吳文惠，王少卿

(1.山東中醫(yī)藥大學(xué) 藥學(xué)院，山東 濟(jì)南 250355；2.煙臺(tái)萬(wàn)潤(rùn)藥業(yè)有限公司，山東 煙臺(tái) 264006)

維格列汀(Vildagliptin)是用于治療2-型糖尿病的二肽基肽酶-IV (DPP-IV)抑制劑[1]。臨床研究表明，維格列汀降血糖效果顯著，服用安全，耐受性好，不良反應(yīng)少[2]。在維格列汀生產(chǎn)過(guò)程中用到二氯甲烷、丁醇和丁酮，為保證產(chǎn)品質(zhì)量、控制溶劑的殘留在法規(guī)要求的限度內(nèi)，須對(duì)溶劑殘留進(jìn)行檢測(cè)[3]。本實(shí)驗(yàn)依據(jù)人用藥品注冊(cè)技術(shù)要求國(guó)際協(xié)會(huì)(ICH)中對(duì)殘留溶劑的指導(dǎo)原則規(guī)定了二氯甲烷、乙醇和丁酮的限度，并依據(jù)《中華人民共和國(guó)藥典》2015年版第四部通則0861第二法中的殘留溶劑測(cè)定法，以及《化學(xué)藥物殘留溶劑研究的技術(shù)指導(dǎo)原則》，對(duì)維格列汀原料藥中的二氯甲烷、丁醇和丁酮?dú)埩羧軇┻M(jìn)行了研究。該方法簡(jiǎn)單方便，準(zhǔn)確度高，是檢測(cè)該藥品殘留溶劑的有效方法。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

氣相色譜儀(Agilent6890N)，頂空進(jìn)樣器(AgilentG1888)，電子天平(精確度：0.00001g)。

1.2 試劑

維格列汀(煙臺(tái)萬(wàn)潤(rùn)藥業(yè)有限公司，批號(hào)：VPVGN14001、VPVGN14002、VPVGN14003、VPVGN14004、VPVGN15001)，二氯甲烷、乙醇、丁酮(氣相色譜純)，N,N-二甲基甲酰胺(色譜純)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱為6%氰丙基苯基-94%二甲基聚硅氧烷為固定液的毛細(xì)管色譜柱(Agilent DB-624毛細(xì)管柱， 30m×0.32mm×1.80μm)；頂空平衡溫度90℃，頂空平衡時(shí)間45min，定量環(huán)溫度100℃，傳輸管線(xiàn)溫度110℃，頂空瓶容積20mL，進(jìn)樣體積1mL；氣相起始溫度為40℃，維持5min，以每分鐘10℃的速率升溫至100℃，再以每分鐘30℃的速率升溫至230℃，維持3min，進(jìn)樣口溫度200℃，檢測(cè)器溫度280℃；載氣為氮?dú)?，流?.0mL/min，分流比10∶1。

2.2 溶液的配置

空白溶液：取N，N-二甲基甲酰胺適量即可。

定位溶液：分別精密稱(chēng)取乙醇、丁酮約500mg，二氯甲烷約60mg，分別置于3個(gè)100mL量瓶中，用二甲基甲酰胺溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為貯備液；精密量取貯備液1mL，置10mL量瓶中，用二甲基甲酰胺稀釋至刻度，搖勻即得3種殘留溶劑的定位溶液。

對(duì)照品溶液：精密量取乙醇、二氯甲烷和丁酮的貯備液各5mL，置同一50mL量瓶中，用二甲基甲酰胺稀釋至刻度，搖勻即得。

供試品溶液：精密稱(chēng)定維格列汀樣品0.5g，置20mL頂空瓶中，精密加入N，N-二甲基甲酰胺5mL使溶解，即得供試品溶液。

2.3 專(zhuān)屬性和系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

精密量取空白溶液、定位溶液、對(duì)照品溶液5mL，置20mL頂空瓶中，密封。按“2.1”項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)樣，結(jié)果見(jiàn)表1。其結(jié)果表明乙醇、二氯甲烷、丁酮色譜峰與其相鄰色譜峰的分離度均大于1.5，3種溶劑主峰的理論板數(shù)均大于5000，對(duì)照品溶液連續(xù)5次重復(fù)進(jìn)樣的各峰面積的RSD均小于10.0%。

