亚洲免费av电影一区二区三区,日韩爱爱视频,51精品视频一区二区三区,91视频爱爱,日韩欧美在线播放视频,中文字幕少妇AV,亚洲电影中文字幕,久久久久亚洲av成人网址,久久综合视频网站,国产在线不卡免费播放

        ?

        紫草素通過促進(jìn)硫氧還蛋白互作蛋白的表達(dá)抑制黑素瘤細(xì)胞對葡萄糖的攝取

        2019-09-27 02:26:58封琳左艷曲璇李軍
        生物技術(shù)通訊 2019年4期
        關(guān)鍵詞:黑素瘤素處理紫草

        封琳,左艷,曲璇,李軍

        陜西中醫(yī)藥大學(xué) 基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院,陜西 咸陽712046

        惡性黑素瘤嚴(yán)重危害人類健康,其高侵襲和轉(zhuǎn)移特性是導(dǎo)致患者生存期短、死亡率高的主要原因[1]。近年來,惡性黑素瘤在我國的發(fā)病率逐年上升,在各類腫瘤增長速度中居首。因此,尋求有效的藥物,對黑素瘤的治療和預(yù)后評估均具有重要意義[2]。

        紫草素來源于紫草,具有清熱涼血、活血解毒、透疹消斑等功效[3]。近年來,紫草素在抗氧化、抗炎、抗血栓、增強(qiáng)免疫、抗增殖和促凋亡等多方面的功效也逐漸被人們所認(rèn)識,尤其是其抗腫瘤功效。研究顯示,紫草素及其衍生物抑制腫瘤增殖并誘導(dǎo)腫瘤凋亡和壞死的功能已在多種腫瘤中得到證實(shí),如結(jié)腸癌[4]、白血病[5]和前列腺癌[6]等。在本研究中,我們探討了紫草素對黑素瘤細(xì)胞A375 和SK-MEL-28 生存的影響,并進(jìn)一步研究了其在調(diào)節(jié)腫瘤糖代謝中的作用,為深入理解紫草素抗腫瘤的功能打下了基礎(chǔ)。

        1 材料和方法

        1.1 材料

        A375 細(xì) 胞、SK-MEL-28 細(xì)胞和NIH-3T3 細(xì)胞購自中國科學(xué)院細(xì)胞庫;紫草素購自上海田同生物技術(shù)有限公司;高糖DMEM 和無糖DMEM 購自HyClone 公 司;2-NBDG 購 自Thermo Fisher Scientific 公 司;real-time PCR試劑購自TaKaRa 公 司;小鼠抗人硫氧還蛋白互作蛋白(thioredoxin interacting protein,TXNIP)單抗為Cell Signaling Technology 公司產(chǎn)品;小鼠抗人β-actin 單抗及Western印跡試劑盒為Sigma 公司產(chǎn)品。

        1.2 MTT細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)

        將A375、SK-MEL-28 細(xì)胞或NIH-3T3 細(xì)胞以104/孔的密度接種至96 孔板,待細(xì)胞過夜貼壁后加入用DMEM 稀釋的濃度分別為0、1、5 μmol/L的紫草素,在處理后的0、1、2、3 d 時(shí)間點(diǎn)收集細(xì)胞進(jìn)行MTT 實(shí)驗(yàn),每組設(shè)置5 個(gè)復(fù)孔,每孔加入的MTT 溶液濃度為5 mg/mL,孵育4 h,吸棄上清液后,每孔加入100 μL DMSO 試劑溶解結(jié)晶物,用酶聯(lián)免疫檢測儀測定各孔的D490nm值,繪制細(xì)胞生長曲線。

        1.3 2-NBDG攝取實(shí)驗(yàn)

        將A375 或SK-MEL-28 細(xì)胞以106/孔接種至6孔板,貼壁后分別用0、1、5 μmol/L 的紫草素處理細(xì)胞4 h,加入100 μmol/L 2-NBDG 試劑作用1 h,收集細(xì)胞,用流式細(xì)胞儀檢測熒光信號強(qiáng)度。

        1.4 real-time PCR實(shí)驗(yàn)

        將A375 或SK-MEL-28 細(xì)胞以106/孔接種至6孔板,貼壁后分別用0、0.5、1 μmol/L 的紫草素處理細(xì)胞24 h,收集細(xì)胞,用TRIzol 試劑提取mRNA,用TaKaRa公司的PrimeScript real-time PCR 反轉(zhuǎn)錄試劑盒進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄和real-time PCR。TXNIP 上游引物為5'-ATATGGGTGTGTAGACTA CTGGG-3',下游引物為5'-GACATCCACCAGATC CACTACT-3';β-actin 上游引物為5'-CATGTACG TTGCTATCCAGGC-3',下游引物為5'-CTCCTTAA TGTCACGCACGAT-3'。

