張 雁 袁 泉 劉莉莉 方明明 徐德聰

（合肥師范學(xué)院 生命科學(xué)學(xué)院，安徽 合肥 230601）

藍莓是杜鵑花科越橘屬植物，果實富含營養(yǎng)，是我國新興的種植項目[1]，在我省宣城、懷寧和合肥等地大量種植。藍莓在栽培中由真菌引起的病害達20多種[2-3]，最常見的藍莓根腐病是藍莓產(chǎn)量下降的主要原因[4]。尖孢鐮刀菌可以導(dǎo)致多種植物病害[5]，侵染藍莓根系時會導(dǎo)致藍莓根腐病[6]。尖孢鐮刀菌從植物根部入侵后，可損害植物的維管束，導(dǎo)致植物根冠腐爛[7-9]及減產(chǎn)或絕產(chǎn)[10]。藍莓根腐病的傳統(tǒng)治療方法為大量使用農(nóng)藥，不但成本高昂，還會造成嚴重的環(huán)境污染，并導(dǎo)致藍莓的經(jīng)濟價值下降。而生物防治溫和、安全、持久，可有效的避免化學(xué)防治的弊端。

菌根真菌可以提高植物的防御能力[11-12]，減少相關(guān)疾病的發(fā)生[13]。藍莓的根系可以和內(nèi)生的真菌共生，形成菌根結(jié)構(gòu)[14]，這些菌根真菌的菌絲在土壤中可以形成網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，可有效的擴大植株根系利用的土壤范圍，進而促進藍莓生長[15]。藍莓根部的細胞和組織能夠被菌根真菌的菌絲體侵染[16]，最終可以增強藍莓的適應(yīng)性和抗病性，提升藍莓的產(chǎn)量[17]。因此，本研究從宣城、懷寧和合肥等地的藍莓根系中分離并鑒定出多種菌根真菌，并從中篩選出多株可以有效拮抗尖孢鐮刀菌的藍莓菌根真菌，對藍莓根腐病的生物防治中具有重要的應(yīng)用價值和應(yīng)用潛力。其中篩選出的拮抗尖孢鐮刀菌的棘孢木霉Hfsu02的拮抗能力最強，且可以有效侵染藍莓根系，具有防治藍莓根腐病等由尖孢鐮刀菌引起的植物病害的應(yīng)用價值。

1 材料和方法

1.1 培養(yǎng)基與試劑

DNA凝膠回收試劑盒（上海生工），真菌基因組提取試劑盒（上海生工），Taq DNA聚合酶（上海生工），其他化學(xué)試劑均為國產(chǎn)分析純。

PDA培養(yǎng)基：馬鈴薯200 g，加適量（約500 mL）的去離子水煮熟，搗碎攪拌，用兩層紗布進行過濾，取濾液加入葡萄糖20 g，充分混勻并定容至1000 mL。

基礎(chǔ)培養(yǎng)基（馬丁氏改良）：NH4NO35 g，MgSO4·7H2O 0.5 g，KH2PO41.0 g，葡萄糖 10 g，微量元素混合液0.1 mL，定容至1000 mL。

培養(yǎng)基滅菌條件為121℃，20 min或115℃，20 min（含糖培養(yǎng)基）。

1.2 藍莓根系樣品采集

2018年4月從安徽宣城、合肥和懷寧地區(qū)藍莓種植園中采集生長年限均為5～6年的藍莓（奧尼爾品種）的藍莓根樣各5個樣品。用滅菌采樣袋分裝好，24 h內(nèi)分離菌根真菌。

1.3 菌根侵染率研究

菌根侵染使用優(yōu)化后的臺盼藍染色法[18]進行測定：無菌條件下，將根段切成1 cm長的根段，無菌水沖洗干凈，放入FAA固定液（38%甲醛5 mL＋乙酸5 mL＋50%酒精90 mL＋甘油5 mL）固定15 min，取出后放在10%KOH/NaOH溶液95℃水浴1 h后用無菌蒸餾水沖洗至無色后染色（染液配方：臺盼藍 0.05 g＋苯酚 20 g＋乳酸 20 mL＋甘油 40 mL＋蒸餾水20 mL）12 h后用丙三醇（乳酸）中脫色30 min，通過光學(xué)顯微鏡觀察，計算侵染率，公式如下：

