金偉 郭見多 朱磊 馬曉荷 汪敏 張世清

目前化學(xué)滅螺的主要藥物為氯硝柳胺，但氯硝柳胺對(duì)兩棲動(dòng)物和魚類等非靶生物有較大毒性，研究表明，氯硝柳胺在濃度為0.2 mg/L時(shí)就可以導(dǎo)致兩棲動(dòng)物的死亡；其對(duì)魚類的致死閾值濃度則為0.04～1.00 mg/L[1]。隨著我省血防工作的不斷推進(jìn)，滅螺工作與水產(chǎn)養(yǎng)殖的矛盾、滅螺與野生動(dòng)物保護(hù)之間的矛盾正在逐步加劇，需要尋找一種同時(shí)兼具殺螺效果高和對(duì)魚類及兩棲動(dòng)物低毒性的殺螺藥。

四聚乙醛是一種軟體動(dòng)物(蝸牛、蛞蝓、福壽螺等)的殺滅劑，具有殺滅效果好、見效快、使用方便及很強(qiáng)的引誘性等優(yōu)點(diǎn)[2]，其殺滅釘螺的作用機(jī)制主要是使釘螺體內(nèi)乙酰膽堿酯酶大量釋放，造成神經(jīng)麻痹致死，同時(shí)影響釘螺肌細(xì)胞的節(jié)律、頻率和幅度，能抑制釘螺上爬。文獻(xiàn)報(bào)道四聚乙醛對(duì)魚類等水生動(dòng)物的毒性小，適用于水產(chǎn)養(yǎng)殖地區(qū)和養(yǎng)殖水域殺滅螺[3，4]。但既往研究中關(guān)于四聚乙醛對(duì)中華絨螯蟹(大閘蟹)的急性毒性情況，包括致死濃度閾值等具體指標(biāo)少有提及。由于缺少相關(guān)資料支持，導(dǎo)致實(shí)際工作中使用四聚乙醛在水產(chǎn)養(yǎng)殖地區(qū)或水域開展滅螺時(shí)依舊受到掣肘，本研究針對(duì)四聚乙醛對(duì)中華絨螯蟹的急性毒性進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究。

材料與方法

一、試驗(yàn)材料

1.生物試材

在安徽省當(dāng)涂縣湖陽(yáng)鎮(zhèn)選取體重4.5～6.0 g的雌性大閘蟹幼蟹共200只備用。試驗(yàn)前適應(yīng)性馴養(yǎng)7～14 d，馴養(yǎng)期間每天喂食1～2次，每日光照12～16 h，及時(shí)清除糞便及食物殘?jiān)?。試?yàn)前24 h停止喂食。

2.試驗(yàn)藥劑

試驗(yàn)所用40%四聚乙醛懸浮劑為瑞士龍沙有限公司生產(chǎn)，產(chǎn)品農(nóng)藥登記號(hào)為PD20122132，產(chǎn)品生產(chǎn)批號(hào)為20171029。對(duì)照所用26%四聚·殺螺胺為江蘇艾津農(nóng)化有限公司，產(chǎn)品農(nóng)藥登記號(hào)為WP20110222，產(chǎn)品生產(chǎn)批號(hào)為2017021001?？瞻讓?duì)照為脫氯水。

二、試驗(yàn)方法及分組

參照《化學(xué)農(nóng)藥環(huán)境安全評(píng)價(jià)試驗(yàn)準(zhǔn)則第12部分：魚類急性毒性試驗(yàn)》(GB/T 31270.12-2014)，結(jié)合現(xiàn)場(chǎng)滅螺工作中四聚乙醛的具體使用特點(diǎn)以及大閘蟹的生活習(xí)性對(duì)本次試驗(yàn)方法進(jìn)行設(shè)計(jì)，具體如下：

1.試驗(yàn)環(huán)境

在實(shí)驗(yàn)室中保持實(shí)驗(yàn)室溫度為(26±2)℃，相對(duì)濕度為65%±5%。試驗(yàn)中每組使用一個(gè)容積為50 L的透明塑料水槽，并保持其中藥液和脫氯水的液體量為20 L。試驗(yàn)中使用增氧泵持續(xù)對(duì)藥液供氧，保持藥液溶解氧不低于空氣飽和值的60%。

