原 文 作 者：Francois Jaisel′，Olivier Merdy，Tom Meyns，Vale′rie Decens，Sjouke Van Poucke，Guillaume Perreul，Benoit Boivent，Han Smits，Alberto Aguilera，Laurent Fischer，Chtherine Charreyre

（1.Marial SAS, 里 昂， 法 國(guó)；2.Merial Belgium,Diegem, 比 利 時(shí)；3.Merial Velserboek, 荷 蘭；4.Merial SAS Ancenis,法國(guó)；5.Merial 北歐）

花象柏1（編譯），歐偉業(yè)2，肖煥星2，楊茂春2（校稿）

（1．江西農(nóng)業(yè)大學(xué)，江西 南昌 330000；2．浙江美保龍生物技術(shù)有限公司，浙江 金華 321000）

1 實(shí)驗(yàn)室研究

本研究對(duì)豬I 型PRRS 活疫苗（MLV）免疫接種和MLV 與滅活疫苗（KV）的組合免疫接種的免疫應(yīng)答進(jìn)行了比較。實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)如下（如表1），將32 頭小豬隨機(jī)分成4 組，每組8 頭。A 組、B 組、C 組各組豬于1.5 月齡時(shí)注射I 型PRRS 弱毒疫苗，D 組為不注射疫苗的對(duì)照組。在豬4.5 月齡時(shí)，A 組注射第2 次I 型PRRS 弱毒疫苗，B 組和C 組注射I型PRRS 滅活疫苗（PROGRESSIS,法國(guó)Marial 公司生產(chǎn)，2 mL，肌肉注射）。在豬5.5 月齡時(shí)，C 組再注射一次同型同劑量的滅活苗。在豬6.5 月齡時(shí)，用I 型PRRSV 2749 毒株鼻內(nèi)接種（與歐洲型LELYSTED同源性為99%）對(duì)32 只豬攻毒，劑量為2 mL 106TCID50病毒培養(yǎng)液。檢測(cè)各組免疫后ELISA 抗體，中和抗體（NA）和細(xì)胞免疫（CMI）水平，并在攻毒后測(cè)定病毒血癥。

1.1 ELISA 抗體檢測(cè)結(jié)果

檢測(cè)各組豬免疫后ELISA 抗體，結(jié)果顯示第二次用弱毒苗和用滅活苗免疫差異不大。

1.2 中和抗體檢測(cè)結(jié)果

檢測(cè)各組豬4.5 月齡、5.5 月齡、6.5 月齡和攻毒后14 d 的中和抗體陽(yáng)性率和平均滴度。結(jié)果顯示加強(qiáng)兩次滅活疫苗接種的C 組在攻毒后14 d 中和抗體水平明顯高于未注射滅活苗的A 組，而接受一次滅活苗注射的B 組，其中和抗體滴度介于C 組和A 組之間。如表2。

1.3 細(xì)胞因子INF-γ 水平變化

測(cè)定各組豬每個(gè)時(shí)間點(diǎn)的INF-γ 水平，如圖1 加強(qiáng)兩次滅活疫苗的C 組在攻毒后INF-γ 快速升高，在攻毒后7 d 達(dá)到峰值顯著高于其他組。

2 田間試驗(yàn)案例

2.1 案例一

荷蘭一個(gè)300 頭母豬場(chǎng)在母豬妊娠第90 天對(duì)母豬額外增加滅活疫苗接種，評(píng)估仔豬PRRS 抗體滴度的增加以及其在保育期對(duì)PRRSV 的保護(hù)率。母豬在分娩后第6 天跟胎注射一次I 型豬藍(lán)耳病弱毒疫苗，但保育豬長(zhǎng)時(shí)間存在PRRSV感染的問(wèn)題。之后免疫程序改變?yōu)椋罕Ａ舨溉槠谌醵疽呙绲拿庖撸冉o母豬連續(xù)2 次免疫弱毒疫苗，間隔為3 周，接著在母豬懷孕90 d 時(shí)，注射一次滅活疫苗（PROGRESSIS）。在所生小豬4、7 和10 周齡時(shí)，抽取3 窩小豬的血清，用IDEXX ElISA 試劑盒測(cè)定其抗豬藍(lán)耳病的抗體滴度，并用多重PCR檢測(cè)其口腔液中的呼吸道病原。母豬在免疫滅活疫苗前，血清學(xué)檢測(cè)證實(shí)5 ～10 周齡的小豬存在PRRSV的感染。應(yīng)用滅活苗后，小豬血清中抗豬藍(lán)耳病的母源抗體滴度更高，維持時(shí)間更長(zhǎng)，直到8 周齡其母源抗體尚未消失。口腔液PRRSV 的檢測(cè)除1 窩在10 周齡時(shí)檢測(cè)為陽(yáng)性外，其余均為陰性。如此免疫方法連續(xù)檢測(cè)了3 批分娩的小豬血清，其豬藍(lán)耳病抗體的檢測(cè)結(jié)果都一樣。結(jié)果表明母豬于分娩前接種一次滅活苗確實(shí)能延長(zhǎng)小豬血清豬藍(lán)耳病母源抗體維持的時(shí)間，從而對(duì)抗小豬的早期PRRSV 的感染。