1.4 藍莓根系共生菌根真菌分離純化

將根段剪成1 cm長，用無菌水沖洗干凈后采用表1的消毒方法對菌根表面的微生物進行消毒處理。因為不同的菌根真菌對不同的消毒劑的耐受性不同，本研究同時使用兩種消毒方法。通過預(yù)實驗優(yōu)化，這兩種方法均能有效抑制根系表面雜菌。方法一和方法二各采用不同的消毒劑進行兩步消毒。每次消毒之后使用無菌水清洗。

表1 藍莓菌根消毒方法

將不同消毒方法消毒過后的根段，放在PDA平板中30℃培養(yǎng)（一個平板上放置8～10段根段），篩選出不同的菌根真菌。挑取根段內(nèi)部長出的菌絲體到PDA液體培養(yǎng)基中,在30℃恒溫搖床中200 r/min振蕩培養(yǎng)，菌液稀釋至10-5并用移液槍吸取0.2 mL涂布于PDA平板中，30℃培養(yǎng)至孢子生成，使用孢子濾器分離孢子，稀釋后涂布于PDA平板中，重復(fù)以上操作，直至獲得純化的單克隆。

1.5 菌根真菌的分子鑒定

使用真菌基因組提取試劑盒 （上海生工）進行總DNA提取，使用通用引物ITS1和ITS4進行PCR擴增ITS的部分序列。引物序列為ITS1，5′TCCGTAGGTGAACCTGCGG3′；ITS4，5′TCCTCCGCTTATTGATATGC3′。PCR 擴增條件：94℃預(yù)變性 5 min，循環(huán)條件是 94℃變性 30 s，55℃復(fù)性30 s，72℃延伸1.5 min，共35個循環(huán)，最終72℃延伸10 min。擴增后的ITS序列使用1%的瓊脂糖凝膠電泳檢測，送生工生物工程（上海）有限公司測序。在NCBI中進行Blast比對，并使用軟件MEGA7.0構(gòu)建系統(tǒng)進化樹，確定分離菌株的種屬和分類地位。

1.6 拮抗尖孢鐮刀菌的菌根真菌的篩選

利用濾紙片擴散法測抑菌效果：取尖孢鐮刀菌懸液0.1 mL均勻涂布在PDA培養(yǎng)基中，貼敷上浸過不同菌根真菌（除尖孢鐮刀菌外）液體培養(yǎng)懸液10 min的直徑為6 mm的濾紙片，用無菌水試片作為空白對照。30℃恒溫培養(yǎng)72 h，用十字交叉法測抑菌圈直徑。通過初篩篩選出的菌株，采用濾紙片擴散法進一步復(fù)篩，重復(fù)3次，統(tǒng)計分析結(jié)果。

1.7 拮抗尖孢鐮刀菌的菌根真菌Hfsu02的形態(tài)特征鑒定

吸取100 μL菌根真菌Hfsu02菌液接種于PDA固體培養(yǎng)基上，涂抹均勻。逐日觀察菌根真菌Hfsu02的菌落形態(tài)特征。取孢子懸液0.1 mL接種在PDA液體培養(yǎng)基中，30℃條件下200 r/min振蕩培養(yǎng)48 h，觀察形成的菌球的形態(tài)特征。

1.8 Hfsu02在基礎(chǔ)培養(yǎng)基上的培養(yǎng)特性研究

基礎(chǔ)培養(yǎng)基相比較于PDA培養(yǎng)基，成份更加穩(wěn)定，更適合研究Hfsu02的培養(yǎng)特性。在30 mL液體基礎(chǔ)培養(yǎng)基中加入200 μL菌根真菌Hfsu02的孢子懸液，200 r/min的振蕩培養(yǎng)48 h，通過稱干重法對菌根真菌Hfsu02的最適溫度、pH進行測定，然后在最適溫度和最適pH條件下測定Hfsu02在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中的生長曲線。

最適pH的測定：設(shè)置的pH梯度為 3、4、5、6、7，每組設(shè)置三個平行。溫度選用真菌常規(guī)培養(yǎng)溫度30℃，200 r/min振蕩培養(yǎng)48 h，測量培養(yǎng)后菌絲體的干重，統(tǒng)計分析菌根真菌Hfsu02的最適pH。

最適溫度的測定：設(shè)置的溫度梯度為20℃、25℃、30℃和35℃，每個溫度設(shè)置三個平行，培養(yǎng)基pH調(diào)為最適，200 r/min振蕩培養(yǎng)48 h，測量培養(yǎng)后菌絲體的干重，統(tǒng)計分析菌根真菌Hfsu02的最適生長溫度。

