于敏 岳丹霞 喬媛媛

摘要 研究了5種濃度辛硫磷處理液對(duì)泥鰍腦細(xì)胞谷丙轉(zhuǎn)氨酶（GPT）活性的影響。結(jié)果表明：低濃度的辛硫磷處理液對(duì)泥鰍腦細(xì)胞中的GPT活性起誘導(dǎo)作用，而高濃度則起抑制作用。建議以泥鰍腦組織GPT活性變化作為水環(huán)境監(jiān)測(cè)的生物指標(biāo)，從而達(dá)到評(píng)價(jià)水生生態(tài)環(huán)境的目的。

關(guān)鍵詞 辛硫磷;泥鰍;谷丙轉(zhuǎn)氨酶;生物指標(biāo)

中圖分類(lèi)號(hào) X503.225文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A

文章編號(hào) 0517-6611（2019）17-0089-02

Abstract Effects of 5 kinds of concentrations of phoxim on the activity of GPT for loach brain were studied.The results showed that the activities of GPT were induced by the lower concentration of phoxim，but restrained by the higher ones.It was suggested that the change of GPT activity in loach brain should be used as a biomarker for water environment monitoring，so as to achieve the purpose of evaluating aquatic ecological environment.

Key words Phoxim;Loach;GPT;Biomarker

辛硫磷（phoxim）是一種高效、低毒、低殘留的廣譜有機(jī)磷農(nóng)藥[1]。辛硫磷抑制膽堿酯酶，使其在體內(nèi)大量積蓄，使神經(jīng)興奮失常，從而導(dǎo)致蟲(chóng)體死亡[2]。閆建國(guó)等[3]采用微核試驗(yàn)和單細(xì)胞凝膠電泳試驗(yàn)對(duì)辛硫磷的遺傳毒性進(jìn)行檢驗(yàn)，結(jié)果表明辛硫磷對(duì)小鼠具有遺傳毒性;劉秀芳等[4]的研究也表明一定濃度的辛硫磷對(duì)小鼠生殖系統(tǒng)有毒性作用，并且對(duì)小鼠具有致畸性。

泥鰍是國(guó)內(nèi)外常用的試驗(yàn)魚(yú)種，它極容易飼養(yǎng)，在我國(guó)南北方均有廣泛的分布，因其分布廣泛，它不僅在作為試驗(yàn)對(duì)象方面有重要意義，而且在作為檢測(cè)指標(biāo)方面也有十分重要意義。近年來(lái)，生態(tài)毒理學(xué)和生態(tài)化學(xué)領(lǐng)域越來(lái)越多地將生物體內(nèi)的酶指標(biāo)作為生物學(xué)的標(biāo)志物來(lái)評(píng)估受試化學(xué)品對(duì)生物的毒害作用[5]。谷丙轉(zhuǎn)氨酶（glutamicpyruvic transaminase，GPT）是泥鰍腦內(nèi)的重要生物標(biāo)志物[6]。生物標(biāo)志物具有特異性強(qiáng)、反應(yīng)靈敏的特點(diǎn)，并且能夠?qū)Χ拘孕?yīng)起到早期預(yù)警的作用。以泥鰍腦組織中谷丙轉(zhuǎn)氨酶作為生物標(biāo)志物能夠反映出辛硫磷毒物對(duì)泥鰍腦的污染水平。

農(nóng)藥會(huì)隨著水的遷移進(jìn)入到環(huán)境中，導(dǎo)致水生生物得病，甚至導(dǎo)致水生生物死亡，目前在國(guó)內(nèi)鮮見(jiàn)相關(guān)方面的報(bào)道。筆者以泥鰍為研究對(duì)象，以期為我國(guó)農(nóng)藥的安全使用提供指導(dǎo)，從而達(dá)到保護(hù)環(huán)境和人體健康的作用。

1 材料與方法

1.1 材料 泥鰍全部購(gòu)自煙臺(tái)市紅旗水產(chǎn)市場(chǎng)，平均質(zhì)量約8.0 g/條;辛硫磷乳油由山東勝邦魯南農(nóng)藥有限公司生產(chǎn)（40%，乳油）;試劑盒購(gòu)自南京建成生物工程研究所。

1.2 方法

1.2.1 急性毒性試驗(yàn)。通過(guò)預(yù)試驗(yàn)，初步得到使泥鰍最高全部不死亡濃度和致使泥鰍最低全部死亡的濃度。根據(jù)最高全部不死亡濃度和最低全部死亡的濃度設(shè)計(jì)67.5、70.0、72.5、75.0、77.5、80.0、82.5 ml/L藥液共7個(gè)急性毒性濃度組，根據(jù)24 h和48 h所得出的數(shù)據(jù)，用加權(quán)概率法計(jì)算出半數(shù)致死濃度TLm，進(jìn)而得到安全濃度。

