摘要：近年，胚胎繁殖技術(shù)在畜牧養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)中的應(yīng)用頻率不斷增加，在畜禽品種改良方面發(fā)揮了不可替代的作用，為我國(guó)牛羊品種良種化進(jìn)程作出了突出貢獻(xiàn)。應(yīng)用胚胎繁殖技術(shù)能加速牛羊品種改良進(jìn)程，有效解決傳統(tǒng)牛羊品種改良周期長(zhǎng)、耗費(fèi)成本高的缺點(diǎn)，極大提高繁殖效率。該文分析了牛羊品種改良胚胎繁殖技術(shù)，并論述了影響該項(xiàng)技術(shù)推廣應(yīng)用的主要因素。

關(guān)鍵詞：牛羊品種改良;胚胎繁殖技術(shù);影響因素

中圖分類(lèi)號(hào)：S823

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：B

doi：10.3969/j.issn.2096-3637.2019.05.056

0引言

胚胎移植又被稱(chēng)為受精卵移植，胚胎繁殖技術(shù)的推廣應(yīng)用對(duì)于提高優(yōu)良母畜的繁殖能力，加強(qiáng)品種改良進(jìn)程、產(chǎn)雙胎率、克服母畜不孕癥、降低引種費(fèi)用、減少生殖系統(tǒng)疾病傳播等方面具有十分重要的應(yīng)用價(jià)值。近年，隨著牛羊品種改良進(jìn)程的不斷推進(jìn)，胚胎繁殖技術(shù)的應(yīng)用比例越來(lái)越大，胚胎移植技術(shù)得到了進(jìn)一步的應(yīng)用發(fā)展。牛羊胚胎移植技術(shù)作為現(xiàn)代牛羊養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)的一項(xiàng)重要技術(shù)，在生產(chǎn)和科學(xué)研究方面具有十分重要的應(yīng)用前景。

1胚胎繁殖技術(shù)

牛羊品種改良中的胚胎繁殖技術(shù)的推廣應(yīng)用主要包括供體母牛母羊和受體母牛母羊的正確選擇、供體母牛母羊和受體母牛母羊的同期發(fā)情處理、供體母牛母羊的超排卯處理、成功受胎的胚胎回收和冷凍保存、胚胎質(zhì)量檢測(cè)、胚胎移植、妊娠診斷等一系列工作。

1.1同期發(fā)情處理

供體母牛母羊在選擇過(guò)程中，要選擇年齡2-7周歲的經(jīng)產(chǎn)母牛或母羊，品種性狀優(yōu)良，具有該品種典型的遺傳特征和育種價(jià)值，遺傳性能穩(wěn)定，不存在各種傳染性疾病和遺傳疾病，身體健壯，采食欲望旺盛。在應(yīng)用胚胎繁殖技術(shù)前，相應(yīng)的技術(shù)人員需要對(duì)供體母牛母羊的身體健康情況進(jìn)行全面檢查，并持續(xù)觀察該頭母牛母羊的發(fā)情時(shí)間，掌握母牛母羊的發(fā)情規(guī)律。在進(jìn)行胚胎移植前，禁止隨意改變供體母牛母羊的養(yǎng)殖環(huán)境，避免產(chǎn)生應(yīng)激。受體母牛母羊年齡為2-5歲，具有正常的發(fā)情周期，身體健壯，采食欲望旺盛，不存在各種生殖系統(tǒng)疾病，能順利生產(chǎn)，并且有生生產(chǎn)經(jīng)驗(yàn)。供體母牛母羊和受體母牛母羊選擇后，需要對(duì)其進(jìn)行同期發(fā)情處理。通常主要使用外源性的性激素，保證其發(fā)情期和排卯期相近，差異不能超過(guò)ld。在同期發(fā)情處理過(guò)程中常用的外源性性激素主要包括P4、LH、PMSG、PGC等幾種[1]，其中最后一種外源性性激素具有很好的溶解黃體的能力，有利于保證供體母牛母羊和受體母牛母羊的同期發(fā)情，效果較好，價(jià)格較低，使用方便，在牛羊胚胎繁殖技術(shù)應(yīng)用中使用較多。

1.2供體母牛母羊超排卵處理

超排卵處理是在母牛母羊的1個(gè)發(fā)行周期內(nèi)選擇合適的時(shí)間，人為注射外源性的促性腺激素，加速卵巢生長(zhǎng)發(fā)育，增加排卵數(shù)量。在牛羊胚胎繁殖技術(shù)應(yīng)用中對(duì)供體母牛母羊進(jìn)行超排卯處理的目的是能一次性獲得更多胚胎。通常一次超排卵最好能回收10枚以上的胚胎，如果數(shù)量較少，難以回收，數(shù)量較多會(huì)嚴(yán)重影響受精率。

1.3胚胎采集

胚胎采集工作主要在供體母羊和母牛在正常受精后6-7d內(nèi)進(jìn)行。在采集中先將母牛和母羊正常綁定，確保保定架前高后低，前后相差20cm左有。然后選擇使用2%的普魯卡，因?qū)δ概：湍秆蜻M(jìn)行尾椎硬膜外腔麻醉處理。在胚胎收集前，應(yīng)對(duì)母牛的外陰和后期肢體進(jìn)行嚴(yán)格的衛(wèi)生消毒，然后使用開(kāi)張器將子宮開(kāi)張，小心清理子宮內(nèi)部的各種粘液，使用二通管對(duì)子宮進(jìn)行沖洗，當(dāng)沖洗液收集到潔凈消毒過(guò)的錐形瓶中。

1.4胚胎檢測(cè)

