孔令寧 吳雨霏

[摘要] 目的：觀察葡萄皮提取物和維生素C配伍對小鼠免疫力的影響。方法：選用ICR小鼠，進(jìn)行臟器/體重比值測定、遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)、刀豆蛋白 A（Con A）誘導(dǎo)的小鼠淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化實驗、抗體生成細(xì)胞檢測、半數(shù)溶血值（HC50）測定、碳廓清實驗、小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞實驗和NK細(xì)胞活性測定，研究葡萄皮提取物和維生素C配伍是否可以調(diào)節(jié)免疫功能。結(jié)果：葡萄皮提取物和維生素C配伍能增強(qiáng)小鼠的遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)，提高小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞的數(shù)量，還能促進(jìn)NK細(xì)胞的活性。但對小鼠體重、脾臟/體重、胸腺/體重、淋巴細(xì)胞增殖能力、抗體生成細(xì)胞數(shù)、半數(shù)溶血值、碳廓清功能無影響。結(jié)論：葡萄皮提取物和維生素C配伍具有一定的調(diào)節(jié)小鼠免疫功能的作用。

[關(guān)鍵詞] 葡萄皮提取物;維生素C;免疫

葡萄皮中含有豐富的營養(yǎng)成分，如酚類物質(zhì)、酒石酸、蘋果酸、維生素、葡萄籽油、膳食纖維等。葡萄皮中白藜蘆醇含量比較豐富，屬于酚類物質(zhì)。白藜蘆醇具有抗腫瘤、降低心血管疾病和糖尿病等醫(yī)療保健作用。葡萄皮提取物中還含有豐富的濃縮單寧酸，濃縮單寧酸具有調(diào)節(jié)免疫力的作用[1-2]。維生素 C（Vitamin C ，Ascorbic Acid）又叫 L-抗壞血酸，是人體必需的微量營養(yǎng)元素之一，它具有

抗氧化、參與合成膠原蛋白、治療和預(yù)防壞血病、預(yù)防動脈硬化、治療貧血、防癌等多種生理學(xué)功能。除此之外，維生素C還能促進(jìn)機(jī)體內(nèi)抗體的形成，提高白細(xì)胞的吞噬能力和對疾病的抵抗力以及對寒冷的耐受力，從而增強(qiáng)機(jī)體的免疫功能[3-4]。本實驗觀察葡萄皮提取物和維生素C混合粉對小鼠免疫的影響。

1 材料

1.1 實驗藥物

葡萄皮提取物維生素C復(fù)合物由實驗室自制。葡萄皮提取物（白黎蘆醇含量4.8%）比維生素C為12.5：1的比例混合制成混合粉末。

1.2 實驗動物

SPF級ICR昆明小鼠，體重（18-22）g，由北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部實驗動物中心提供。

1.5 實驗儀器及試劑

二氧化碳培養(yǎng)箱、電子分析天平、臺式離心機(jī)、分光光度計、酶標(biāo)儀、游標(biāo)卡尺、細(xì)胞計數(shù)板、24孔和96孔細(xì)胞培養(yǎng)板、96孔U型細(xì)胞培養(yǎng)板等。RPMI1640培養(yǎng)液、小牛血清、、綿陽紅細(xì)胞（SRBC）、雞紅細(xì)胞、刀豆蛋白A（ConA）、Hank’s溶液、印度墨汁碳酸鈉等。

2 方法

參考《保健食品檢驗與評價技術(shù)規(guī)范》（2003年版）中增強(qiáng)免疫力功能檢驗方法，分別進(jìn)行遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)（DTH）、ConA誘導(dǎo)的小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化、血清溶血素測定實驗、抗體生成細(xì)胞檢測實驗、小鼠碳廓清實驗、小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞實驗、NK細(xì)胞活性測定等項實驗，并依照該檢驗方法的判定標(biāo)準(zhǔn)，判定實驗結(jié)果。

2.1實驗分組 共分為四組，每組共60只健康雄性小鼠，再分為4個小組，每小組15只。一組進(jìn)行遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)、臟器/體重比值測定、半數(shù)溶血值（HC50）的測定和抗體生成細(xì)胞檢測;二組進(jìn)行碳廓清實驗;三組進(jìn)行小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞實驗;四組進(jìn)行實驗ConA誘導(dǎo)的小鼠淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化實驗和NK細(xì)胞活性測定。

