孫兆敏，蔡勝利

(威海博宇食品有限公司，山東 威海 264205)

以二十碳五烯酸(C20:5n-3,EPA)和二十二碳六烯酸(C22:6n-3,DHA)為代表的海洋n-3多不飽和脂肪酸已被證實(shí)具有多種對(duì)人體有益的生理功能。

目前常見的EPA和DHA產(chǎn)品主要是魚油和微藻油，其化學(xué)形式多為甘油酯或乙酯，其中甘油酯是EPA和DHA的天然存在形式之一，但兩種脂肪酸的總含量較低，乙酯產(chǎn)品是直接或間接以甘油酯型EPA和DHA為原料經(jīng)酯交換反應(yīng)制得的，可進(jìn)一步通過分子蒸餾、尿素包合等技術(shù)手段大幅提高其EPA和DHA的含量，但乙酯型EPA/DHA在人體內(nèi)的利用效率低，且存在一定的安全隱患。

近年來，磷脂型EPA/DHA(即EPA/DHA-磷脂，EPA/DHA-PL)因其在氧化穩(wěn)定性[1]、生物利用效率和營養(yǎng)功能等[2]方面的優(yōu)勢(shì)越來越受到關(guān)注。EPA/DHA-PL天然存在于海洋動(dòng)物(如磷蝦、軟體動(dòng)物、魚類等)和哺乳動(dòng)物體內(nèi)，而國內(nèi)外以南極磷蝦、海魚卵等為原料提取EPA/DHA-PL的技術(shù)已經(jīng)實(shí)現(xiàn)產(chǎn)業(yè)化。受限于海洋原料來源穩(wěn)定性、海洋過敏原以及重金屬、農(nóng)藥污染等因素，國內(nèi)外研究者在深入開發(fā)更安全、更高效和更低消耗的提取技術(shù)的同時(shí)，也將目光投向了EPA/DHA-PL的酶促制備技術(shù)。

根據(jù)反應(yīng)類型的不同，EPA/DHA-PL酶促制備方法主要包括酯交換法、酯合成法和水解法，其中酯交換法可進(jìn)一步細(xì)分為酸解法、醇解法和酯-酯交換法。而根據(jù)制備策略的不同，又可分為?；鎿Q法(包括酸解法和酯-酯交換法)、酰基結(jié)合法(主要是酯合成法)和?；摮?包括水解法和小分子醇參與的醇解法)。本文中，筆者將根據(jù)制備策略的不同，對(duì)近年來酶促制備EPA/DHA-PL的研究進(jìn)展進(jìn)行綜述，以期為相關(guān)的研究人員提供借鑒。

1 ?；鎿Q法

1.1 ?；鎿Q法概述

?；鎿Q法是以大豆磷脂和蛋黃磷脂等幾乎不含EPA/DHA的磷脂為主要原料，通過酶促酸解或酯-酯交換反應(yīng)，將磷脂中的其他脂肪酸替換為EPA/DHA的方法(圖1)。?；鎿Q法可選用的酶制劑種類多，反應(yīng)底物易于混溶且對(duì)酶活力影響較小，是酶促制備EPA/DHA-PL的主要技術(shù)手段。早在1986年，Yoshimoto等[3]就開發(fā)了通過酸解反應(yīng)制備EPA磷脂的技術(shù)。在國內(nèi)，張苓花等[4]和王永華等[5]較早地開展了?；鎿Q法制備EPA/DHA-PL的研究。目前，評(píng)價(jià)酰基替換法效率的主要指標(biāo)是EPA/DHA與磷脂的結(jié)合率以及最終產(chǎn)物得率，前者通常由反應(yīng)一段時(shí)間內(nèi)磷脂原料中EPA/DHA增加量來體現(xiàn)，后者主要受副反應(yīng)(主要是水解反應(yīng))和產(chǎn)物提取方法的影響。

圖1 ?；鎿Q法制備EPA/DHA-PLFig.1 Preparation of EPA/DHA-PL by acyl-replacement method

1.2 酶源及特點(diǎn)

