劉蓮芳，許 純，潘迎英

（南京中醫(yī)藥大學附屬張家港市中醫(yī)醫(yī)院，江蘇 張家港 215600）

胃癌目前已成為全球最常見的惡性腫瘤之一，在初治的胃癌患者中，中國胃腸腫瘤外科聯(lián)盟數(shù)據(jù)報告2014—2016年早期胃癌占19%，進展期胃癌占71%，晚期胃癌占10%［1］。我國一項單中心統(tǒng)計結(jié)果顯示：ⅢC期患者5年生存率為25.7%，Ⅳ期胃癌患者5年生存率僅為12.4%［2］。手術(shù)目前仍是胃癌的唯一根治方式，其他西醫(yī)手段包括放化療、靶向治療、免疫治療。而中醫(yī)藥治療作為我國的特色治療，目前在進展期及晚期胃癌治療方面也顯示了一定的優(yōu)勢。在實驗研究方面，近年來中醫(yī)藥在胃癌的細胞學水平和分子生物學水平作用已經(jīng)得到廣泛的證實，其主要體現(xiàn)在：誘導細胞凋亡、阻滯信號傳導、抑制血管生成、誘導分化、端粒及端粒酶的穩(wěn)定性、細胞毒作用、放化療保護、癌基因和抑癌基因表達等［3］。

參菝抗瘤液為我院曹林華院長的經(jīng)驗方，曹林華為張家港市名中醫(yī)，長期從事中醫(yī)治療腫瘤的工作，抗腫瘤治療經(jīng)驗豐富，特別是在胃癌方面，他提出的健脾活血法治療胃癌在臨床已經(jīng)取得良好的療效，并設立基本方，制成院內(nèi)制劑參菝抗瘤液，臨床廣泛應用于治療胃癌、腸癌。參菝抗瘤液在體內(nèi)的抗腫瘤效應尚未進行過研究，故本課題建立人胃癌SGC-7901裸鼠異種移植腫瘤模型，觀察參菝抗瘤液對腫瘤的抑制作用及其機理。

1 材料與方法

1.1 動物 雄性BALB／c裸小鼠，平均體質(zhì)量18～22 g，日齡：5周，上海靈暢生物科技有限公司提供，生產(chǎn)許可證：SCXK（滬）2013-0018，合格證編號：2013001831677，實驗動物使用許可證：SYXK（蘇）2017-0015，適用于屏障環(huán)境（SPF級，小鼠），每組8只，共40只。

1.2 藥物 參菝抗瘤液組成：太子參15 g，白術(shù)10 g，茯苓 10 g，陳皮 6 g，生半夏 15 g，生牡蠣 30 g，地龍 3 g，菝契 15 g，藤梨根 15 g，綠梅花 10 g，三棱10 g，莪術(shù) 10 g，野葡萄藤 15 g，山慈菇 10 g。 由我院中藥房煎煮成200 mL中藥飲液，并配制成10、50、100、200 mg／mL 的母液，-20℃保存?zhèn)溆谩?氟尿嘧啶注射液由上海旭東海普藥業(yè)有限公司提供（批號：1711041）；0.9%氯化鈉配制備用，按 1 mg／kg使用。

1.3 試劑與儀器 YJ-875醫(yī)用凈化工作臺（蘇州凈化設備廠）；HANGPING FA2104S電子秤（上海手術(shù)器械廠）；Cmias-98A圖像處理分析儀及分析軟件（北京航天航空大學）。

1.4 分組與模型制備 取小鼠40只，接種16 d后，此時腫瘤生長至100～150 mm3，將動物隨機分為模型對照組、氟尿嘧啶組、參菝抗瘤液低劑量組（低劑量組）、參菝抗瘤液中劑量組（中劑量組）、參菝抗瘤液高劑量組（高劑量組），每組8只。

