彭洪 李天科（通訊作者）

（重慶市璧山區(qū)人民醫(yī)院 重慶 402760）

慢性乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）感染是我國面臨的一個嚴(yán)峻的衛(wèi)生問題。成人感染乙型肝炎病毒后約10%的患者會發(fā)展為慢性感染[1]。

機(jī)體對HBV病毒的清除依賴于健全的細(xì)胞免疫功能，而慢性HBV感染者中，特異性免疫低下及病毒逃避機(jī)體免疫是導(dǎo)致持續(xù)性感染的重要原因。HBV特異性CD8+T細(xì)胞、CD4+輔助性T細(xì)胞的功能及數(shù)量是影響機(jī)體特異性免疫功能的關(guān)鍵因素[2]。大量的研究證明，慢性HBV感染者體內(nèi)病毒特異性T淋巴細(xì)胞和調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞功能和數(shù)量均受損[3-5]。因此，本研究通過病例-對照方法來探討CD244（rs3766377）基因多態(tài)性與慢性乙型病毒性肝炎的相關(guān)性研究。

1.資料與方法

1.1 一般資料

收集從2016年09月至2018年09月就診于重慶市璧山區(qū)人民醫(yī)院的309名HBV慢性感染者（chronic HBV infection，CH），包括無癥狀攜帶者（asymptomatic carrier，ASC）28名，慢性乙型肝炎（chronic HBV hepatitis，CHB）90名、乙肝肝硬化（liver cirrhosis，LC）93名、乙肝肝癌（hepatocellular carcinoma，HCC）98名。所有納入的研究者之間均無血緣關(guān)系。本研究通過了重慶市璧山區(qū)人民醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會的批準(zhǔn)，且所有的受試者均簽署了書面知情同意書。

1.2 樣本采集及生化酶學(xué)指標(biāo)

從每位患者抽取3～5ml血液，于-80℃冰箱保存以備用。通過問卷調(diào)查記錄其性別、年齡、吸煙及飲酒、既往病史等基本情況。HBV病毒血清標(biāo)志物、肝功能等指標(biāo)檢測由重慶市璧山區(qū)人民醫(yī)院檢驗科完成。

1.3 基因組DNA的提取及基因分型

使用美國Promega公司W(wǎng)izard Ge-nomic DNA純化試劑盒進(jìn)行外周血基因組DNA的提取?；蚪MDNA于-80℃儲存?zhèn)溆谩２捎肧equenom實驗平臺對篩選的SNP進(jìn)行高通量基因分型。為進(jìn)行質(zhì)量控制，每個96孔板設(shè)置了成對的樣本及陰性對照。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析

數(shù)據(jù)分析由SPSS22.0軟件完成。使用HWE軟件來檢查正常組與清除組數(shù)據(jù)是否符合哈迪溫伯格平衡（Hardy-Weinberg，H-W）（P＜0.001）。計量資料使用Studentt檢驗或Mann-WhitneyU檢驗進(jìn)行比較；計數(shù)資料使用χ2檢驗進(jìn)行比較；使用二分類logistic回歸分析校正性別及年齡后比較基因型及基因模型（顯性模型（dominant genetic model）和隱性模型（recessive genetic models）在各組中的差異。Hardy-Weinberg（H-W）遺傳平衡由Stata20.0軟件完成。采用Haploview software（v4.2）軟件分析單體型頻率。所有檢驗P值均為雙側(cè)。P＜0.05認(rèn)為有統(tǒng)計學(xué)意義。

2.結(jié)果

2.1 基本資料

相比于女性患者，男性患者在發(fā)生肝硬化和肝癌的風(fēng)險更高（P＜0.05）。在各個組間無顯著差異，表1。

表1 研究對象的臨床特點

2.2 CD244（rs3766377）基因型與乙肝感染結(jié)局的關(guān)系

Rs3766377 AA型和等位基因A是各組中最常見基因型。攜帶rs9275572 GA基因型和等位基因G有更大風(fēng)險發(fā)展成為肝癌（P=2.2E-5，OR=3.3和P=1.5E-8，OR=3.3），這種風(fēng)險在顯性遺傳模型中仍存在（P=3.57E-7，OR=4.1），見表2。

表2 CD244（rs3766377）與HBV慢性感染進(jìn)展的關(guān)系

3.討論

CD244（別名：2B4），來自于淋巴細(xì)胞活化信號分子（signaling lymphocytic activation molecule，SLAM）家族。其可表達(dá)于CD8+T細(xì)胞、NK細(xì)胞、粒細(xì)胞及單核細(xì)胞等細(xì)胞上。既往研究表明，在慢性HBV感染的患者中，其CD8陽性T細(xì)胞上CD244高表達(dá)，從而影響T細(xì)胞對病毒的殺傷作用。本研究發(fā)生，rs3766377與肝癌有明確的相關(guān)性，可導(dǎo)致肝癌的發(fā)生率增加為正常的3.3倍。

本研究也存在一定的不足：（1）納入樣本數(shù)目較小，可能造成一定的偏倚；（2）沒有進(jìn)行SNP的功能試驗；（3）沒有納入乙肝病毒的相關(guān)因素。在今后的研究中，我們需要增大樣本、設(shè)計更嚴(yán)謹(jǐn)?shù)膶嶒瀬眚炞C本研究的結(jié)果。

總之，本研究表明CD244基因多態(tài)性rs3766377與慢性乙肝患者發(fā)展為肝硬化及肝癌有明確的關(guān)系，為臨床的診治提供更好的思路。