以脂肪酶、磷脂酶A1和磷脂酶A2為催化劑制備EPA/DHA-PL的研究均有報(bào)道，在絕大部分研究中，酶制劑的篩選通常作為制備EPA/DHA-PL的第一步。Mutua等[6]通過正己烷體系中磷脂酰膽堿與EPA的酸解反應(yīng)，比較了磷脂酶A2、磷脂酶A1和7種脂肪酶的催化效果，發(fā)現(xiàn)未經(jīng)固定化的毛霉(Mucormiehei)脂肪酶和磷脂酶A2催化的反應(yīng)中EPA結(jié)合率較高。而Marsaoui等[7]則從來源于南極假絲酵母(Candidaantarctica)、熒光假單胞菌(Pseudomonasfluorescens)、洋蔥伯克霍爾德菌(Burkholderiacepacia)、毛霉、疏棉狀嗜熱絲孢菌(Thermomyceslanuginosus)和米黑根毛霉(Rhizomucormiehei)的6種脂肪酶中篩選出固定化米黑根毛霉脂肪酶(Lipozyme RM IM)用于催化正己烷體系中大豆磷脂與EPA/DHA乙酯的反應(yīng)。

除了來源微生物的不同，同一種微生物產(chǎn)生的不同脂肪酶在催化磷脂酸解反應(yīng)過程中也可能會(huì)獲得截然不同的結(jié)果，如Chojnacka等[8]選用的7種脂肪酶中，只有來源南極假絲酵母的脂肪酶B(CalB)可將蛋黃磷脂中的EPA和DHA含量提高到10%以上，而南極假絲酵母脂肪酶A(CalA)則幾乎無法催化蛋黃磷脂與EPA/DHA的酸解反應(yīng)。通常認(rèn)為，CalA是較少見的對(duì)甘油三酯sn-2位具有催化偏好性的脂肪酶，而CalB則不具有催化位點(diǎn)的偏好性。通過對(duì)磷脂產(chǎn)物的進(jìn)一步分析，Chojnacka等[8]發(fā)現(xiàn)產(chǎn)物中DHA主要結(jié)合在磷脂甘油骨架的sn-1位上，這說明CalB在磷脂的酸解反應(yīng)過程中表現(xiàn)出了sn-1位點(diǎn)的偏好性。類似地，褶皺假絲酵母(Candidarugosa)脂肪酶也通常不具有甘油三酯位點(diǎn)的偏好性，但在大豆磷脂和EPA/DHA乙酯的反應(yīng)過程中卻表現(xiàn)出了sn-2位點(diǎn)的偏好性[9]。另外，柱狀假絲酵母(Candidacylindracea，又稱褶皺假絲酵母)脂肪酶[9-10]、米黑根毛霉脂肪酶[11-12]和疏棉狀嗜熱絲孢菌脂肪酶[13]等更易于催化EPA與磷脂的結(jié)合，而相對(duì)于EPA，Novozym 435則更傾向于催化DHA參與的反應(yīng)，表現(xiàn)出對(duì)DHA的偏好性，且該偏好性不隨反應(yīng)溶劑的不同而改變[8]。

Novozym 435是一種將CalB吸附在大孔丙烯酸樹脂上而制成的固定化脂肪酶，潘麗等[14]以其為工具酶催化大豆粉末磷脂的酸解反應(yīng)，得到EPA和DHA含量為21.56%的磷脂，經(jīng)進(jìn)一步優(yōu)化反應(yīng)條件，將磷脂中EPA和DHA總量提高到24.32%[15]。