根據(jù)既往的文獻方法復制小鼠移植瘤模型：①復蘇人胃癌細胞SGC-7901瘤株，接種于3只小鼠腋窩皮下保種，10 d轉(zhuǎn)種1次，共2次；② 選取生長良好的胃癌組織，剪碎勻漿，制成細胞懸液，經(jīng)0.2%臺盼藍染色后計數(shù)活細胞數(shù)＞95%，調(diào)整細胞濃度為1×107／mL；③ 每只小鼠右腋皮下接種0.2 mL細胞懸液。

1.5 給藥方法 模型對照組每天灌服0.2 mL／10 g體質(zhì)量的生理鹽水；氟尿嘧啶組按照氟尿嘧啶1 mg／（kg·d）（容量為 0.2 mL／10g 體質(zhì)量）腹腔注射；低、中、高劑量組分別按照參菝抗瘤液 6.25、12.5、25 mg／（kg·d）灌胃（容量同對照組），連用 15 d。

小鼠給藥劑量具體換算按照人與動物用藥量換算方式：人體表面積按照許文生氏公式［4］，即體表面積／m2＝0.006 1×身高 ／cm+0.012 8×體質(zhì)量 ／kg-0.152 9

式中W為體重；K為常數(shù)，隨動物種類而不同，小鼠為9.1，本試驗中藥劑量共174 g，按人 50 kg、小鼠22 g進行計量換算，174 g小鼠等效劑量為12.6 mg／kg，取12.5 mg／kg·d，并設低、高劑量組分別為 6.25、25 mg／kg·d。

1.6 觀察指標 停藥24 h后處死所有小鼠，稱體重。將各組小鼠的皮下腫瘤完整剝?nèi)?，并稱瘤重，計算相對腫瘤增殖率（T／C）及抑瘤率（IR）。游標卡尺測量腫瘤的長徑、短徑，計算腫瘤體積［4］：

其中a、b分別表示長徑、短徑

V0：分籠給藥時測量所得腫瘤體積；Vt：每次測量時的腫瘤體積

TRTV：治療組RTV；CRTV：模型對照組RTV

1.7 統(tǒng)計學方法 采用SPSS 19.0進行數(shù)據(jù)分析。計量資料屬正態(tài)分布的以（）表示，采用t檢驗；計數(shù)資料采用Kruskal-Wallis H檢驗。

2 結(jié) 果

本研究通過建立人胃癌細胞SGC-7901裸鼠異種移植腫瘤模型，評價了參菝抗瘤液的抗腫瘤活性。實驗結(jié)果表示：參菝抗瘤液 6.25、12.5、25 mg／kg 對人胃癌細胞SGC-7901裸鼠異種移植腫瘤的T／C分別為 63.36%、52.67%、35.21%，IR分別為 37.5%、50.2%、65.5%；而相同條件下，氟尿嘧啶組T／C為37.73%，IR 為 63.8%，見表 1、圖 1～圖 5。

