田建海 李曉娟 郭懷遠 徐建平

[摘要] 目的 研究膀胱癌組織中尿路上皮癌抗原1（UCA1）、micoRNA-141（miR-141）的表達及臨床意義。 方法 以2013年2月～2015年2月山東省臨沂市腫瘤醫(yī)院收治的膀胱癌患者83例為研究對象。采用實時熒光定量聚合酶鏈式反應檢測UCA1、miR-141表達情況，并分析UCA1、miR-141表達與患者臨床病理特征的關系。此外，對所有患者均進行為期3年的隨訪，將其按照生存狀況的不同分為存活組（n = 39）與死亡組（n = 44），比較兩組UCA1、miR-141表達情況。 結果 膀胱癌組織中UCA1、miR-141陽性率相比癌旁正常組織較高（均P < 0.05）。病理分級為G1、臨床分期T1～T2期、無淋巴結轉移的膀胱癌組織中UCA1陽性率相比病理分級為G2～G3、臨床分期T3～T4期、有淋巴結轉移較低（均P < 0.05）。臨床分期T1～T2期、無淋巴結轉移的膀胱癌組織中miR-141陽性率相比臨床分期T3～T4期、有淋巴結轉移較低（均P < 0.05）。存活組膀胱癌組織中UCA1、miR-141陽性率相比死亡組較低（均P < 0.05）。 結論 膀胱癌組織中UCA1、miR-141均存在明顯高表達，臨床工作中可通過上述兩項指標的檢測進行膀胱癌患者病情判斷以及預后評估。

[關鍵詞] 膀胱癌;尿路上皮癌抗原1;micoRNA-141;生存狀況

[中圖分類號] R737.14? ? ? ? ? [文獻標識碼] A? ? ? ? ? [文章編號] 1673-7210（2019）07（b）-0121-04

Expression and clinical significance of UCA1 and miR-141 in bladder cancer tissue

TIAN Jianhai1? ?LI Xiaojuan2? ?GUO Huaiyuan1? ?XU Jianping1

1.Department of Urology， Linyi Cancer Hospital， Shandong Province， Linyi? ?276001， China; 2.Medical Department， Linyi Cancer Hospital， Shandong Province， Linyi? ?276001， China

[Abstract] Objective To study the expression and clinical significance of urothelial carcinoma antigen 1 （UCA1） and micoRNA-141 （miR-141） in bladder cancer tissue. Methods A total of 83 patients with bladder cancer admitted to Linyi Cancer Hospital from February 2013 to February 2015 were taken as research objects. The expression of UCA1 and miR-141 were detectd by real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction and the relationship between the expression of UCA1 and miR-141 and the clinicopathological characteristics of the patients was analyzed. In addition， all patients were followed up for 3 years and divided into survival group （n = 39） and death group （n = 44） according to different survival conditions. The expression of UCA1 and miR-141 was compared between the two groups. Results The positive rate of UCA1 and miR-141 in bladder cancer tissues was higher than those in adjacent normal tissues （all P < 0.05）. The positive rate of UCA1 in bladder cancer with pathological grade G1， clinical stage T1-T2 and no lymph node metastasis was lower than that in bladder cancer with pathological grade G2-G3， clinical stage T3-T4 and lymph node metastasis （all P < 0.05）. The positive rate of miR-141 in bladder cancer tissues with clinical stage T1-T2 and no lymph node metastasis was lower than that in bladder cancer tissues with clinical stage T3-T4 and lymph node metastasis （all P < 0.05）. The positive rate of UCA1 and miR-141 in survival group was lower than those in death group （all P < 0.05）. Conclusion UCA1 and miR-141 is highly expressed in bladder cancer tissues. The two indicators mentioned above can be used in clinical work to evaluate the condition and prognosis of patients with bladder cancer.

[Key words] Bladder cancer; Urothelial carcinoma antigen 1; micoRNA-141; Survival condition

膀胱癌屬于臨床上最為常見的泌尿系惡性腫瘤之一，發(fā)病率在所有泌尿系腫瘤中位居首位，嚴重影響人們生命與健康。目前對于膀胱癌的病因和發(fā)病機制仍未完全明確，相關研究表明膀胱癌的發(fā)生是多種基因共同作用導致的結果[1]。近年來隨著研究的逐漸深入，越來越多的學者發(fā)現(xiàn)非編碼基因在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中起到重要作用[2]。其中micoRNA是一類長度在20～30個核苷酸的非編碼單鏈RNA分子[3]。有研究報道，miR-141在卵巢癌、腎癌、乳腺癌以及子宮內膜癌中均存在明顯的表達異常，且與腫瘤的分化程度以及惡性程度密切相關。而尿路上皮癌抗原1（UCA1）屬于一個新的膀胱癌特異性非編碼基因，可能與microRNA的調控、膀胱癌發(fā)生有關[4-5]。然而，目前臨床上關于UCA1、microRNA-141（microR-141）與膀胱癌關系的相關研究報道并不多見。本研究通過檢測膀胱癌組織中UCA1、miR-141的表達，為臨床膀胱癌的早期診斷、臨床治療以及預后評估提供新的靶點以及思路?，F(xiàn)報道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料