生長曲線測定：在最適pH，最適溫度下，200 r/min振蕩培養(yǎng)，定時稱量30 mL培養(yǎng)基中的菌絲干重，構(gòu)建棘孢木霉Hfsu02在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中的生長曲線。

2 結(jié)果和分析

2.1 安徽不同地區(qū)藍莓（奧尼爾品種）侵染率與侵染形態(tài)觀察

將安徽不同藍莓栽培土壤中的5～6年生奧尼爾品種的根段經(jīng)臺盼藍染液染色后，置于顯微鏡下觀察，發(fā)現(xiàn)不同土壤中的藍莓根系均有侵染現(xiàn)象（圖 1）。

圖1 安徽不同地區(qū)藍莓根系菌根侵染顯微圖（10×40）

其中圖1-A、圖1-B、圖1-C為宣城地區(qū)紅壤栽培藍莓根系侵染形態(tài)，其菌根真菌既有根外菌絲（圖1-A、圖1-B），又有胞間貫穿菌絲和胞內(nèi)菌絲團（圖 1-C）；圖1-D、圖1-E、圖 1-F為合肥地區(qū)改良水稻土栽培藍莓根系侵染形態(tài)，侵染的菌根真菌多為外生菌絲（圖 1-D、圖 1-E、圖1-F）；圖1-G、圖1-H、圖1-I為懷寧地區(qū)紅黃壤栽培藍莓根系侵染形態(tài)，侵染的菌根真菌即有外生菌絲（圖1-G、圖1-H）又有胞內(nèi)菌絲團和胞間貫穿菌絲（圖 1-I）。

根據(jù)觀察結(jié)果，統(tǒng)計安徽省各地區(qū)不同土壤栽培的藍莓根系菌根真菌侵染率（表2）。

表2 安徽不同地區(qū)藍莓菌根真菌侵染率（%）

2.2 菌根真菌的分離與菌落特征

在安徽宣城地區(qū)中紅壤栽培的藍莓根系中純化出7種形態(tài)不同的菌根真菌，在合肥地區(qū)改良水稻土栽培的藍莓根系中純化出6種菌根真菌，懷寧地區(qū)紅黃壤中純化出4種菌根真菌，經(jīng)鑒定后排除污染菌株，統(tǒng)計菌株及其在PDA培養(yǎng)基上的菌落形態(tài)特征（表3）。

表3 安徽不同藍莓栽培土壤中藍莓根系真菌菌株形態(tài)特征

2.3 菌根真菌分子鑒定

PCR擴增結(jié)果顯示，篩選出的菌根真菌的ITS序列擴增條帶較為清晰，條帶長度在500～750 bp，符合預(yù)期（圖2）。條帶純化后，送上海生工測序。

圖2 17種藍莓菌根真菌ITS序列PCR產(chǎn)物電泳圖

將測序結(jié)果在NCBI數(shù)據(jù)庫進行Blast序列比對，根據(jù)比對的結(jié)果，選取真菌中和測序鑒定結(jié)果相關(guān)主要的種屬，獲取代表種的ITS序列，以Colletotrichumcoccodes和Saccharomyces cerevisiae作為外類群，共47個ITS序列使用鄰接法構(gòu)建系統(tǒng)進化樹（圖3）。

圖3 安徽不同地區(qū)藍莓菌根真菌系統(tǒng)進化樹（NJ法）

分析地位。經(jīng)鑒定，從根系分離出的真菌共分屬六個屬，其中 Xcsu02、Xcsu03、Xcsu04、Hfsu02和Hfsu03和相關(guān)菌種聚為E組，為木霉屬（Trichoderma），是分離株數(shù)最多的優(yōu)勢菌屬；Xcsu05、Xcsu06、Hfsu05、Hnsu01 和相關(guān)菌種聚為D組，分屬于鐮刀菌屬（Fusarium）顯示三地藍莓均存在不同程度的根腐病感染；Xcsu07、Hnsu04、Hnsu06、Hnsu03和相關(guān)菌種聚為B組，分屬于曲霉屬（Aspergillus）；Hfsu01、Hnsu02 和相關(guān)菌種聚為 A組，分屬于青霉屬（Penicillium）；Hfsu04和相關(guān)菌種聚為C組，分屬于枝孢屬（Cladosporium）；Xcsu08和相關(guān)菌種聚為F組，分屬于Rhizopus（根霉屬）。具體比對鑒定結(jié)果見表4。