磷脂酶A1和A2分別對(duì)磷脂甘油骨架上sn-1、sn-2位的脂肪酸具有專一性，也是?；鎿Q法制備EPA/DHA-PL的常用酶制劑。Kim等[16]用液體磷脂酶A1—— Lectitase ultra催化磷脂酰膽堿的酸解反應(yīng)制備EPA/DHA-PL，反應(yīng)24 h時(shí)，EPA/DHA與磷脂的結(jié)合率達(dá)到28%，其后該研究團(tuán)隊(duì)將磷脂酶A1固定化并優(yōu)化反應(yīng)條件，使結(jié)合率得以進(jìn)一步提高[17]。另外國內(nèi)的研究者也先后以固定化磷脂酶A1為催化劑對(duì)?；鎿Q法制備EPA/DHA-PL進(jìn)行了研究[18-22]。普通磷脂可通過?；鎿Q法成為EPA/DHA-PL，實(shí)現(xiàn)“從無到有”的過程，一些本身富含EPA/DHA的磷脂，如南極磷蝦磷脂，也可以通過該方法進(jìn)一步提高其EPA/DHA的含量，達(dá)到“從有到多”的效果。Xi等[22]從南極磷蝦中提取的磷脂中EPA和DHA的含量分別為23.2%和14.8%，且EPA和DHA主要位于磷脂的sn-2位上，通過磷脂酶A1的作用將sn-1位上的其他脂肪酸替換為EPA/DHA，可獲得EPA和DHA的含量分別為24.7%和59.0%的磷脂產(chǎn)品。

根據(jù)磷酸基團(tuán)連接的取代基團(tuán)不同，磷脂可分為磷脂酰膽堿、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇和磷脂酰絲氨酸等。相對(duì)于其他種類的磷脂，磷脂酰膽堿更易于通過酸解反應(yīng)與EPA/DHA結(jié)合[6,10,13,23]。而根據(jù)EPA/DHA供體化學(xué)形式的不同，酰基替換法分為酸解反應(yīng)(磷脂與游離型EPA/DHA的反應(yīng))和酯-酯交換反應(yīng)(磷脂與乙酯或甘油三酯型EPA/DHA等的反應(yīng))，Yamamoto等[9]以褶皺假絲酵母脂肪酶為催化劑，考察了3種不同形式的EPA/DHA供體參與的酯交換反應(yīng)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)甘油三酯和游離脂肪酸參與的反應(yīng)具有更高的結(jié)合率。但Haraldsson等[12]研究發(fā)現(xiàn)，采用游離脂肪酸和乙酯作為的EPA/DHA供體形式最終反應(yīng)結(jié)合率相差不大，但酯-酯交換反應(yīng)過程中的水解副反應(yīng)卻比酸解反應(yīng)過程的劇烈，可能的原因是游離型EPA/DHA在一定程度上抑制了水解反應(yīng)的發(fā)生。由于高含量EPA/DHA乙酯的制備工藝相對(duì)簡單，且氧化穩(wěn)定性較強(qiáng)，近年來有相當(dāng)數(shù)量的研究通過酯-酯交換反應(yīng)制備EPA/DHA-PL[7,9,20-21,24]。

1.3 酶促反應(yīng)的溶劑體系

?；鎿Q法制備EPA/DHA-PL通常在非水反應(yīng)體系尤其是無溶劑體系和有機(jī)溶劑體系中進(jìn)行。

低極性的正己烷可較好地溶解磷脂和EPA/DHA供體，且能夠維持較高的脂肪酶活力，因此常用于EPA/DHA-PL的制備[6-8,25-26]，Chojnacka等[8]比較了不同有機(jī)溶劑對(duì)酸解反應(yīng)結(jié)果的影響，發(fā)現(xiàn)采用正己烷獲得的EPA/DHA結(jié)合率最高(24%)、正庚烷次之(18%)、甲苯最低(12.3%)，而對(duì)磷脂酶A2催化的酯-酯交換反應(yīng)來說，甲苯則是比正己烷或正庚烷更適宜的溶劑[27]。