以2013年2月～2015年2月山東省臨沂市腫瘤醫(yī)院收治的膀胱癌患者83例為研究對象。納入標準：①所有患者均符合我國膀胱癌診治指南中相關診斷標準[6]，且經手術病理組織檢查以及影像學檢查確診為膀胱癌;②入院前均未接受任何相關抗腫瘤治療;③年齡>20歲;④臨床病歷資料完整。排除標準：①合并心、肝、腎、肺等臟器功能嚴重障礙者;②伴有其他惡性腫瘤疾病者;③存在交流溝通障礙或精神疾病者;④妊娠期或哺乳期婦女;⑤正參與其他研究者。83例患者中，男71例，女12例;年齡33～79歲，平均（51.39±2.38）歲;按照世界衛(wèi)生組織（WHO）標準[7]進行病理分級：G1級28例，G2級37例，G3級18例;按照國際抗癌聯(lián)盟（UICC）標準進行臨床分期：T1期30例，T2期22例，T3期20例，T4期11例;有淋巴結轉移48例，無淋巴結轉移35例。所有患者及其家屬已同意，且醫(yī)院倫理委員會予以批準。

1.2 研究方法

收集所有患者膀胱癌組織及癌旁正常組織（取材處距離癌組織邊緣≥3 cm，術后經病理確診為正常組織），分別采用實時熒光定量聚合酶鏈式反應檢測UCA1、miR-141表達情況，具體方式如下：首先采用Trizol（購自北京華邁科技生物有限責任公司）以及StarSpin Small RNA Kit（購自上?？道噬锟萍加邢薰荆┨崛〗M織總RNA，參照試劑盒說明書的反應體系和反應條件（95℃，5 min;93℃，10 s;61℃，30 s，共40個循環(huán)），采用定量PCR儀進行實驗。通過LnRcute lncRNA cDNA第一鏈合成試劑盒與miRNA First Strand cDNA Synthesis Kit（購自北京百奧萊博科技有限公司）逆轉錄獲取cDNA。然后將cDNA作為模板，以β-actin及U6作為內參基因，設計引物序列如下，UCA1正向引物：5′-CTAGACCGGTTTCTCCTCATTC-3′，UCA1反向引物：5′-GCGTGATTGGCGGTCAAAAGAG-3′;miR-141正向引物：5′-CTCAAGGCAACCTACCGAAAAG-3′，miR-141反向引物：5′-TATCGGACCCATCACGGAGTGG-3′;β-actin正向引物序列：5′-CAGGGCGTGATGGTGGGCA-3′，β-actin反向引物序列：5′-GCTGTCAACCGTTCCAGGTCG-3′，U6正向引物序列：5′-GATTAGAACCGTCGGTAACGGAA-3′，U6反向引物序列：5′-AGCGATCTCGTTGGCCTTTCTACC-3′。分別檢測UCA1、miR-141表達水平。其中反應體系為25 μL，包括Cdna 2.0 μL;Priner 1.0 μL;RNase H2O 9.5 μL;SYBR Prinix Ex TaqTM 12.5 μL（購自寶生物工程有限公司）。將上述反應試劑分別加入反應孔，離心后上機檢測。每個樣品重復檢測3次，最終結果以2-△△Ct法表示。其中UCA1、miR-141引物由北京賽百盛基因技術有限公司進行合成，熒光定量PCR儀購自艾本德中國有限公司。

1.3 觀察指標

比較膀胱癌組織與癌旁正常組織中UCA1、miR-141表達情況，并分析UCA1、miR-141表達與患者臨床病理特征以及生存狀況的關系，對所有患者進行為期3年的隨訪，記錄其生存、死亡情況。

1.4 評價標準

將UCA1、miR-141相對表達量2-△△Ct≥1記為陽性，反之記為陰性[8]。

1.5 統(tǒng)計學方法

本研究數(shù)據(jù)均通過SPSS 20.0軟件予以檢測分析，計數(shù)資料通過例數(shù)或百分比表示，進行χ2檢驗。計量資料以均數(shù)±標準差（x±s）表示，進行t檢驗。以P < 0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 膀胱癌組織與癌旁正常組織中UCA1、miR-141表達情況比較

膀胱癌組織中UCA1、miR-141陽性率相比癌旁正常組織較高（均P < 0.05）。見表1。

2.2 膀胱癌組織中UCA1表達與臨床病理特征的關系分析

病理分級為G1、臨床分期T1～T2期、無淋巴結轉移的膀胱癌組織中UCA1陽性率相比病理分級為G2～G3、臨床分期T3～T4期、有淋巴結轉移較低（均P < 0.05）。見表2。