表4 安徽不同地區(qū)藍莓根系菌根真菌分子鑒定結(jié)果

在安徽宣城紅壤篩選出的7株菌株中，有3株為木霉屬，2株為鐮刀菌屬，1株為曲霉屬，1株為根霉屬，篩選出的菌株數(shù)量最多；在合肥地區(qū)所篩的6株菌株中，分屬于5個菌屬，為青霉屬、木霉屬、枝孢屬、鐮刀菌屬和曲霉屬；在懷寧地區(qū)，共篩選出3種菌屬，為鐮刀菌屬，青霉屬和曲霉屬。由表4可知，木霉屬的菌根真菌占所鑒定菌株的29.4%，為優(yōu)勢種。鐮刀菌屬的真菌侵染，在三個不同地區(qū)均有發(fā)現(xiàn)，占所篩菌株的23.5%，尤其以宣城為多。曲霉屬的菌根真菌同為亞優(yōu)勢種，占所篩菌株的23.5%，而其他的菌屬數(shù)量則較少。

2.4 拮抗尖孢鐮刀菌的菌根真菌的篩選

取藍莓根系中共篩選出13株菌根真菌 （尖孢鐮刀菌除外），基于對尖孢鐮刀菌的抑菌圈大小初步篩出6株可有效拮抗的菌根真菌，結(jié)果見表5。

將此6株菌株進行三組平行試驗，進行后續(xù)實驗，以無菌水試片作為空白對照。在30℃恒溫培養(yǎng)72 h，用十字交叉法測抑菌圈直徑（圖4）。

觀察抑菌圈，統(tǒng)計抑菌圈大小，結(jié)果如表6所示。

表5 拮抗菌株對尖孢鐮刀菌的抑制作用

圖4 拮抗尖孢鐮刀菌的藍莓菌根真菌的抑菌效果

表6 拮抗菌株對尖孢鐮刀菌的抑制作用

從表6和圖4可知，這6株初篩的拮抗菌株對尖刀鐮刀菌均具有一定的抑菌效果。其中菌株Hfsu02（棘孢木霉）抑菌效果最明顯，抑制圈直徑達到1.72±0.19 cm，通過SPSS進行方差分析后可知六種拮抗菌拮抗作用差異顯著 （f=16.386，p=0.001），Hfsu02的抑菌效果顯著性高于其他菌株（p＜0.05），因此后續(xù)實驗選用拮抗菌棘孢木霉Hfsu02進行。

2.5 棘孢木霉Hfsu02的形態(tài)特征

棘孢木霉Hfsu02在PDA固體培養(yǎng)基上的菌落形態(tài)如圖5所示。

圖5 不同培養(yǎng)時間下棘孢木霉Hfsu02菌落圖片

表7 不同培養(yǎng)時間下棘孢木霉Hfsu02的菌落形態(tài)特點

觀察不同培養(yǎng)時間的棘孢木霉Hfsu02的菌落變化特點，其形態(tài)變化規(guī)律統(tǒng)計如表7。

使用PDA培養(yǎng)基液體搖瓶培養(yǎng)時，棘孢木霉Hfsu02菌絲纏繞形成大小不一的菌絲球 （圖6），培養(yǎng)24 h后，菌絲球呈米粒般大小，表面光滑，呈白色，菌液無色，呈微渾濁狀。培養(yǎng)48 h后，菌絲球體積變大，數(shù)量變多，且顏色由白色轉(zhuǎn)變?yōu)槿辄S色。溶液由透明色轉(zhuǎn)為淡黃色，且溶液變渾濁。顯微觀察發(fā)現(xiàn)，此時溶液由透明色轉(zhuǎn)為淡黃色且渾濁，是因為棘孢木霉Hfsu02在培養(yǎng)48 h小時后，在PDA液體培養(yǎng)基中產(chǎn)生了大量分生孢子。在液體培養(yǎng)時易產(chǎn)孢子，也是棘胞木霉的特征之一，目前棘胞木霉工業(yè)上主要也是通過優(yōu)化液體培養(yǎng)條件來獲取大量的孢子懸液[19-20]。因此棘孢木霉Hfsu02也可以通過液體培養(yǎng)來方便的獲取大量孢子，便于生產(chǎn)應(yīng)用。