無溶劑體系不使用易燃易爆且具有一定毒性的溶劑，避免了有機(jī)溶劑的“稀釋”作用，反應(yīng)底物和酶的平均濃度高、反應(yīng)初速度快、產(chǎn)物分離步驟簡單，可能是制備EPA/DHA-PL的更好選擇。但無論是有機(jī)溶劑體系還是無溶劑體系，反應(yīng)時(shí)間通常在24 h以上，為了縮短反應(yīng)時(shí)間，可以向有機(jī)溶劑體系施加超聲作用[28]或采用超(亞)臨界流體反應(yīng)體系，該流體黏度小、擴(kuò)散性能好，且能在一定程度上提高酶活力[29]，從而可以加快反應(yīng)速度，縮短反應(yīng)時(shí)間，如Xi等[22]發(fā)現(xiàn)，超臨界CO2體系中南極磷蝦磷脂經(jīng)過7 h的酸解反應(yīng)，就能得到較高DHA結(jié)合率。而于剛等[30]采用的亞臨界R134a反應(yīng)體系中，大豆磷脂僅經(jīng)過1 h的酸解反應(yīng)即可獲得EPA和DHA的量分別為12.23%和39.83%的磷脂。

非水反應(yīng)體系并非嚴(yán)格無水，且適量的水對(duì)保持酶活力至關(guān)重要。Li等[21]在無溶劑體系通過磷脂酶A1催化的酯-酯交換反應(yīng)，比較了反應(yīng)溫度、水分添加量、底物質(zhì)量比對(duì)結(jié)合率的影響，發(fā)現(xiàn)水的添加量是影響結(jié)合率的最顯著因素，只有水分添加量超過0.5%才具有較高的結(jié)合率。但反應(yīng)體系中含水量過高會(huì)加劇磷脂的水解[27]，導(dǎo)致最終產(chǎn)物得率降低。Totani等[10]用柱狀假絲酵母脂肪酶在正己烷體系催化大豆磷脂和沙丁魚油(含11.2%EPA和9.8%DHA)的酯交換反應(yīng)，所得反應(yīng)產(chǎn)物中EPA和DHA的量分別為14.5%和3.1%；由于反應(yīng)體系中含有大量的水，EPA/DHA-PL的得率較低，雖然用甘油替代反應(yīng)體系中的水可將產(chǎn)物得率由17.0%提高到46.8%，但產(chǎn)物中EPA的量也隨之降低至11.2%；若采用丙二醇和水的混合物替代反應(yīng)體系中的水[25]，可在保證結(jié)合率無明顯降低的同時(shí)顯著提高產(chǎn)物得率。即使不額外向反應(yīng)體系中加入水，由于底物和酶制劑本身含有一定量的水分[9,21]，EPA/DHA-PL的酶促制備過程中水解反應(yīng)也是難以避免的，有研究者甚至認(rèn)為水解反應(yīng)可能是酸解反應(yīng)過程中必不可少的中間步驟[12,23]。Haraldsson等[12]認(rèn)為，在1,2-二棕櫚酸磷脂酰膽堿和EPA的酸解反應(yīng)初期，磷脂水解產(chǎn)生大量的sn-2-溶血磷脂(sn-2-LPC)，一部分sn-2-LPC可與EPA/DHA反應(yīng)生成EPA/DHA-PL，也有一部分sn-2-LPC會(huì)因分子內(nèi)酰基遷移作用使得位于sn-2位上的脂肪酸緩慢轉(zhuǎn)移到sn-1位上，從而形成sn-1-溶血磷脂(sn-1-LPC)，由于sn-1-LPC的熱力學(xué)穩(wěn)定性強(qiáng)于sn-2-LPC，在長時(shí)間的反應(yīng)過程中，sn-1-LPC不斷得到積累，并先后生成不含脂肪酸的甘油磷酰膽堿、sn-1-EPA-溶血磷脂、sn-2-EPA-溶血磷脂和含有2個(gè)EPA的磷脂等產(chǎn)物。該過程提示：雖然采取一定措施脫除體系中的水分也是提高產(chǎn)物得率的有效方法，但選擇合適的脫水時(shí)機(jī)至關(guān)重要——在反應(yīng)初期脫水，雖然可以提高產(chǎn)物得率，但會(huì)抑制磷脂水解，明顯降低EPA/DHA與磷脂的結(jié)合率[16]，如果在反應(yīng)24 h后脫水，不僅可以獲得較高的產(chǎn)物得率，也可明顯提高結(jié)合率[21]。