表1 實(shí)驗(yàn)分組

表2 各組豬免疫后不同時(shí)間中和抗體陽(yáng)性比例及抗體值

圖1 免疫后各組各時(shí)間段INF-γ 水平

2.2 案例二

一個(gè)1 200 頭母豬的豬場(chǎng)，具有5 條生產(chǎn)線。母豬用I 型豬藍(lán)耳病弱毒疫苗，每年3 次。2012 年1 月，出現(xiàn)嚴(yán)重的豬藍(lán)耳病癥狀，母豬表現(xiàn)為早產(chǎn)、產(chǎn)死胎和弱仔。產(chǎn)房小豬死亡率達(dá)4.5%，抗菌藥物用量增加。豬血清ELISA(IDEXX)檢測(cè)，證實(shí)PRRSV 感染。在3 ～7 周齡的小豬也檢出PRRSV 感染。之后對(duì)母豬PRRS 疫苗作了調(diào)整，改為懷孕60 d注射I 型PRRS 弱毒苗，懷孕90 d 注射一次滅活苗（PROGRESSIS)。到2012 年11 月，母豬和小豬仍能檢出PRRSV，到2013 年10 月，母豬PRRS 抗體差異穩(wěn)定，小豬S/P 比例在斷奶時(shí)仍然較低。到2013 年末，斷奶小豬死亡率降至2%左右，母豬和小豬PRRSV 的循環(huán)明顯穩(wěn)定。結(jié)果再次表明，母豬于懷孕90 d 時(shí)注射一次滅活苗確實(shí)能增加小豬母源PRRS 抗體的水平，控制PRRSV 的循環(huán)，穩(wěn)定整個(gè)豬群。

2.3 案例三

在法國(guó)布列塔尼地區(qū)有一個(gè)400頭母豬的PRRS 陽(yáng)性豬場(chǎng)，該場(chǎng)有5棟分娩舍，每棟可容納80 頭母豬。母豬通常在哺乳時(shí)注射I 型PRRS 弱毒疫苗。哺乳期未見有豬藍(lán)耳病癥狀。小豬在斷奶時(shí)注射支原體疫苗，不接種PRRS 疫苗。保育和育肥期豬呼吸道疾病多發(fā)，需要使用抗菌藥物。2013 年12 月，通過(guò)PCR 檢測(cè)PRRSV 抗原和ELISA(IDEXX)檢測(cè)抗體證實(shí)了保育豬PRRSV 的感染。2014 年1 月，其中一條生產(chǎn)線的懷孕母豬在懷孕90 d 時(shí)接種了一次PRRS 滅 活 苗（PROGRESSIS)。對(duì)這些母豬產(chǎn)下的10 頭小豬口腔液采用PCR 檢測(cè)其PRRSV 的感染情況，并于8、12 和16 周齡時(shí)采血檢查其PRRSV 抗體情況（用ELISA方法）。這些應(yīng)用了滅活苗母豬的后代直至出欄都未見任何呼吸道癥狀。ELISA 檢測(cè)除1 頭仔豬PRRS 抗體在8 周齡血檢中S/P 為0.66 外，其余仔豬在8 和12 周全為陰性。血清和口腔液樣品，到仔豬16 周齡的樣品才呈現(xiàn)ELISA 陽(yáng)性結(jié)果，表明仔豬斷奶后16 周才感染PRRSV 轉(zhuǎn)陽(yáng)。在2014 年2 月，母豬又按原來(lái)的免疫計(jì)劃，即只在產(chǎn)后6 d 注射弱毒疫苗，哺乳小豬再次出現(xiàn)呼吸道癥狀，表明了早期的PRRSV 感染。2014 年6 月，懷孕母豬于妊娠90 d 齡時(shí)再次接種一次滅活苗，豬群的呼吸道癥狀再次減少。2014 年10 月，口腔液樣顯示PRRS 母源抗體持續(xù)至10周齡。直到12 周齡,PRRSV 感染仍呈陰性。這一例子表明，母豬產(chǎn)前3周左右注射滅活疫苗是控制豬群早期感染PRRSV 的有效措施。