2.試驗(yàn)方法

采用靜態(tài)法進(jìn)行試驗(yàn)，試驗(yàn)期間不更換試驗(yàn)藥液。

3.試驗(yàn)分組

預(yù)試驗(yàn)：按照有效成分濃度分別設(shè)置0.25 mg/L、2.0 mg/L、15 mg/L、100 mg/L四個(gè)四聚乙醛試驗(yàn)組，同時(shí)設(shè)置脫氯水作為空白對(duì)照組。每組放入5只受試大閘蟹，在試驗(yàn)開始后30 min觀察一次，之后每隔1 h觀察一次，觀察滿6 h后在第24 h、48 h、72 h和96 h再分別觀察一次。分別記錄每次觀察時(shí)各試驗(yàn)組和對(duì)照組的大閘蟹活動(dòng)情況及是否出現(xiàn)死亡，其中中毒后多次刺激無反應(yīng)的個(gè)體可判定為死亡，應(yīng)及時(shí)從水中撈出。通過預(yù)試驗(yàn)確定正式試驗(yàn)的濃度范圍。

正式試驗(yàn)：在預(yù)試驗(yàn)確定的濃度范圍內(nèi)按2倍間距設(shè)置5個(gè)濃度組，同時(shí)設(shè)一個(gè)滅螺藥對(duì)照組和一個(gè)空白對(duì)照組。其中滅螺藥對(duì)照組使用40倍現(xiàn)場(chǎng)滅螺劑量也就是有效成分濃度20 mg/L(實(shí)際制劑濃度80 mg/L)。每組放入15只受試大閘蟹，試驗(yàn)觀察時(shí)間和觀察方法與預(yù)試驗(yàn)相同。

4.統(tǒng)計(jì)方法：試驗(yàn)所得數(shù)據(jù)使用Excel 2007軟件錄入計(jì)算機(jī)，并計(jì)算各藥物濃度下的大閘蟹死亡率。利用概率單位線性加權(quán)回歸法，得出死亡率的概率單位(y)與用藥劑量(x)的回歸方程并計(jì)算出四聚乙醛對(duì)大閘蟹毒性的半數(shù)致死量(LD50)。

結(jié) 果

一、預(yù)試驗(yàn)

每個(gè)劑量組的水槽中加入相應(yīng)各濃度的四聚乙醛藥液各20 L，空白對(duì)照組加入20 L脫氯水，之后個(gè)放入5只大閘蟹。施藥后觀察96 h，各組大閘蟹死亡情況見表1。

表1 四聚乙醛對(duì)中華絨螯蟹急性毒性預(yù)試驗(yàn)結(jié)果

從預(yù)試驗(yàn)結(jié)果可以看出，受試大閘蟹在施藥后96 h未出現(xiàn)死亡，各組大閘蟹死亡率均為0。據(jù)此可認(rèn)為在四聚乙醛有效含量濃度為100 mg/L時(shí)，大閘蟹不會(huì)出現(xiàn)急性中毒現(xiàn)象。

二、正式試驗(yàn)

根據(jù)預(yù)試驗(yàn)結(jié)果，確定正式試驗(yàn)中5個(gè)試驗(yàn)濃度組的有效成分濃度分別為50 mg/L、100 mg/L、200 mg/L、400 mg/L和800 mg/L。正式試驗(yàn)同步設(shè)置一個(gè)空白對(duì)照組和一個(gè)四聚·殺螺胺對(duì)照組。各組水槽分別加入相應(yīng)濃度的藥液20 L，空白對(duì)照組加入20 L脫氯水。試驗(yàn)觀察96 h后，各組大閘蟹死亡情況見表2。

正式試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，當(dāng)試驗(yàn)時(shí)間達(dá)到48h，在100 mg/L和200 mg/L兩個(gè)劑量的試驗(yàn)組中各出現(xiàn)了1只大閘蟹死亡，但隨著藥物作用時(shí)間延長(zhǎng)至96 h，上述兩個(gè)劑量組大閘蟹死亡數(shù)未繼續(xù)增多，此外更高劑量組大閘蟹也未出現(xiàn)死亡。參照《化學(xué)農(nóng)藥環(huán)境安全評(píng)價(jià)試驗(yàn)準(zhǔn)則第12部分：魚類急性毒性試驗(yàn)》(GB/T 31270.12-2014)中有關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，受試動(dòng)物可以存著不超過10%的自然死亡率，結(jié)合本次試驗(yàn)中大閘蟹死亡率僅有6.7%且未出現(xiàn)隨時(shí)間或劑量增加死亡數(shù)增多的現(xiàn)象，可以認(rèn)為該兩例死亡大閘蟹與藥效毒性無關(guān)，屬于自然死亡。