1.4 其他影響因素

除了上述因素，一些反應(yīng)條件如反應(yīng)溫度、底物(EPA/DHA供體和磷脂)的比例和酶量等也會(huì)對(duì)酰基替換法的反應(yīng)結(jié)果產(chǎn)生明顯的影響。

?；鎿Q法制備EPA/DHA-PL的適宜溫度通常為45～60 ℃，在一定的范圍內(nèi)，提高反應(yīng)溫度可增強(qiáng)酶活力并降低反應(yīng)體系黏度，從而有助于結(jié)合率的提高。如Li等[20]將反應(yīng)溫度從40 ℃提高到55 ℃，可將EPA和DHA的結(jié)合率從13.4%提高到27.8%。而提高底物中EPA/DHA的比例可增強(qiáng)溶血磷脂的分子內(nèi)?；w移作用并促進(jìn)溶血磷脂與EPA/DHA的酯化反應(yīng)，在一定程度上有助于結(jié)合率的提高，但同時(shí)也會(huì)抑制酸解反應(yīng)過程中磷脂水解的進(jìn)行，且過高的底物比例不利于產(chǎn)物的分離純化，所以提高底物比例對(duì)酰基替換法(尤其是酸解反應(yīng))效率影響的結(jié)論并不一致[11-12,23]。

另外，酸解反應(yīng)中EPA/DHA的結(jié)合率高低依賴于酶量的大小[12]，充足的酶量可以保證在磷脂水解的同時(shí)催化EPA/DHA與溶血磷脂的酯化反應(yīng)，酶量不足則會(huì)使酯化反應(yīng)受限，從而不利于結(jié)合率的提高[11]。

還有一些物質(zhì)，如含氨基的化合物和二價(jià)陽離子可通過提高脂肪酶的活力來提高反應(yīng)結(jié)合率[7,31]。Marsaoui等[24]以固定化米黑根毛霉脂肪酶為催化劑，在正己烷體系中通過酯-酯交換反應(yīng)制備EPA/DHA-PL，反應(yīng)24 h和48 h的結(jié)合率分別為5.6%和12.1%，但反應(yīng)體系中加入尿素和Mg2+之后可將結(jié)合率分別提高到17.7%和50.0%。

2 酰基結(jié)合法

?；Y(jié)合法主要是以溶血型磷脂和EPA/DHA為底物，經(jīng)酯合成反應(yīng)得到富含EPA/DHA的磷脂，該法最常使用的催化劑為磷脂酶A2(圖2)。

圖2 ?；Y(jié)合法制備EPA/DHA-PLFig.2 Preparation of EPA/DHA-PL by acyl-conjunction method

An等[32]最早采用該方法嘗試制備富含EPA/DHA的磷脂酰膽堿，首先通過豬胰磷脂酶A2水解磷脂獲得溶血磷脂酰膽堿，之后采用相同的酶制劑在微乳反應(yīng)體系催化溶血磷脂酰膽堿和EPA/DHA的酯合成反應(yīng)，最終產(chǎn)物得率約為6%。為了提高產(chǎn)品得率，Lilja-Hallberg等[33-34]嘗試在有機(jī)溶劑體系(將溶血磷脂和EPA/DHA混合后加入少量異辛烷)中進(jìn)行磷脂的合成，通過提高底物中EPA/DHA的比例、降低反應(yīng)體系中的水分含量并延長反應(yīng)時(shí)間(80 h和9 d)，將產(chǎn)品得率提高到21%以上。之后H?rr?d等[35]用高壓反應(yīng)器改善底物與固定化酶的接觸條件，將反應(yīng)時(shí)間縮短到20 h的同時(shí)將產(chǎn)品得率提高到25%。