        1.5 Western印跡

        用紫草素按上述方式處理A375 或SK-MEL-28 細(xì) 胞,24h后收集 細(xì) 胞,加入RIPA 蛋白 裂解液,超聲波裂解細(xì)胞,4℃離心取上清液,收集總蛋白。經(jīng)10% SDS-PAGE 分離后,電轉(zhuǎn)(200 mA,2 h)至NC 膜上,用含5%脫脂奶粉的TBST 封閉NC 膜;2 h 后用1∶1000 稀釋的TXNIP 抗體于4℃孵育過夜,次日加入二抗孵育1 h,通過ECL 發(fā)光檢測劑顯示結(jié)果。

        2 結(jié)果

        2.1 紫草素對黑素瘤細(xì)胞增殖能力的影響

        A375、SK-MEL-28 和NIH-3T3 細(xì)胞接種至96孔板,分別用不同濃度的紫草素處理細(xì)胞,在不同時(shí)間點(diǎn)收集細(xì)胞進(jìn)行MTT 實(shí)驗(yàn),結(jié)果見圖1。紫草素能夠以時(shí)間依賴和劑量依賴的方式抑制A375 和SK-MEL-28 細(xì)胞的增殖能力,而對正常細(xì)胞NIH-3T3 則不具有顯著的抑制效果。

        2.2 紫草素對黑素瘤細(xì)胞糖攝取能力的影響

        為了進(jìn)一步明確紫草素是否對黑素瘤細(xì)胞糖代謝重編程的過程具有調(diào)控作用,在A375 和SK-MEL-28 細(xì)胞中檢測了不同濃度的紫草素對葡萄糖類似物2-NBDG 的攝取能力,結(jié)果見圖2。經(jīng)紫草素處理的A375 和SK-MEL-28 細(xì)胞對2-NBDG 的攝取能力顯著低于對照組(P<0.01),說明紫草素可能通過阻斷黑素瘤細(xì)胞對葡萄糖攝取的過程抑制細(xì)胞的增殖。

        2.3 紫草素對TXNIP表達(dá)的影響

        TXNIP 是抑制細(xì)胞攝取葡萄糖的關(guān)鍵基因,我們因此利用real-time PCR 和Western 印跡檢測了TXNIP 在紫草素處理過的A375 和SK-MEL-28細(xì)胞中的mRNA 和蛋白表達(dá)水平。為了避免高濃度紫草素對細(xì)胞活力的影響(如圖1,5 μmol/L 紫草素作用24 h 會顯著抑制細(xì)胞生存),選擇相對低濃度(0.5 和1 μmol/L)的紫草素。結(jié)果顯示,在紫草素處理后的黑素瘤細(xì)胞中,TXNIP 的mRNA 和蛋白表達(dá)水平顯著提高(P<0.01)(圖3、4),提示紫草素可能通過促進(jìn)TXNIP 表達(dá)的方式抑制黑素瘤細(xì)胞對葡萄糖的攝取能力,并進(jìn)一步導(dǎo)致黑素瘤細(xì)胞發(fā)生代謝重編程。

        圖1 紫草素抑制黑素瘤細(xì)胞A375 和SK-MEL-28 的增殖能力

        圖2 紫草素抑制黑素瘤細(xì)胞對葡萄糖的攝取能力

        圖3 紫草素誘導(dǎo)TXNIP mRNA 表達(dá)

        圖4 紫草素誘導(dǎo)TXNIP 蛋白表達(dá)

        3 討論

        TXNIP 是α 抑制蛋 白 家族成員,受MondoA、mTORC1 等蛋白的轉(zhuǎn)錄激活調(diào)控。早期研究證明,TXNIP 可與硫氧還蛋白(Trx)結(jié)合形成二聚體,抑制Trx 的氧化還原特性,并進(jìn)一步影響Trx下游信號通路的活化和基因表達(dá)[7]。近年來,TXNIP 非Trx 依賴性結(jié)合途徑也逐漸被人們所認(rèn)識,通過調(diào)控能量代謝、炎癥反應(yīng)等過程,參與包括腫瘤在內(nèi)的諸多疾病的發(fā)生[8]。