2.4 案例四

丹麥一個(gè)1 000 頭母豬的豬場(chǎng)，在4 ～10 周齡的豬群中存在呼吸道癥狀，采用PCR 檢測(cè)4 周齡前豬支氣管-肺泡的灌洗液（BAL)證實(shí)為PRRSV 感染。小豬未接種PRRS 疫苗，母豬免疫用I 型PRRS 弱毒苗，程序?yàn)閼言?0 d 和產(chǎn)后6 d。后改為懷孕60 d 用弱毒苗和90 d 用滅活苗（PROGRESSIS)。如此實(shí)行一年后，對(duì)4 ～10 周齡的小豬收集BAL 液用PCR 檢測(cè)PRRSV；6 頭母豬于產(chǎn)前4、3 和1 周采血進(jìn)行ELISA 檢測(cè)。該6頭母豬每頭所產(chǎn)生的小豬隨機(jī)取3 頭于4、7 和10 周齡時(shí)采血進(jìn)行PCR 和ELISA 檢測(cè)。PCR 檢測(cè)表明，PRRSV在BAL 液和血清中的檢出已由以前的4 周向后推至10 周（即懷孕90 d 用了滅活苗后）。斷奶小豬的臨床癥狀明顯改善。母豬在應(yīng)用滅活苗前，血清中抗PRRSV 抗體滴度在產(chǎn)前3 ～4 周是減少的，而在應(yīng)用滅活苗以后，母豬的上述抗體滴度明顯增加。豬場(chǎng)生產(chǎn)成績(jī)也明顯提高：每頭母豬每年斷奶仔豬從28.2 頭提高至31 頭，產(chǎn)活仔數(shù)從32.2 頭提高至34.7 頭，斷奶后日增重從每天302 g 增加至320 g，斷奶后仔豬死亡率從4.7%下降至0.8%。該案例說(shuō)明：母豬在懷孕后期接種一次PRRS 滅活苗，斷奶后小豬能推遲PRRSV 的感染，提高豬群的生產(chǎn)性能，減輕PRRSV 感染的癥狀。

2.5 田間調(diào)查

據(jù)Boivent 等（2016）的調(diào)查，在法國(guó)養(yǎng)豬最密集地區(qū)的一些養(yǎng)豬場(chǎng)，商品豬群經(jīng)常出現(xiàn)PRRS 疫情。各豬場(chǎng)的PRRS 免疫程序不同，有的先用I 型PRRS 弱毒苗作一次基礎(chǔ)免疫，在分娩后6 d 再加強(qiáng)免疫一次；有的在懷孕60 d 用弱毒苗免疫一次；有的用弱毒苗每4 個(gè)月一次。后來(lái)，這些豬場(chǎng)都在母豬懷孕90 d 時(shí)增加一次滅活疫苗的免疫。為比較滅活苗應(yīng)用前后母豬所產(chǎn)小豬PRRSV 的感染情況（用RT-PCR 法）和小豬體內(nèi)抗PRRSV 抗體的情況（用Idexx 試劑盒），在8 個(gè)豬場(chǎng)，每個(gè)豬場(chǎng)采取14頭小豬不同階段的口腔液，共81 份樣品。檢測(cè)結(jié)果表明，母豬在應(yīng)用滅活苗前，其所產(chǎn)小豬在5 ～7 周齡即能測(cè)出20%以上樣品PRRSV 陽(yáng)性，以后PRRSV 陽(yáng)性率進(jìn)一步快速升高。在母豬應(yīng)用滅活苗后，其所產(chǎn)小豬至14 周齡才有11/23 的小豬檢出PRRSV呈陽(yáng)性。小豬斷奶后，具有較高的抗PRRSV 抗體，直到10 ～16 周齡，其抗體水平才緩慢下降。

結(jié)論：用PRRS 弱毒疫苗免疫的母豬，在懷孕后期注射一次PRRS 滅活疫苗，其所產(chǎn)小豬能推遲對(duì)PRRSV 的感染。

3 PRRSV 先天性免疫應(yīng)答

美國(guó)FA Zuckermann, MUZ 博士 研究證明PRRSV 弱毒疫苗對(duì)異源PRRSV 攻毒只有部分保護(hù)。豬感染PRRS 野毒或接種PRRS 弱毒疫苗誘導(dǎo)產(chǎn)生大量無(wú)中和能力的抗體,在感染4周后產(chǎn)生T 細(xì)胞介導(dǎo)的PRRSV 特異性淋巴細(xì)胞增生性應(yīng)答，持續(xù)9 ～14 周。在這期間，產(chǎn)生有限數(shù)量的分泌IFN-γ細(xì)胞，有保護(hù)作用。重復(fù)接種弱毒疫苗的豬加強(qiáng)接種并不會(huì)引起對(duì)PRRSV的T 細(xì)胞應(yīng)答增加，而且與未接種過(guò)同樣疫苗的豬相比反而受到抑制。

PRRSV 先天性免疫應(yīng)答，引起特異性的細(xì)胞介導(dǎo)免疫延遲,是因?yàn)槿狈?duì)病毒感染足夠的IFN-γ 應(yīng)答。急性感染PRRSV 的豬肺中產(chǎn)生的IFN-γ 幾乎檢測(cè)不到，PRRSV 誘導(dǎo)產(chǎn)生的IFN-γ 是呼吸道冠狀病毒誘導(dǎo)產(chǎn)生的0.6%。

提高對(duì)PRRS 保護(hù)性免疫刺激的方法：PRRSV 活疫苗與滅活疫苗聯(lián)合使用可增加宿主對(duì)PRRSV 的IFN-γ應(yīng)答，但體液免疫應(yīng)答沒有明顯變化。只有用豬肺巨噬細(xì)胞生產(chǎn)的PRRSV弱毒疫苗才能提高IFN-γ 的應(yīng)答，用Marc-145 細(xì)胞生產(chǎn)的不能被提高。所以用PRRSV 活疫苗與滅活疫苗聯(lián)合使用可增加宿主對(duì)PRRSV 的IFN-γ應(yīng)答，提高細(xì)胞免疫水平。