通常認(rèn)為磷脂酶A2只有在水分活度不低于0.2時(shí)才具有活力[36]，適當(dāng)提高反應(yīng)體系中的水分雖可提高初始反應(yīng)速度[35]，但也會(huì)加劇水解反應(yīng)，降低產(chǎn)品得率。為了提高磷脂酶A2的催化效率，Hosokawa等[25]向反應(yīng)體系中加入適量水模擬物——甲酰胺作為酶激活劑，在提高反應(yīng)速度的同時(shí)抑制磷脂的水解，最終將EPA磷脂產(chǎn)品得率提高到60%左右。Awano等[37]借鑒該方法，在溶血磷脂和DHA的反應(yīng)中加入甲酰胺，進(jìn)一步地在反應(yīng)后期脫除甲酰胺和反應(yīng)產(chǎn)生的水分，可將DHA磷脂的得率提高到87.1%。而Tanaka等[38]于2012年公布了一項(xiàng)制備EPA/DHA-PL的專利，其在以甘油為溶劑的反應(yīng)體系中加入CaCl2溶液、氨基酸和肽,以激活磷脂酶A2，催化溶血磷脂和DHA的量為51.8%的脂肪酸，在真空條件下反應(yīng)，獲得DHA的量高達(dá)34.2%的磷脂。

除了磷脂酶A2，具有酯合成活力的脂肪酶也可作為該方法的催化劑。Lyberg等[36]比較了5種脂肪酶和2種磷脂酶催化溶血磷脂和EPA/DHA合成EPA/DHA-PL的結(jié)果，發(fā)現(xiàn)少根根霉(Rhizopusarrhizus)脂肪酶和Novozym 435都能催化EPA與溶血磷脂的反應(yīng)，但僅有Novozym 435可催化DHA與溶血磷脂的反應(yīng)。由于溶血磷脂底物的sn-1位上不含EPA/DHA，在不考慮?；w移和水解反應(yīng)的前提下，即使sn-2位全部與EPA/DHA結(jié)合，所得產(chǎn)物中EPA/DHA的量最高也僅能達(dá)到50%左右。Hong等[39]以Novozym 435為催化劑，通過甘油磷酰膽堿(GPC)和共軛亞油酸(為72.2%)反應(yīng)可獲得共軛亞油酸的量最高為71.5%的磷脂產(chǎn)品，這說明以GPC和EPA/DHA為底物制備高純度EPA/DHA-PL具有一定的可行性，在此基礎(chǔ)上，Liu等[40]在無溶劑體系中通過GPC與DHA的酯合成反應(yīng)得到DHA溶血磷脂產(chǎn)品。

3 ?；摮?/h2>

南極磷蝦、海洋魚卵等材料中富含以磷脂形式存在的EPA和DHA，且EPA和DHA多存在于磷脂甘油骨架的sn-2位上，為了進(jìn)一步提高其EPA和DHA含量，一方面可以采用?；鎿Q法，將磷脂sn-1位上的其他脂肪酸替換為EPA和DHA[22]，另一方面則可以采用?；摮?，即通過酶促水解(或醇解)選擇性地除去其甘油骨架上連接的其他脂肪酸，從而得到EPA/DHA被相對(duì)富集的溶血磷脂(圖3)。

圖3 ?；摮ㄖ苽銭PA/DHA-PLFig.3 Preparation of EPA/DHA-PL by acyl-removal method

磷脂酶A1能夠?qū)Ｒ恍缘厮饬字瑂n-1位的脂肪酸，可直接用于?；摮ㄖ苽銭PA/DHA-PL(而磷脂酶A2因?yàn)榭蓪Ｒ恍缘厮饬字瑂n-2位脂肪酸，通常不在該方法的考慮范圍內(nèi))。如王琦[41]以Lecitase ultra為催化劑水解鳶烏賊卵磷脂，可將鳶烏賊卵磷脂中DHA的量由40.3%提高到51.1%。