由圖6可以看出，棘孢木霉所產(chǎn)分生孢子為圓球形或卵圓形，顏色淡黃至深綠，大小均一，符合棘孢木霉的特征。

圖6 搖瓶培養(yǎng)不同時期棘孢木霉Hfsu02特征

2.6 棘孢木霉在基礎(chǔ)培養(yǎng)基上生長特性研究

棘孢木霉Hfsu02最適宜生長的溫度、pH使用基礎(chǔ)培養(yǎng)基測定。通過單一變量的變化，200 r/min的振蕩培養(yǎng)48 h后測量不同培養(yǎng)條件下30 mL培養(yǎng)基中棘孢木霉Hfsu02菌絲體干重，結(jié)果見圖7。

圖7 不同培養(yǎng)條件下棘孢木霉Hfsu02培養(yǎng)48 h菌絲體干重

由圖7-A結(jié)果可知，棘孢木霉Hfsu02在不同pH條件下生長狀況不一樣。五種pH下菌體干重的差異達顯著水平（p＜0.05），多重比較后可以得出，pH為4.0時棘孢木霉Hfsu02菌體干重顯著性高于 pH為 3.0、5.0、6.0、7.0時的菌體干重，同時pH為3.0時棘孢木霉Hfsu02菌體干重顯著性低于與其它pH培養(yǎng)下菌體干重，pH為5.0、6.0、7.0時菌體干重差異非顯著性。綜合考慮，基礎(chǔ)培養(yǎng)基pH為4.0時菌體生長狀況最好，為棘孢木霉的Hfsu02最適生長溫度，但當(dāng)pH小于4.0后對菌體生長有極強的負影響。

由圖7-B結(jié)果可知，棘孢木霉在不同溫度下生長速率不一。四種溫度下菌體干重差異達顯著水平（P＜0.05），多重比較后可以得出，在基礎(chǔ)培養(yǎng)基（pH=4.0）培養(yǎng)條件下，培養(yǎng)溫度為25℃時棘孢木霉Hfsu02菌體干重顯著性高于其他溫度，而溫度培養(yǎng)溫度為20℃、30℃和 35℃時，棘孢木霉Hfsu02菌體干重的差異不顯著，綜合考慮，基礎(chǔ)培養(yǎng)基（pH=4.0）培養(yǎng)條件下25℃時菌體生長狀況最好，為棘孢木霉Hfsu02的最適生長溫度。

使用基礎(chǔ)培養(yǎng)基培養(yǎng)棘孢木霉Hfsu02，培養(yǎng)溫度25℃，pH調(diào)整為4.0。搖瓶培養(yǎng)體積為30 mL條件下，接種棘孢木霉200 μL均勻孢子懸液（濃度為105/mL），培養(yǎng)后定時定量測得不同時期菌體干重，繪制生長曲線，如圖8所示。

圖8 棘孢木霉Hfsu02優(yōu)化培養(yǎng)條件下的生長曲線

從圖8可知棘孢木霉在0～8 h期間為延滯期，12～112 h為指數(shù)生長期，菌株生長速率較快，112 h之后菌株達到穩(wěn)定生長期，生長速度緩慢，最高產(chǎn)量為2.76 g/L。

3 討論

菌根真菌可以促進藍莓對營養(yǎng)物質(zhì)的吸收，并具有對有害微生物的拮抗能力。野生藍莓基本上均侵染了菌根真菌[14]，而在人工種植時，侵染率較低。本研究顯示，宣城地區(qū)種植園中紅壤和合肥地區(qū)種植園中改良水稻土栽培的藍莓根系的侵染率相對較高，分別為43.33%和36.66%，而懷寧地區(qū)紅黃壤中藍莓根系侵染率較低為20.00%，菌根侵染率低于野生環(huán)境，這可能是人工種植藍莓易出現(xiàn)各種疾病的原因之一。在選擇藍莓栽培土壤時，可以優(yōu)先選擇侵染率較高的土壤類型。目前在建設(shè)藍莓種植園時，普遍使用硫磺等物質(zhì)處理土壤，使土壤的理化性質(zhì)適宜，但是缺少對土壤微生物群落結(jié)構(gòu)維持和改造的考慮。因此，對改造后的土壤，可以考慮加入適當(dāng)?shù)拇偕⑸?，改善土壤微生物結(jié)構(gòu)，促進藍莓的菌根侵染。