        TXNIP 與腫瘤代謝的相關(guān)性主要體現(xiàn)在以下幾個(gè)方面:①TXNIP 是能量感受器,受葡萄糖、谷氨酰胺和AMPK 等重要代謝通路的調(diào)控。研究顯示,葡萄糖的代謝中間產(chǎn)物對TXNIP 具有轉(zhuǎn)錄激活作用[9],而谷氨酰胺可通過影響MondoA 的轉(zhuǎn)錄活性抑制TXNIP 的表達(dá)[10]。AMPK 通路在ATP 比例下降時(shí)活化,可通過降解TXNIP 蛋白,促進(jìn)細(xì)胞對葡萄糖的攝取[9]。②TXNIP 通過調(diào)控葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白GLUT1 的表達(dá)抑制細(xì)胞對葡萄糖的攝取。TXNIP 對葡萄糖的攝取具有負(fù)調(diào)控作用,主要是通過負(fù)調(diào)控GLUT1 來實(shí)現(xiàn)的:一方面,TXNIP可促進(jìn)GLUT1 蛋白內(nèi)化,促進(jìn)其在胞內(nèi)降解;另一方面,TXNIP 可 降低GLUT1 mRNA 表達(dá),抑制其轉(zhuǎn)錄[9,11]。③TXNIP 促進(jìn)脂類物質(zhì)合成代謝。在TXNIP 敲除的小鼠血液中,甘油三酯、脂肪酸等脂類物質(zhì)的含量顯著增加,血糖濃度下降[8,12]。由此可見,TXNIP 作為細(xì)胞內(nèi)重要的抑癌基因,可通過調(diào)控腫瘤代謝的方式抑制腫瘤的生存能力。

        在本研究中,我們在惡性黑素瘤模型中證明了紫草素對細(xì)胞增殖的抑制作用,并進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)紫草素通過劑量依賴的方式上調(diào)TXNIP 基因mRNA 的表達(dá),并導(dǎo)致TXNIP 蛋白表達(dá)增加,由此推測這可能是紫草素抑制黑素瘤細(xì)胞對葡萄糖攝取的重要原因。該研究對于拓展紫草素在腫瘤治療中的應(yīng)用價(jià)值,以及對其調(diào)控機(jī)制的解讀具有重要意義。

        猜你喜歡
        黑素瘤素處理紫草
        黃芩素對乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移的影響及其相關(guān)機(jī)制
        兒童黑素瘤診斷進(jìn)展
        槲皮素對N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)誘導(dǎo)損傷的視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的保護(hù)作用及其機(jī)制
        氮磷鉀素對朝陽大棗生長及產(chǎn)量的影響
        小兒紅屁股涂紫草油
        特別健康(2018年9期)2018-07-17 15:29:08
        陶四翁燒毀假紫草
        黑素瘤前哨淋巴結(jié)活檢與淋巴結(jié)觀察的最終對照研究報(bào)告
        息肉樣黑素瘤一例
        HPLC測定滇紫草及其兩個(gè)近緣種中乙酰紫草素的含量
        EcR-RNAi和印楝素處理斜紋夜蛾幼蟲誘導(dǎo)腹足發(fā)育受阻表型
        国产丝袜免费精品一区二区| 色噜噜av亚洲色一区二区| 丰满少妇在线观看网站| 人妻少妇无码中文幕久久| 男女后入式在线观看视频| 午夜免费观看日韩一级视频| 少妇av射精精品蜜桃专区| 日韩第四页| 台湾自拍偷区亚洲综合| 麻豆视频在线播放观看| 97久久草草超级碰碰碰| 国产伦精品一区二区三区视| 国产一区二区三区视频了| 干日本少妇一区二区三区| 2018国产精华国产精品| 欧美一级视频精品观看| 国产精品av免费网站| 精品一二三四区中文字幕| 成人免费毛片aaaaaa片| 国产高清精品自在线看| 日韩精品人妻一区二区三区蜜桃臀 | 国产va免费精品观看| 亚洲无线码1区| 中国男女黄色完整视频| 色视频综合无码一区二区三区| 熟妇人妻AV中文字幕老熟妇| 一片内射视频在线观看| 日韩精品在线视频一二三| 中文字幕天天躁日日躁狠狠躁免费| 日本午夜国产精彩| 精品人妻一区二区视频| 欧美精品一区二区精品久久| 精品无码专区久久久水蜜桃| 亚洲人成无码网站十八禁| 成人自拍一二在线观看| 激情内射日本一区二区三区| 国产一区二区三区小说| 日本免费一区二区精品| 久久96国产精品久久久| 人体内射精一区二区三区| 日本大胆人体亚裔一区二区|