2.3 膀胱癌組織中miR-141表達與臨床病理特征的關系分析

臨床分期T1～T2期、無淋巴結轉移的膀胱癌組織中miR-141陽性率相比臨床分期T3～T4期、有淋巴結轉移較低（均P < 0.05）。見表3。

2.4 膀胱癌組織中UCA1、miR-141表達情況與生存狀況的關系分析

根據(jù)隨訪結果，將其按照生存狀況分為存活組（39例）和死亡組（44例），存活組膀胱癌組織中UCA1、miR-141陽性率相比死亡組較低（均P < 0.05）。見表4。

3 討論

相關研究數(shù)據(jù)表明，膀胱癌的發(fā)病率在所有惡性腫瘤中位居第九，且其發(fā)病率隨著近年來人們生活水平的不斷提高以及飲食結構的逐漸改變，正呈逐年升高趨勢[9-10]。根據(jù)病理類型的分類，膀胱癌主要分為腺癌、小細胞癌、鱗狀細胞癌以及膀胱尿路上皮癌等，其中膀胱尿路上皮癌占比可達90%以上，是膀胱癌最為常見的病理類型[11]。雖然目前臨床上通過切除手術聯(lián)合化療可顯著提高膀胱癌的治療效果，但由于該病具有易侵襲和轉移、復發(fā)率較高的特點，患者存活率仍然不理想。由此可知，如何有效抑制腫瘤細胞發(fā)生侵襲以及轉移是治療膀胱癌的關鍵。相關研究報道表明[12-14]，膀胱癌受多種因素共同調節(jié)，且RNA異常也參與了膀胱癌的發(fā)生發(fā)展。既往對腫瘤的研究主要集中在編碼蛋白的基因，而隨著近年來對腫瘤發(fā)病機制的研究逐漸深入，越來越多的專家學者發(fā)現(xiàn)非編碼RNA在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過程中同樣發(fā)揮著至關重要的作用[15-16]。

本研究結果顯示，膀胱癌組織中UCA1陽性率相比癌旁正常組織較高。這與Zhen等[17]的研究報道基本一致。分析原因，UCA1是一種長鏈非編碼RNA（lncRNA），可通過結合到靶基因如ZEB1和ZEB2等的啟動子區(qū)，上調基因表達后，進而促進膀胱腫瘤細胞的浸潤和轉移。而在用CRISPR/Cas9敲除UCA1基因表達后，腫瘤細胞的惡性生物學行為得到逆轉[18-20]。miR-141作為miR-200家族成員之一，位于12p13.31位點，既往研究顯示其可通過轉錄調節(jié)作用，參與多種腫瘤細胞侵襲以及遷移過程[21]。本研究結果顯示，膀胱癌組織中miR-141陽性率相比癌旁正常組織較高，與劉詠松等[16]、劉瑤等[22]研究結果一致。機制可能是miR-141結合TARF5和TARF6的3′非編碼區(qū)，抑制兩者的表達后，抑制NF-κB信號轉導通路的傳導，進而影響下游基因的表達，如VEGF、IL-8等，促進腫瘤細胞的浸潤和轉移[23]。lncRNA如SNHG15等可作為miR-141的分子海綿，調節(jié)miR-141功能，但目前UCA1與miR-141之間相互作用的機制尚不清楚，有待深入研究。此外，本研究中病理分級為G1、臨床分期T1～T2期、無淋巴結轉移的膀胱癌組織中UCA1陽性率相比病理分級為G2～G3、臨床分期T3～T4期、有淋巴結轉移較低（P < 0.05）。臨床分期T1～T2期、無淋巴結轉移的膀胱癌組織中miR-141陽性率相比臨床分期T3～T4期、有淋巴結轉移較低（P < 0.05）。這些結果提示組織中UCA1、miR-141高表達與膀胱癌高分期、高級別密切相關，通過檢測組織或血清中UCA1、miR-141表達水平，兩者有可能成為輔助膀胱癌的術后病理分期診斷、治療效果評估及預后判斷的分子生物學標志。本研究結果還顯示，存活組膀胱癌組織中UCA1、miR-141陽性率相比死亡組較低（P < 0.05）。這提示UCA1、miR-141陽性表達的上調可能與膀胱癌患者的預后不良密切相關，對患者預后效果具有指示作用。

綜上所述，UCA1、miR-141在膀胱癌組織中均呈顯著高表達，且上述兩項指標與膀胱癌患者的病情進展、淋巴結轉移以及預后均密切相關。臨床工作中通過對其表達水平進行檢測，有利于膀胱癌的早期診斷、臨床治療以及預后評估。然而，上述兩項指標能否成為膀胱癌基因靶向治療的新靶點，有待進一步研究。

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