雖然甘油三酯和磷脂在化學(xué)結(jié)構(gòu)上具有一定的相似性，但并非能夠水解甘油三酯的脂肪酶都能用于磷脂的水解，且脂肪酶水解磷脂能力的大小還與反應(yīng)體系有關(guān)[42]。Hara等[43]發(fā)現(xiàn)，在反膠束體系中，來源于毛霉或根霉的脂肪酶具有較高的磷脂水解活力；在有機(jī)溶劑體系中，來源于柔毛腐質(zhì)霉(Humicolalanuginosa)、代氏根霉(Rhizopusdelemar)和褶皺假絲酵母的脂肪酶具有較高的磷脂水解活力[44]。由于天然存在的EPA/DHA多位于磷脂甘油骨架的sn-2位上，脂肪酶的篩選也需進(jìn)一步考慮其催化位點(diǎn)偏好性，如來源于米黑根毛霉的脂肪酶不僅具有較高的磷脂水解活力，且能專一地水解磷脂sn-1位脂肪酸[45]。Ono等[46]以調(diào)節(jié)水分活度的固定化米黑根毛霉脂肪酶Lipozyme IM為催化劑，通過在正己烷體系中磷脂的部分水解反應(yīng)，將魷魚皮磷脂的DHA的量由33.3%提高至近60%，將DHA蛋黃磷脂的DHA的量由10.9%提高至35%以上。由于?；w移作用，磷脂sn-1位上的酯鍵被水解斷裂后暴露出羥基，sn-2位上的EPA/DHA在一定條件下可遷移到sn-1位上[47]，隨后被水解成為游離的EPA/DHA，導(dǎo)致產(chǎn)品得率降低。為了提高EPA/DHA-PL的得率，應(yīng)當(dāng)選擇難于催化EPA/DHA水解的脂肪酶。球等鞭金藻(Isochrysisgalbana)中的DHA主要為磷脂型，且DHA主要位于磷脂的sn-2位，Devos等[48]從天野公司和諾維信公司的12種酶制劑中篩選出對(duì)DHA具有“歧視”效應(yīng)的米根霉(Rhizopusoryzae)和爪哇毛霉(Mucorjavanicus)脂肪酶用于球等鞭金藻DHA磷脂的選擇性水解。

除水解反應(yīng)之外，磷脂的醇解反應(yīng)(如磷脂與乙醇反應(yīng)生成溶血磷脂和脂肪酸乙酯)也可用于提高天然海洋磷脂中EPA和DHA的含量[49]。

?；摮ㄔ谔岣咛烊缓Ｑ罅字蠩PA和DHA含量的同時(shí)，伴隨著富含EPA/DHA的溶血磷脂(EPA/DHA-LPL)的產(chǎn)生，該成分除了具有比普通磷脂更強(qiáng)的乳化性能之外，還被認(rèn)為是為大腦補(bǔ)充DHA的更佳載體[50-52]。

4 結(jié)論與展望

現(xiàn)有的酶促制備EPA/DHA-PL的方法通常影響因素多、制備速度慢且工藝成本較高，但其獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)在于可通過磷脂、EPA/DHA供體、酶制劑和制備方法的選擇以及反應(yīng)條件的優(yōu)化來控制產(chǎn)品的磷脂種類和EPA/DHA的含量或比例。

目前，從海洋生物尤其是南極磷蝦中提取的EPA/DHA-PL產(chǎn)品已經(jīng)實(shí)現(xiàn)產(chǎn)業(yè)化，并在EPA/DHA產(chǎn)品市場(chǎng)中占有越來越高的份額。EPA/DHA-PL的酶促制備目前仍鮮見成功的商業(yè)化案例，但隨著EPA/DHA-PL產(chǎn)品需求的不斷增加和工藝成本的不斷降低，酶促制備的EPA/DHA-PL產(chǎn)品將會(huì)有越來越良好的市場(chǎng)前景。