表1 各組對人胃癌細胞SGC-7901裸鼠異種移植瘤生長的抑制比較

圖1 各組對人胃癌細胞SGC-7901裸鼠異種移植瘤動物體質(zhì)量的影響

3 討 論

圖2 各組對人胃癌細胞SGC-7901裸鼠異種移植瘤瘤體積的影響

圖3 參菝抗瘤液對人胃癌細胞SGC-7901裸鼠異種移植瘤瘤重的影響

圖4 裸鼠處死后暴露腫瘤照片

圖5 腫瘤照片

胃癌的主要治療手段為系統(tǒng)性治療，早期胃癌以手術(shù)為主，而對于失去手術(shù)根治或復發(fā)轉(zhuǎn)移的晚期胃癌患者，目前公認應采取以全身藥物治療為主的綜合治療手段，諸如姑息手術(shù)、放射治療、射頻消融、腹腔灌注及動脈介入栓塞灌注等局部治療手段。目前胃癌治療藥物主要包括化學藥物和分子靶向藥物，一線化療以毒性相對低、療效相當?shù)膬伤幝?lián)合化療，以順鉑或奧沙利鉑為代表聯(lián)合5-FU或口服氟尿嘧啶類，該方案可使晚期胃癌患者中位無進展生存期（PFS）延長 5～6個月，總生存期（OS）接近10～13個月。二線治療多用多西他賽或紫杉醇或伊立替康單藥。三線治療僅涉及小樣本研究，化療獲益不明確，臨床實踐中，特別強調(diào)根據(jù)患者體力狀態(tài)、基礎疾病等綜合考慮。對于HER-2陽性的胃癌患者，化療基礎上聯(lián)合赫賽汀可顯著提高OS至14個月，減少26%的死亡風險。此外，靶向于血管內(nèi)皮生長因子受體（VEGFR）的單克隆抗體及小分子TKI也在胃癌的二線或三線治療顯示出PFS及OS的獲益［5-10］，免疫檢查點抑制劑在晚期胃癌的三線治療中已有前瞻性研究結(jié)果支持，但目前獲益人群尚存在爭議［11］，但盡管如此，晚期胃癌患者預后仍然很差［12］。中醫(yī)藥療法作為我國傳統(tǒng)特色療法，其在臨床已取得良好的療效，目前研究主要是臨床實驗和應用、臨床研究等。隨著國家對中醫(yī)藥發(fā)展的高度重視，如何從中藥中提取有效抗腫瘤成分，也將成為新藥研制的熱點。

參菝抗瘤液方中太子參、白術(shù)、茯苓健脾益氣，陳皮、半夏健胃消食，生半夏、三棱、莪術(shù)、山慈茹消腫散結(jié)，野葡萄藤、菝葜活血祛瘀，天龍、牡蠣散結(jié)，全方共奏健脾理氣、活血散結(jié)的功效。為了能更進一步研究其中的抗腫瘤成分，尋找高效、低毒的抗腫瘤中藥，設計了本實驗研究。

3.1 動物模型選擇 首先，建立恰當?shù)膭游锬Ｐ驮诳鼓[瘤藥物的體內(nèi)實驗研究中是不可或缺的［13-14］，既往文獻表明，理想的腫瘤模型應具備以下條件：① 指標客觀；② 快速且經(jīng)濟；③ 有良好的預測性；④ 重復性好［15］。移植腫瘤模型包括同種移植性和異種移植性腫瘤模型，異種移植性腫瘤模型移植成活率高，并且可提供大量生長均勻的腫瘤模型，目前研究中運用的最多［16-17］。本研究選用動物為BALB／c裸鼠，該鼠為胸腺缺失、T細胞免疫缺陷、B細胞功能缺陷的小鼠，可明確用于腫瘤學發(fā)生機理的研究。

3.2 實驗方法 本研究采用的體內(nèi)實驗比較接近臨床狀態(tài)，其所得的結(jié)果可較好反映臨床療效，較為可信［18-19］。本實驗從抑瘤率來看，顯示了參菝抗瘤液對人胃癌細胞SGC-7901裸鼠異種移植腫瘤的生長有明確的抑制作用，但與氟尿嘧啶組比較無顯著差異，需排除實驗過程中操作流程、操作人員的因素，實驗的設計是否符合該裸鼠的活動規(guī)律等［20-22］。

3.3 參菝抗瘤液對裸鼠胃癌移植瘤的抑制作用效果評價 胃癌屬中醫(yī) “癌病”“巖病”“癥瘕積聚”等范疇，中醫(yī)病因病機不外乎外感、內(nèi)傷、起居等原因［23］。本研究基于“健脾益血、消腫散結(jié)”法治療胃癌，目的為臨床運用其進行治療提供客觀依據(jù)和理論支持。本實驗結(jié)果顯示：參菝抗瘤液低、中、高劑量組對人胃癌細胞SGC-7901裸鼠異種移植腫瘤的生長有抑制作用，并且隨著劑量的增加抑制作用增加，瘤重與模型對照組有顯著性差異，說明高劑量參菝抗瘤液具有抑瘤作用，證實了參菝抗瘤液的抗胃癌作用。當然，結(jié)果受各種因素影響，本實驗未經(jīng)過重復性驗證，期望日后可進行重復性的實驗研究，并進一步設計實驗來研究該方中的抗腫瘤具體單體成分，并預先進行毒理實驗，以得出更為精準的數(shù)據(jù)。