1.2.2 慢性毒性試驗(yàn)。從每個(gè)試驗(yàn)組中挑選健康、體型均一、體表沒(méi)有破損的泥鰍若干條進(jìn)行慢性毒性試驗(yàn)。以即得的半數(shù)致死濃度為基礎(chǔ)，用等比數(shù)列的方法，設(shè)計(jì)出3.55、7.10、14.20、28.40、56.80 μL/L共5個(gè)濃度組（標(biāo)記為1～5組，每個(gè)濃度組設(shè)置3個(gè)平行組），并按照設(shè)計(jì)好的濃度向各個(gè)水桶中加入相應(yīng)的辛硫磷處理液。另設(shè)一不加辛硫磷的對(duì)照組（標(biāo)記為0組），每個(gè)試驗(yàn)組3次平行。在24、48、96 h后分別取各濃度組中有活力的泥鰍肝臟，對(duì)谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性進(jìn)行測(cè)定，腦組織勻漿的制備和轉(zhuǎn)氨酶活性的測(cè)定按照南京建成生物工程研究所提供的方法進(jìn)行。

2 結(jié)果與分析

2.1 急性毒性試驗(yàn)結(jié)果 根據(jù)處理過(guò)24 h和48 h的泥鰍死亡數(shù)，利用加權(quán)概率法，并用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理分析，分別得出24 h半數(shù)致死濃度（TLm24）為81.52 μL/L，95%置信區(qū)間為（77.85，98.32）μL/L;48 h半數(shù)致死濃度（TLm48）為67.98 μL/L，95%置信區(qū)間為（19.02，72.26）μL/L。

根據(jù)上述得出的結(jié)果，按下面公式計(jì)算出安全濃度：

安全濃度=TLm48×0.3（TMm24/TLm48） 2

式中，TLm24 和TLm48 分別表示24 h半數(shù)致死濃度和48 h半數(shù)致死濃度。

代入上述試驗(yàn)數(shù)據(jù)，求得其安全濃度為14.18 μL/L。

2.2 慢性毒性試驗(yàn)結(jié)果 運(yùn)用統(tǒng)計(jì)軟件IBMSPSS19和析因設(shè)計(jì)的方差分析研究辛硫磷對(duì)泥鰍腦谷丙轉(zhuǎn)氨酶（GPT）活性的影響。24、48、96 h不同濃度組谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性的測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表1;酶活性比較如圖1所示。

由表1可知，不同濃度的辛硫磷對(duì)泥鰍的誘導(dǎo)作用是不同的，相同濃度的處理液中，隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，誘導(dǎo)作用稍有變化。在經(jīng)過(guò)相同時(shí)間段的處理之后，不同濃度的辛硫磷對(duì)泥鰍腦組織中谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性的誘導(dǎo)作用有明顯差異。

由圖1可知，對(duì)照組的谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性隨著時(shí)間的延長(zhǎng)基本沒(méi)有變化。試驗(yàn)1組中，谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性總體呈現(xiàn)上升趨勢(shì);2組中，谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性隨著時(shí)間的延長(zhǎng)呈現(xiàn)上升趨勢(shì)，48～96 h內(nèi)的上升趨勢(shì)比24～48 h明顯;3組中，谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢(shì)，96 h的谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性低于未處理時(shí)的水平;4組及5組中，谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性隨著時(shí)間的延長(zhǎng)一直呈現(xiàn)下降趨勢(shì)，4組中24～48 h的谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性下降趨勢(shì)比48～96 h明顯。

3 結(jié)論

谷丙轉(zhuǎn)氨酶在動(dòng)物的線(xiàn)粒體中廣泛存在，是一種對(duì)動(dòng)物機(jī)體非常重要的轉(zhuǎn)氨酶，在動(dòng)物機(jī)體的蛋白質(zhì)代謝過(guò)程中能夠起到非常重要的作用[7-10]。該試驗(yàn)結(jié)果表明，在較低的辛

硫磷濃度時(shí)，泥鰍腦組織中的谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性首先呈現(xiàn)上升的趨勢(shì)，這可能是由于泥鰍對(duì)辛硫磷產(chǎn)生的應(yīng)激反應(yīng)造成的。但是隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，泥鰍腦組織中谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性呈下降趨勢(shì)，這可能是因?yàn)槟圉q自身的抵抗能力有限，已經(jīng)不能自己解除辛硫磷對(duì)其的毒害作用，辛硫磷對(duì)泥鰍產(chǎn)生了較強(qiáng)的毒害作用，所以造成谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性下降。在經(jīng)過(guò)較高濃度的辛硫磷毒液處理之后，泥鰍腦組織的谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性一直呈下降趨勢(shì)，這可能是由于辛硫磷的濃度太高，泥鰍自身不能抵抗該濃度辛硫磷毒液的毒害作用。

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