表2 四聚乙醛對(duì)中華絨螯蟹急性毒性正式結(jié)果

本次試驗(yàn)中，25組實(shí)測(cè)數(shù)據(jù)中有19組的死亡率為0%，在統(tǒng)計(jì)分析中當(dāng)死亡率為0時(shí)相應(yīng)的概率單位(y)趨于-∞。因此，依據(jù)本次試驗(yàn)設(shè)定劑量不可計(jì)算LD50。由于本次試驗(yàn)中最高劑量已達(dá)到800 mg/L，是實(shí)際滅螺用量的1 000倍，繼續(xù)加大試驗(yàn)劑量以計(jì)算LD50對(duì)實(shí)際滅螺工作并無指導(dǎo)意義。因此可以得出結(jié)論，經(jīng)過96h急性毒性試驗(yàn)，四聚乙醛對(duì)大閘蟹無急性毒性。

討 論

一般觀點(diǎn)認(rèn)為，四聚乙醛殺螺作用較慢，殺螺效果尚不及氯硝柳胺。金偉[5]等通過試驗(yàn)證實(shí)，將殺螺作用時(shí)間延長(zhǎng)到5天其對(duì)釘螺的殺滅效果可與氯硝柳胺相當(dāng)。倪海宏[6]等在現(xiàn)場(chǎng)試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，采用制劑濃度為40%的四聚乙醛進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)滅螺時(shí)，作用時(shí)間達(dá)到3天即可獲得與氯硝柳胺同等的殺螺效果。因此，可以認(rèn)為40%四聚乙醛是一種可以在殺螺效果上替代氯硝柳胺的殺釘螺劑。

既往研究表明，四聚乙醛對(duì)魚類毒性較低。黃軼昕[3]等在試驗(yàn)中觀察到四聚乙醛對(duì)斑馬魚的最低致死劑量大于150 mg/L；陳春娜[7]等的研究結(jié)果則表明，四聚乙醛對(duì)鯽魚的最低致死劑量不低于100 mg/L；朱丹[8]等的研究則表明，40%四聚乙醛對(duì)絕大多數(shù)常見水產(chǎn)養(yǎng)殖生物的有效成分安全劑量大于10 mg/L。由于現(xiàn)場(chǎng)滅螺工作中對(duì)四聚乙醛的常用劑量為制劑濃度2～4 mg/L，按照常用的40%懸浮劑型換算，有效成分濃度僅為0.8～1.6 mg/L。因此可以認(rèn)為四聚乙醛是一種可以較好規(guī)避血防滅螺與水產(chǎn)養(yǎng)殖矛盾的殺螺藥。

安徽省當(dāng)涂縣湖陽(yáng)鎮(zhèn)是我省水產(chǎn)養(yǎng)殖與血防滅螺沖突較為嚴(yán)重的地區(qū)。當(dāng)?shù)卮箝l蟹養(yǎng)殖戶多，養(yǎng)殖范圍廣，養(yǎng)殖區(qū)域與有螺地帶重疊范圍廣。本次研究針對(duì)我省當(dāng)涂縣湖陽(yáng)鎮(zhèn)的具體情況選取當(dāng)?shù)卮箝l蟹幼苗作為試驗(yàn)對(duì)象，試驗(yàn)中當(dāng)四聚乙醛有效成分濃度達(dá)到800 mg/L作用時(shí)間達(dá)到96 h，大閘蟹未出現(xiàn)死亡現(xiàn)象。可以認(rèn)為四聚乙醛對(duì)我省當(dāng)涂縣湖陽(yáng)鎮(zhèn)當(dāng)?shù)卮箝l蟹無急性毒性。關(guān)于四聚乙醛在大閘蟹體內(nèi)殘留及其對(duì)大閘蟹生長(zhǎng)的長(zhǎng)期影響，本研究未能涉及，尚需做進(jìn)一步研究。