曹亞蘭，羅艷萍，羅錦杰，鄭麗美

（廣東一方制藥有限公司，廣東佛山 528244）

0 引言

芝麻丸為廣東一方制藥有限公司研發(fā)的產(chǎn)品，主要原料為黑芝麻，含有優(yōu)質(zhì)的蛋白質(zhì)、豐富的礦物質(zhì)，以及不飽和脂肪酸、維E和珍貴的芝麻素及黑色素，可延緩衰老、滋補(bǔ)肝腎、潤(rùn)養(yǎng)脾肺[1]。芝麻素是其主要活性成分之一，具有抗氧化、降低膽固醇、保護(hù)肝臟等生理活性功能[2-3]。試驗(yàn)采用高效液相色譜法（HPLC）測(cè)定芝麻丸中芝麻素的含量，為芝麻丸的品質(zhì)控制提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

芝麻丸（批號(hào)：S20180903，S20180918，S20181021，S20181115，S20181201，S20181225，S20190110）廣東一方制藥有限公司提供；芝麻素對(duì)照品（批號(hào)：0836-200002），中國(guó)食品藥品檢定研究院提供。

1.2 儀器與設(shè)備

Aglient 1260型高效液相色譜儀，美國(guó)安捷倫公司產(chǎn)品；AB265-S/10型電子天平，瑞士梅特勒-托利多儀器有限公司產(chǎn)品；KQ-500DE型超聲波清洗器，昆明市超聲儀器有限公司產(chǎn)品；JYL-C022E型九陽(yáng)料理機(jī)，九陽(yáng)股份有限公司產(chǎn)品；TDL-4000C型臺(tái)式離心機(jī)，上海安亭科學(xué)儀器廠產(chǎn)品。

1.3 方法

1.3.1 色譜條件

色譜柱為Agilent ZORBAX SB-C18（4.6 mm×150 mm，5μm），流動(dòng)相為80%甲醇，檢測(cè)波長(zhǎng)290 nm，對(duì)照品溶液進(jìn)樣量20μL，供試品溶液進(jìn)樣量10μL，流速0.8 mL/min，柱溫25℃。

1.3.2 芝麻素對(duì)照品儲(chǔ)備液

精密稱取4.0 mg芝麻素對(duì)照品，置于200 mL量瓶中，用適量80%甲醇溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得20μg/mL的對(duì)照品儲(chǔ)備液。

1.3.3 供試品溶液

精密稱取粉碎后的芝麻丸約2 g，置于九陽(yáng)料理機(jī)中，加入體積分?jǐn)?shù)80%的甲醇溶液40 mL，均漿30 s，置于具塞離心管中，超聲處理30 min，置于離心機(jī)中以轉(zhuǎn)速4 000 r/min離心5 min，重復(fù)提取2次，合并上清液于100 mL量瓶中，用體積分?jǐn)?shù)80%甲醇溶液定容至刻度，混勻，靜置，取上清液用微孔濾膜（0.45μm濾膜）濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2 結(jié)果與分析

2.1 專屬性考查

取芝麻素對(duì)照品儲(chǔ)備液與供試品溶液，按上述色譜條件分別注入高效液相色譜儀測(cè)定。

芝麻素含量測(cè)定HPLC色譜圖見(jiàn)圖1。

圖1 芝麻素含量測(cè)定HPLC色譜圖

供試品溶液中其他未知成分與芝麻素分離完全，對(duì)測(cè)定無(wú)干擾，芝麻素的保留時(shí)間為6.7 min。

2.2 線性關(guān)系考查

精密移取芝麻素對(duì)照品儲(chǔ)備液適量，分別配制質(zhì)量濃度為1，2，4，10，20μg/mL系列芝麻素對(duì)照品溶液，分別進(jìn)樣20μL，按上述色譜條件進(jìn)行測(cè)定，記錄峰面積。以芝麻素峰面積積分值（mV×S）為縱坐標(biāo)（Y）、芝麻素對(duì)照品溶液進(jìn)樣量（μg）為橫坐標(biāo)（X），進(jìn)行線性回歸，得回歸方程為Y=1 453.7X+2.268 9（R2=0.999 9），結(jié)果表明芝麻素在0.02～0.40μg的范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系。

2.3 精密度試驗(yàn)

取芝麻素對(duì)照品溶液（10μg/mL），按上述色譜條件重復(fù)測(cè)定6次，每次進(jìn)樣量為20μL，芝麻素峰面積的RSD為0.16%，表明儀器精密度較好。

2.4 穩(wěn)定性試驗(yàn)

按1.3.3的方法制備芝麻丸供試品溶液（批號(hào)：S20180903），按照上述色譜條件分別于0，1，2，4，6，8，12 h進(jìn)行測(cè)定，每次進(jìn)樣量為10μL，測(cè)得芝麻素峰面積RSD為0.39%，表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.5 重復(fù)性試驗(yàn)

按1.3.3方法制備6份芝麻丸供試品溶液（批號(hào)：S20180903），按照上述色譜條件測(cè)定芝麻素的含量。芝麻丸供試品中芝麻素含量測(cè)定結(jié)果的RSD為2.06%，表明該方法重復(fù)性較好。

2.6 加樣回收率試驗(yàn)

取已知含量的同一批芝麻丸供試品（批號(hào)：S20180903，含量為0.62 mg/g）適量，粉碎，取約1.0 g，精密稱定，共9份，分別精密加入適量的芝麻素對(duì)照品，按1.3.3方法，制備低、中、高3個(gè)質(zhì)量濃度水平的供試品溶液，在上述色譜條件下測(cè)定，計(jì)算回收率。

芝麻素的加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 芝麻素的加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果（9份樣品）

由表1可知，芝麻素平均回收率為99.14%～100.02%，RSD為0.40%～1.45%。表明所制作的芝麻丸中芝麻素含量測(cè)定方法準(zhǔn)確、可靠。

2.7 樣品測(cè)定

按照1.3.3方法制備7批芝麻丸供試品溶液，按上述1.3.1色譜條件測(cè)定，計(jì)算芝麻丸中芝麻素含量。

樣品測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 樣品測(cè)定結(jié)果（n=3）

3 結(jié)論

考查了超聲處理和加熱回流不同提取方式對(duì)芝麻丸中芝麻素提取的影響[4]，結(jié)果表明，2種提取方法對(duì)芝麻素的提取均較完全，測(cè)定結(jié)果可靠，沒(méi)有顯著性差異，最終采用超聲處理30 min的提取方式。該方法操作簡(jiǎn)便、靈敏度高、結(jié)果準(zhǔn)確，穩(wěn)定性好，可為芝麻丸的質(zhì)量控制與評(píng)價(jià)提供科學(xué)依據(jù)。