陳 皋，鄔碧波，吳孟征，羅萬蓉，秦春俊，劉舒舒，劉建英，劉 麗

肺結(jié)核是結(jié)核桿菌感染引發(fā)的一種呼吸系統(tǒng)疾病，發(fā)病患者癥狀以低熱、納差、消瘦、咳嗽、咯痰、咯血等為主[1-2]。肺結(jié)核病程長，部分患者可呈進行性發(fā)展，早期診斷及治療對改善疾病癥狀，提升患者生活質(zhì)量具有重要意義[3]。痰結(jié)核桿菌培養(yǎng)是診斷該病的“金標準”，但該檢測需要較長時間，并且對于痰檢未發(fā)現(xiàn)結(jié)核桿菌的痰菌陰性肺結(jié)核而言，其診斷效能嚴重不足。近些年的研究發(fā)現(xiàn)，以RNA、DNA為檢測標靶的分子生物檢測技術(shù)可快速、高效診斷肺結(jié)核[4]。為分析這2種檢測方法在痰菌陰性肺結(jié)核中的陽性率，本文選取我院接受檢查和治療的300例痰菌陰性肺結(jié)核患者進行了如下研究。

1 對象與方法

1.1 對象 選取2017年3月—2019年3月在我院接受檢查和治療的痰菌陰性肺結(jié)核患者為研究對象。納入標準[5]：①年齡≥18周歲；②診斷為痰菌陰性的肺結(jié)核患者；③無其他系統(tǒng)嚴重疾病者。排除標準[6]：①臨床資料不全者；②合并其他呼吸系統(tǒng)疾病者。根據(jù)納入排除標準共納入患者300例，男155例，女145例，年齡23～58歲，平均（39.35±4.24）歲。本項研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會評審?fù)ㄟ^，且患者均知情同意。

1.2 方法 抽取患者肺泡灌洗液后，對樣本進行結(jié)核桿菌RNA和DNA檢測。結(jié)核桿菌RNA檢測試劑盒由上海仁度生物科技有限公司提供，檢測參照說明書操作，注意樣本取出后30 min內(nèi)送檢，避免污染。結(jié)核桿菌DNA檢測試劑盒選用蘇州天隆生物科技公司檢測試劑盒，同時選用Roche LightCycle 480進行檢測。

1.3 評價指標 計算結(jié)核桿菌RNA和DNA陽性檢出率，公式為：檢測陽性例數(shù)/300×100%。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 數(shù)據(jù)錄入后，采用SPSS 11.5軟件進行分析。計數(shù)資料用頻數(shù)和百分率，并計算相應(yīng)的陽性檢出率。

2 結(jié) 果

結(jié)核桿菌RNA陽性檢出率為63.33%，DNA陽性檢出率為33.33%，前者高于后者，見表1。

3 討 論

RNA恒溫擴增實時檢測技術(shù)是一種直觀、快速的結(jié)核桿菌檢測技術(shù)，不但可有效檢出結(jié)核桿菌，還可對結(jié)核桿菌存活狀態(tài)進行鑒定[7]。結(jié)核桿菌死亡后其RNA將會降解，而DNA則不會降解，因此，如RNA恒溫擴增實時檢測顯示RNA陽性則意味著結(jié)核桿菌是活菌[8-9]。此外，RNA恒溫擴增實時檢測還可對結(jié)核病是否進展以及相關(guān)藥物療效進行評估[10]。結(jié)核桿菌DNA檢測是通過對DNA片段進行放大擴增，并借助熒光標記探針對結(jié)核桿菌DNA擴增序列進行定量檢測的一種檢測方法，可有效診斷結(jié)核病[11]。但結(jié)核桿菌DNA無法鑒別菌體存活狀態(tài)，也無法對結(jié)核病進展情況進行鑒別，并且結(jié)核桿菌DNA檢測時容易出現(xiàn)交叉污染[12-13]。本研究中，結(jié)核桿菌RNA檢測痰菌陰性肺結(jié)核的陽性檢出率為63.33%，DNA陽性檢出率為33.33%，前者高于后者，表明結(jié)核桿菌RNA檢測對痰菌陰性肺結(jié)核診斷的靈敏度高于結(jié)核桿菌DNA檢測。

表1 2種檢測方法對痰菌陰性肺結(jié)核陽性檢出率Table 1 Positive rate of 2 detection methods in sputum negative pulmonary tuberculosis

有研究發(fā)現(xiàn)，結(jié)核桿菌RNA檢測在肺結(jié)核中的檢測靈敏度以及陽性、陰性預(yù)測值均高于DNA檢測，并且ROC曲線下面積最大[14]。還有研究通過痰樣本結(jié)核桿菌RNA檢測發(fā)現(xiàn)，該種檢測方案所需時間短，靈敏度、陽性率均較高，與結(jié)核桿菌培養(yǎng)結(jié)果具有較高相似性[15]，這也佐證了本研究結(jié)論。

本研究通過對比檢測，發(fā)現(xiàn)結(jié)核桿菌RNA檢測對痰菌陰性肺結(jié)核具較高靈敏度，優(yōu)于DNA檢測。須要注意的是，RNA檢測結(jié)果還可能受患者癥狀，灌洗液取樣沖洗位置，樣本送檢時間以及樣本污染與否等因素影響，這需要檢測人員嚴格操作，或待患者癥狀改善后檢測，以提高RNA檢測效能。因為樣本量小，本研究尚存在一些不足之處，有待納入更多樣本進行驗證。