對安徽不同地區(qū)的藍莓菌根形態(tài)觀察表明，菌根主要表現(xiàn)為外生菌根，但懷寧地區(qū)和宣城地區(qū)的藍莓根系中也有胞間貫穿菌絲和胞內(nèi)菌絲團，侵染形式更加多樣。合肥地區(qū)的藍莓種植土壤中可考慮加入能形成胞內(nèi)寄生的菌根真菌，提高侵染的多樣性。本研究從安徽不同地區(qū)栽培的藍莓根系中共分離出17株內(nèi)生菌，共6種菌屬。其中木霉屬（Trichoderma）數(shù)量最多，為5株，為安徽藍莓根系中內(nèi)生的優(yōu)勢真菌。拮抗實驗表明，大部分的木霉菌均可拮抗尖孢鐮刀菌，是一類促進藍莓抗病性的菌根真菌[21]。4株屬于鐮刀菌屬（Fusarium），各地區(qū)藍莓根系中均有發(fā)現(xiàn)，說明在安徽各地區(qū)，尖孢鐮刀菌的侵染普遍存在，是威脅藍莓健康生長的主要致病菌[22]，對尖孢鐮刀菌的進一步研究對藍莓根腐病的防治提供理論依據(jù)。其余4株屬于曲霉屬（Aspergillus），2株屬于青霉屬（Penicillium），1 株屬于枝孢屬（Cladosporium），1株屬于根霉屬（Rhizopus）。青霉屬的菌株一方面可以拮抗其它有害微生物，促進藍莓生長，但在藍莓果實貯藏、運輸?shù)倪^程中導(dǎo)致果實減產(chǎn)[23]，枝孢屬（Cladosporium）也是一種植物治病菌[24]，可對藍莓病原菌進行治理和防治。

安徽宣城地區(qū)的紅壤，所篩菌株數(shù)目最多，種類也較豐富。這可能是因為紅壤為酸性土壤，且微生物資源豐富，適宜藍莓種植，對其土壤的人工改造不多，保留了較多的微生物類群。而合肥大圩地區(qū)的改良水稻土雖然經(jīng)過硫磺等化學(xué)物質(zhì)改造，但因為其富含腐殖質(zhì)，導(dǎo)致侵染的菌根真菌的種類較多。懷寧地區(qū)藍莓根系侵染率較低，且分離的菌根真菌種類較少，需要特別注意土壤微生物群落的改造。

藍莓根腐病致病菌大多為尖孢鐮刀菌，故尋找降低甚至殺死尖孢鐮刀菌的生物防治方法方法成為當(dāng)務(wù)之急。目前發(fā)現(xiàn)的拮抗尖孢鐮刀菌的生防菌大多為木霉菌、叢枝根菌和芽孢桿菌，而本研究分離的棘孢木霉Hfsu02等多株木霉屬菌根真菌可有效拮抗尖孢鐮刀菌，說明木霉類群普遍在尖孢鐮刀菌的生物防治上具有一定的效果，在藍莓根腐病的生物防治方面，具有較好的應(yīng)用潛力和應(yīng)用價值。

棘孢木霉作為生防微生物，在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中有重要作用。為提高棘孢木霉Hfsu02的生長速率，本研究探究了關(guān)于以下幾個因素：碳源、氮源、溫度及pH對其生長狀況的影響。研究表明溫度與pH對菌體生長狀況的影響較大，其中最適于棘孢木霉Hfsu02的生長溫度為25℃，最適的pH=4，此結(jié)果與李琳等[25]研究的棘孢木霉T31的最適溫度30℃，最適的pH=6不相同，其對酸性條件的適應(yīng)性和其長期生存在改造后的酸性土壤中（實測pH=3.2）有關(guān)。棘孢木霉Hfsu02的最適pH和藍莓對土壤的酸堿性近似，有利于其與藍莓根部的共生，相比其它棘孢木霉，更適用于防治藍莓根腐病。本研究對棘孢木霉Hfsu02最適溫度、最適pH的測定以及其在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中液體培養(yǎng)的生長曲線測定，為棘孢木霉Hfsu02的大規(guī)模培養(yǎng)和接種提供了理論依據(jù)，對擴大藍莓產(chǎn)量和質(zhì)量，預(yù)防藍莓疾病具有重要的應(yīng)用價值。