2.2 劑量選擇與配制 成人推薦攝入量為1.0 g/60kg·BW，以日攝入量的5、10和30倍設(shè)置灌胃劑量，即0.083、0.167和0.50 g/kg·BW，各劑量組以純化水稀釋。以純化水為陰性對照組，各組小鼠灌胃量均為0.2ml/10g，連續(xù)灌胃30天后，測各組免疫指標(biāo)。

2.3數(shù)據(jù)統(tǒng)計 采用SPSS11.5統(tǒng)計軟件處理數(shù)據(jù)，實驗結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（ ）表示。多組比較采用單因素方差分析，方差齊時，各組間兩兩比較用LSD法;方差不齊時，各組間兩兩比較采用Tamhane法。P <0.05 表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

3.1 葡萄皮提取物維生素C混合粉對小鼠體重及臟器/體重比值的影響

灌胃給予不同劑量的葡萄皮提取物維生素C混合粉30天，四組實驗各劑量組小鼠體重與陰性對照組比較，差異無顯著差異（P>0.05），即葡萄皮提取物維生素C混合粉對小鼠體重?zé)o影響;各劑量組胸腺/體重比值和脾臟/體重比值與陰性對照組比較，差異無顯著性（P>0.05），即葡萄皮提取物維生素C混合粉對小鼠臟器/體重比值無明顯影響。

3.2 葡萄皮提取物維生素C混合粉對小鼠細(xì)胞免疫功能的影響

灌胃給予不同劑量的葡萄皮提取物維生素C混合粉30天，中、高劑量組足趾腫脹度與陰性對照組比較，差異有顯著性（P<0.05）;各劑量組淋巴細(xì)胞的增殖能力與陰性對照組比較，差異無顯著性（P>0.05）

3.3 葡萄皮提取物維生素C混合粉對體液免疫的影響

灌胃給予不同劑量的葡萄皮提取物維生素C混合粉30天，各劑量組抗體生成細(xì)胞數(shù)、半數(shù)溶血值與陰性對照組比較，差異均無顯著性（P>0.05）;

3.4葡萄皮提取物維生素C混合粉對小鼠單核-巨噬細(xì)胞吞噬功能的影響

灌胃給予不同劑量的葡萄皮提取物維生素C混合粉30天，各劑量組碳廓清功能與陰性對照組比較，差異無顯著性（P>0.05）;不同劑量組小鼠巨噬細(xì)胞吞噬噬雞紅細(xì)胞的吞噬指數(shù)與陰性對照組比較，差異有顯著性（P<0.05）。

3.5 葡萄皮提取物維生素C混合粉對小鼠NK細(xì)胞活性的影響

灌胃給予不同劑量的葡萄皮提取物維生素C混合粉30天，不同劑量組NK細(xì)胞活性與陰性對照組比較，差異有顯著性（P<0.05），結(jié)果表明葡萄皮提取物維生素C混合粉可激活小鼠NK細(xì)胞活性。

4 討論

機(jī)體的免疫反應(yīng)可分為非特異性免疫反應(yīng)和特異性免疫反應(yīng)兩種，如果非特異性免疫反應(yīng)不能抵抗病原體的入侵， 將會激發(fā)特異性免疫反應(yīng)。吞噬細(xì)胞、T 淋巴細(xì)胞、B 淋巴細(xì)胞對免疫反應(yīng)的感應(yīng)階段所起的作用依次是對抗原的處理、呈遞和識別 ，其中T 淋巴細(xì)胞介導(dǎo)細(xì)胞免疫，B淋巴細(xì)胞介導(dǎo)體液免疫。

本實驗結(jié)果提示，葡萄皮提取物維生素C混合粉能增強(qiáng)小鼠的遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)，提高小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞的數(shù)量，還能促進(jìn)NK細(xì)胞的活性。表明葡萄皮提取物維生素C配伍具有一定的調(diào)節(jié)小鼠免疫功能的作用。

參考文獻(xiàn)

1.王霄倩，王恒振，劉麗娜等.葡萄皮渣的營養(yǎng)價值及綜合利用.中國農(nóng)學(xué)通報. 2017，33（27）：147-151

2.王虹玲，吳優(yōu)，于子簫等.釀酒葡萄皮渣中白藜蘆醇的提取及抗氧化、抗腫瘤活性研究.中國釀造.2018年，37（7）：112-116

3.孫秀川.維生素 C 對機(jī)體免疫功能的影響.內(nèi)蒙古醫(yī)學(xué)雜志.2014年，46（2）：174-176

4.維生素C對小鼠免疫功能的影響.右江名族醫(yī)學(xué)院學(xué)報.1990年3月，12（1）：1-3