表1 各色譜峰的分離度、理論塔板數(shù)和重復(fù)進(jìn)樣各色譜峰峰面積的RSD

2.4 定量限和檢測(cè)限

精密稱(chēng)取乙醇、二氯甲烷和丁酮適量，分別用二甲基甲酰胺溶解并逐步稀釋成一系列不同質(zhì)量濃度的溶液，分別精密量取5mL，置20mL頂空瓶中，密封，按“2.1”項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)樣。當(dāng)信噪比為10∶1時(shí)，得各成分溶液的定量限依次為0.4997，0.4736，0.30078μg/mL；等信噪比為3∶1時(shí)，得各成分的檢測(cè)限依次為0.14991，0.14208，0.090234μg/mL。表明其定量限和檢測(cè)限均能符合維格列汀殘留溶劑的測(cè)定要求。

2.5 線(xiàn)性與范圍

精密稱(chēng)取乙醇、二氯甲烷和丁酮貯備液適量，加二甲基甲酰胺配制成從各溶劑定量限到對(duì)照品溶液120%質(zhì)量濃度的6個(gè)質(zhì)量濃度：定量限、20%水平、40%水平、80%水平、100%水平、120%水平。取上述溶液各5mL，按“2.1”項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)樣，以質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制線(xiàn)性回歸曲線(xiàn)，結(jié)果顯示二氯甲烷、乙醇和丁酮在定量限至限度120%的質(zhì)量濃度范圍內(nèi)線(xiàn)性關(guān)系良好(見(jiàn)表2)。

表2 3種殘留溶劑的線(xiàn)性回歸方程及檢測(cè)限

2.6 精密度

精密量取供試品溶液5mL，置20mL頂空瓶中，按“2.1”項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)樣，連續(xù)進(jìn)樣6次；精密量取對(duì)照品溶液5mL，置20mL頂空瓶中，按 “2.1”項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)樣。按外標(biāo)法以峰面積對(duì)6份供試品的殘留溶劑進(jìn)行計(jì)算，結(jié)果表明乙醇和丁酮的RSD均小于10.0%(二氯甲烷未檢出)，精密度良好(見(jiàn)表3)。

表3 精密度試驗(yàn)結(jié)果

2.7 加樣回收率

精密稱(chēng)取維格列汀供試品9份，每份約0.5g，分別置于20mL頂空瓶中，每組3份分別平行加入用N,N-二甲基甲酰胺稀釋至40%、60%的對(duì)照品溶液，以及未稀釋的對(duì)照品溶液各5.0mL，使溶解，得9份回收率試驗(yàn)溶液。取對(duì)照品溶液和回收率試驗(yàn)溶液1～9，分別頂空進(jìn)樣，記錄色譜圖，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算回收率試驗(yàn)溶液1～9中的溶劑含量。結(jié)果測(cè)得乙醇、二氯甲烷和丁酮的平均回收率分別為96.3%，97.9%，97.2%，RSD分別為3.6%，1.0%，2.8%，表明該方法準(zhǔn)確性良好。

2.8 樣品殘留溶劑測(cè)定

取4批樣品，測(cè)定3種有機(jī)溶劑殘留量，結(jié)果見(jiàn)表3。結(jié)果表明4批樣品均未檢出二氯甲烷，乙醇和丁酮有微量檢出，但均遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于限度要求，表明此法能有效的定量檢測(cè)維格列汀中的3種殘留溶劑，且該生產(chǎn)方法能有效控制殘留溶劑量。

表4 樣品殘留溶劑測(cè)定結(jié)果

3 討論

3.1 耐用性試驗(yàn)考察

用二甲基甲酰胺溶解精密稱(chēng)定的氯甲烷、乙醇和丁酮，得混合溶液，進(jìn)樣，通過(guò)改變氣相起始溫度、檢測(cè)器溫度，各色譜峰的保留時(shí)間有所變化，但被測(cè)物色譜峰與其相鄰色譜峰的分離度均大于1.5，3種溶劑主峰的理論板數(shù)均大于5000(見(jiàn)表5)，結(jié)果表明此方法耐用性好。

表5 耐用性試驗(yàn)結(jié)果

表5(續(xù))