在對(duì)胚胎進(jìn)行檢測(cè)前，應(yīng)將回收回來(lái)的沖洗液靜置30min以上，然后選擇使用實(shí)體顯微鏡，尋找溶液中的胚胎。選擇使用經(jīng)過(guò)消毒的吸管，吸取沖洗液放置在PBS保存滴液中，作用一段時(shí)間后將其放在200倍顯微鏡下觀察，根據(jù)胚胎質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分級(jí)，將胚胎分為ABCD4個(gè)等級(jí)，選擇最優(yōu)質(zhì)的胚胎。

1.5胚胎保存

目前胚胎保存主要分為3種：常規(guī)冷凍保存、直接冷凍保存和玻璃化冷凍保存。首先，常規(guī)冷凍保存。胚胎常規(guī)冷凍保存又被稱(chēng)為平衡冷凍保存，胚胎常規(guī)冷凍保存。目前大多數(shù)哺乳動(dòng)物的胚胎保存主要應(yīng)用該種方法?；厥栈貋?lái)的優(yōu)質(zhì)胚胎放入到冷凍液中，經(jīng)過(guò)一段時(shí)間的平衡放置到試管中，按照0.5℃/min的速度，迅速下降到-7℃，進(jìn)行植冰，然后將溫度緩慢下降到-35℃，平衡10min左右，迅速將試管投入到液氮罐中保存。該種冷凍方法需要在胚胎當(dāng)中添加一定的防凍劑，牛羊胚胎常用的防凍劑主要包括甘油、乙二醇、丙二醇、二甲基亞砜和糖類(lèi);其次，直接冷凍法。直接冷凍法又被稱(chēng)為直接細(xì)管冷凍法，該種冷凍方法操作相對(duì)較為簡(jiǎn)單，是由第1種方法轉(zhuǎn)變而來(lái)。直接冷凍法經(jīng)常使用到的冷凍劑為1.5mol/L的乙二醇[2];最后，玻璃化冷凍法。它是將收集到的胚胎放置在玻璃化冷凍液中，平衡一段時(shí)間后，直接投入到液氮罐中進(jìn)行保存。這個(gè)過(guò)程繞過(guò)了冰品化階段，液態(tài)直接轉(zhuǎn)變?yōu)椴ＡЩ癄顟B(tài)，不需要對(duì)胚胎進(jìn)行緩慢降溫，在很大程度上減少了胚胎冷凍程序，避免了胚胎在冷凍過(guò)程中受到損傷，經(jīng)濟(jì)節(jié)約。

1.6胚胎移植

在胚胎移植前應(yīng)該對(duì)受體母牛進(jìn)行全面的處理，保證移植受體母牛的卵泡直徑達(dá)到20mm左右。通常受體母牛在發(fā)情36h后應(yīng)出現(xiàn)排卵現(xiàn)象。在進(jìn)行胚胎移植前，要確保受體母牛的黃體直徑超過(guò)15mm，并且具有明顯的凹凸感。在移植過(guò)程中選擇使用消毒好的吸管，分3個(gè)階段吸取PBS保存液[3]，將胚胎輸送到受體牛羊的子宮內(nèi)，然后將移植腔取出。

2影響因素

2.1胚胎質(zhì)量

在胚胎收集處理、冷凍保存過(guò)程中，由于胚胎的生產(chǎn)方式不同，胚胎質(zhì)量和發(fā)育潛能存在很大差異，進(jìn)而導(dǎo)致胚胎移植后受胎率存在很大不同。因此要保受體母牛正常受胎，需要生產(chǎn)高質(zhì)量的胚胎，這是提高移植成功率的關(guān)鍵。

2.2供體受體的同期發(fā)情性

由于胚胎在受體子宮中生長(zhǎng)發(fā)育，子宮的內(nèi)分泌變化情況會(huì)對(duì)子宮內(nèi)環(huán)境變化產(chǎn)生最直接的影響，而供體和受體之間是否能保證生理上的一致也是影響胚胎移植成功率的關(guān)鍵。

2.3操作技術(shù)

胚胎移植是一項(xiàng)技術(shù)要求很高的工作，操作技術(shù)是否恰當(dāng)，對(duì)移植妊娠率的影響十分大。操作人員在操作過(guò)程中技術(shù)是否嫻熟，胚胎解凍是否徹底，解凍方法是否恰當(dāng)，胚胎移植的時(shí)間是否恰當(dāng)，移植部位是否恰等都會(huì)對(duì)受體母牛的受胎率真影響。

3結(jié)束語(yǔ)

近年隨著人們物質(zhì)生活水平不斷提升，對(duì)牛羊制品需求量不斷增加，供需矛盾不斷凸顯，傳統(tǒng)的牲畜養(yǎng)殖模式和品種改良模式，難以滿足目前消費(fèi)者對(duì)高品質(zhì)牛羊制品的需求。胚胎繁殖技術(shù)的誕生推廣和應(yīng)用顛覆了傳統(tǒng)的繁殖模式和生產(chǎn)模式，加大了優(yōu)良牛羊品種的推廣進(jìn)程，有利于提高養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)的經(jīng)濟(jì)效益和生產(chǎn)效率，推動(dòng)現(xiàn)代畜牧養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)的發(fā)展，保證高品質(zhì)牛羊制品的持續(xù)供給。

參考文獻(xiàn)

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作者簡(jiǎn)介：瑪依努爾·艾買(mǎi)爾（1976-），女，維吾爾族，新疆沙雅人，中專(zhuān)，初級(jí)獸醫(yī)師，主要從事防檢驅(qū)治工作。