD44及CD133表達(dá)與EOC患者臨床病理特征的關(guān)系。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 CXCR4、CD44及CD133表達(dá)

實驗結(jié)果表明，CXCR4主要表達(dá)在細(xì)胞質(zhì)中，CD44及CD133表達(dá)在細(xì)胞膜上，顏色呈明顯的棕黃色。EOC組表達(dá)區(qū)域呈現(xiàn)較強的棕黃色，而對照組細(xì)胞的相應(yīng)區(qū)域無該蛋白表達(dá)，EOC組與對照組表達(dá)差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，見圖1、表1。

2.2 CXCR4、CD133及CD44的表達(dá)與EOC臨床病理的關(guān)系

數(shù)據(jù)分析結(jié)果顯示，CXCR4與EOC臨床分期、腹水中找到惡性細(xì)胞、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、大網(wǎng)膜轉(zhuǎn)移有關(guān)，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；CD44與EOC臨床分期、腹水中找到惡性細(xì)胞、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、大網(wǎng)膜轉(zhuǎn)移有關(guān)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；CD133與EOC臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、大網(wǎng)膜轉(zhuǎn)移有關(guān)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。3項指標(biāo)均與年齡及病理類型無性，CD133與腹水找到腫瘤細(xì)胞無關(guān)，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表2。

圖1 CXCR4、CD44、CD133在卵巢良惡性腫瘤中的表達(dá)(DAB，×200)Fig.1 The expression of CXCR4, CD44 and CD133 inbenign and malignant ovarian tumors

組別nCXCR4-+(1)CD44-+(1)CD133-+(1)EOC組882761 3553 2761 對照組806416 5327 4634 χ235.8369.879.269P0.0000.0010.000

注：(1)包括陽性和強陽性。

表2 CXCR4、CD133、CD44的表達(dá)與EOC臨床病理的關(guān)系Tab.2 Correlation between expression of CXCR4, CD133, CD44 and clinical pathology in EOC group

注：(1)包括陽性和強陽性,(2)檢驗方法為Fisher檢驗。

3 討論

卵巢癌是女性生殖系統(tǒng)疾病中致死率最高的惡性腫瘤，多數(shù)患者診斷時已屬晚期，失去最佳手術(shù)時期，嚴(yán)重威脅女性的身心健康[8]。細(xì)胞因子受體CXCR4的表達(dá)使卵巢癌具有了侵襲性[9]，而在對膠質(zhì)瘤細(xì)胞的研究中，將其與CD44、CD133共同作為干細(xì)胞標(biāo)志物[10]。CXCR4的細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域與其配體結(jié)合，引起構(gòu)象變化，允許趨化因子緊密結(jié)合形成受體袋，接下來，發(fā)生第二次構(gòu)象變化，通過Gα亞基從Gβ/Gγ二聚體的解離激活細(xì)胞內(nèi)三聚體G蛋白[11]，一旦激活，cAMP刺激酪氨酸激酶的Src家族，激活Ras、Raf、絲裂原活化蛋白激酶(MEK)和ERK途徑;除此之外還存在許多途徑，包括c-Jun[12]、NF-κB[13]及mTORC2[14]途徑。在本研究中，通過免疫組織化學(xué)發(fā)現(xiàn)CXCR4、CD44、CD133在EOC組織中均有表達(dá)，EOC患者中CXCR4陽性率為69.32%，而在良性卵巢腫瘤中僅占為20%，χ2檢驗結(jié)果也顯示在卵巢良惡性腫瘤中CXCR4的表達(dá)差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.001)；CD44、CD133在卵巢良惡性腫瘤中的表達(dá)差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.001)，因此有理由相信，3者對卵巢癌的發(fā)生發(fā)展是有影響的。

CXCR4與其特異性的配體結(jié)合形成CXCR4/CXCL12軸，它涉及干細(xì)胞的維持和(或)分化，癌癥發(fā)生和其他多種病理途徑[15]。在食管癌的研究中發(fā)現(xiàn)，自分泌CXCL12 / CXCR4是通過ERK1 / 2信號通路轉(zhuǎn)化食管癌干細(xì)胞轉(zhuǎn)移特性的主要機制之一[16]，在胰腺導(dǎo)管癌的研究中發(fā)現(xiàn)，在Krüppel樣轉(zhuǎn)錄因子10缺失的情況下靶向CXCR4/CXCL12能抑制胰腺導(dǎo)管癌的進(jìn)展[17]。在子宮內(nèi)膜癌中，CD133+CXCR4+的原發(fā)性子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞生長更快，干細(xì)胞特征相關(guān)基因mRNA高表達(dá)，產(chǎn)生更多球體，并且具有比其他亞群更高的克隆形成能力，它們對抗癌藥物的抵抗能力也更強[18]，而Kimura T等[19]的研究也證實在滑膜肉瘤中，CXCR4+細(xì)胞的致瘤性比陰性細(xì)胞更高，并具有自我更新和多能分化能力，因此針對CXCR4+的腫瘤細(xì)胞群的治療將成為腫瘤治療的新思路。臨床上，腹水腫瘤細(xì)胞、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、大網(wǎng)膜轉(zhuǎn)移常作為卵巢腫瘤分期的主要依據(jù)，本研究中證實3者均與CXCR4、CD44、CD133的表達(dá)有關(guān)，因此CXCR4、CD44及CD133可能通過某種機制促進(jìn)了卵巢癌的侵襲和轉(zhuǎn)移。

綜上，在EOC中，CXCR4、CD44、CD133促進(jìn)了卵巢癌的的侵襲轉(zhuǎn)移，這或許將為卵巢癌的治療提供新的策略，但具體機制有待進(jìn)一步研究。