丁睿

葡萄球菌是屬于革蘭陽性球菌的一種類型，在自然界中廣泛存在，遍及空氣、土壤、水、物品與動物、人體的外表皮膚與外界相通的“通道”中?，F代醫(yī)學上根據此類菌種的生化反應、色素等不同把其分成金黃色葡萄球菌、腐生葡萄球菌、表皮葡萄球菌三大類。一般來說，金黃色葡萄球菌大部分都是致病細菌，表皮葡萄球菌致病的幾率比較小，而腐生葡萄球菌一般都是不致病的。因此我們可以說金黃色葡萄球菌因為具有很多的毒性，成為了所有葡萄球菌中最具殺傷力、危害最大的一類病菌。因此探討食品中金黃色葡萄球菌的檢測方法，是為食品安全提供保障， 有利于避免食物中毒事件的發(fā)生。我國的微生物檢測技術隨著科技進步而不斷提升，更多新型的檢測方法已經投入使用，下面我們著重分析食品中金黃色葡萄球菌的檢測方法。

金黃色葡萄球菌革蘭染色為陽性，兼性厭氧或需氧， 顯微鏡下呈葡萄串狀排列，無鞭毛，無芽孢，體外培養(yǎng)時一般不形成莢膜。最適生長溫度為 37℃，最適 pH 值為 7.4。它是常見的食源性致病菌，廣泛存在于自然環(huán)境中，營養(yǎng)要求不高，耐鹽性強，對干燥和高溫都有一定耐受能力， 能在惡劣環(huán)境中存活下來，容易造成食品的污染問題，而且在適當的條件下，能夠產生腸毒素，引起食物中毒。近幾年，金黃色葡萄球菌引發(fā)的食物中毒報道層出不窮，由金黃色葡萄球菌引起的食物中毒在微生物食物中毒事件中占有可觀的比例。

我們都知道，金黃色葡萄球菌是目前食物中毒事件中最重要也是最重要的致病菌之一，主要是因為其產生的毒素及酶較多，毒力強。國家衛(wèi)生和計劃生育委員會于

2013?年發(fā)布《食品安全國家標準 食品中致病菌限量》（GB

29921-2013），制定了金黃色葡萄球菌的限量標準。在日常生活中，可以把食品分成水產制品、食果蔬制品、肉制品、糧食制品、冷凍飲品、即食果蔬制品、飲料與即食調味品， 其中即食調味品中的金黃色葡萄球菌的限量是 n=5，c=2， m=100 CFU/g（mL），M=10000 CFU/g（mL），其余七類都是 n=5，c=1，m=100 CFU/g（mL）。

（一）傳統檢測方法

當前我國檢測食品中金黃色葡萄球菌依據國家標準

《食品微生物學檢驗金黃色葡萄球菌檢驗》（GB4789.10-2016） 對食品中的金黃色葡萄球菌進行檢測，主要包括定性與定量兩部分的檢測方法，檢測的過程主要包括以下幾部分： 細菌培養(yǎng)、分離純化、形態(tài)觀察、生化鑒定等。對于我國傳統的鑒定方法來說，其操作過程簡單、成本相對較低、穩(wěn)定性極強，也是目前最常用的鑒別方法。但是檢測過程一般需要 3-5?天。傳統的藥敏試驗方法是臨床上最常用的mrsa 檢測方法。然而 mrsa 的檢測易受培養(yǎng)基成分的影響， 尤其是氯化鈉含量、是否存在誘導劑等，還有 pH?值、培養(yǎng)時間、接種量、溫度等多方面的影響。該方法耗時長， 影響因素較多，操作不當就容易發(fā)生誤檢或漏檢的問題。

（二）快速檢測方法

此方法是對傳統鑒定方法的一種改進，主要利用的是

微生物生長代謝時產生的酶類型或者是代謝的產物，把一些能夠顯色的底物置入含有微生物的培養(yǎng)基里，這樣微生物的生長代謝產物會與底物作用產生特殊的顏色，從而判定是否為金黃色葡萄球菌。此方法在很大程度上縮短了檢測時間，操作過程也十分簡單。近年來我國頻繁發(fā)生微生物食物中毒事件，國家出臺了食品安全衛(wèi)生標準，對食品中致病菌做出了限量的規(guī)定。但是目前的致病菌檢測技術還是受到很多因素的影響，基層人員也很難掌握先進的檢測技術，因此快速檢測方法將會成為未來致病菌檢測的主要方法之一。

1.?測試片法

快速測試片是將特定的顯色物質和培養(yǎng)基附著在紙膜、紙片、膠片上作為培養(yǎng)載體，通過其上微生物的生長和顯色情況來檢測食品中金黃色葡萄球菌的一種快速檢測方法。該法既有顯色培養(yǎng)的特異性、高選擇與靈敏性，還具備經濟、簡便易行等優(yōu)點，雖然結果精度尚有欠缺，但特別適于金黃色葡萄球菌的快速篩查。

2.?試劑盒法

此方法主要是在特定的微型裝置中加入十幾種或者是幾十種培養(yǎng)基的成分，在此基礎上加入樣品液，在之后觀察這些微生物生長與代謝的產物或者是一些特定的現象， 再在觀察的基礎上對最后的結果進行細致的分析，大多傳統的實驗是在一段時間類就可以完成，使得檢測的時間大大的縮短，也提升了檢測的效率，一般的檢測結果可以在二十四小時內就得到結果，還有部分的反應可在短短 4 小時內出現結果。目前，可以檢測金黃色葡萄球菌的成品試劑盒有 MIS、API 等。

（三）分子生物學方法

自然界中每一個物種的 RNA/DNA 核酸序列都是獨一無二的，由于分子生物學與生命科學的不斷進步，細菌核酸的檢測技術得到發(fā)展應用。分子生物學檢測方法具有檢測限低、檢出靈敏度高、特異性強等優(yōu)點。

（1）核酸探針技術

此類技術主要是利用RNA/DNA 的特定片段作為探針， 用其與特定的核酸序列進行結合，先進行識別再標記它們， 這些技術主要利用的是核酸分子互補配對的基本原理，使用點雜交與雜交的方式去檢測核酸的同源性，這樣可以完全判斷出所要檢測的目標微生物。此技術最大的優(yōu)點就是特異性十分強，但是由于其檢測的周期性十分大，過程也是十分的復雜，，一旦樣品中的微生物含量十分少的，就不是很容易被檢測出來，會出現假陰性的結果。

（2）環(huán)介導等溫擴增技術

此技術通過把引物引入到靶目標序列上，在保持室內溫度恒定的前提下，利用具有鏈位移活性的 DNA?聚合酶， 建立一種新的核酸擴增方法，通過形成環(huán)狀結構和鏈位移來擴增目標 DNA，形成 DNA?產物的多個片段。此法最主要的特點就是快速、高效與特異性強。與 PCR?方法比較， 環(huán)介導等溫擴增法操作更加快捷簡單，花費成本較低，對儀器要求低，便于廣泛利用在食源性致病微生物的檢測中。

（3）聚合酶鏈式反應技術

聚合酶鏈反應（polymerase chain reaction，簡稱 PCR） 是一種體外無細胞克隆技術或特異性DNA 酶促擴增技術。

主要利用的是脫氧核糖核酸堿基互補配對的檢測原理，通過引物的方式去增加 DNA 的雙螺旋結構。此檢測方法敏感度高、特異性與穩(wěn)定性也十分高。但是其也有一定的限定性，所使用到的設備十分昂貴，試驗成本失分高，需要一定的技術支持與資金支持。

（四）免疫學方法

免疫學方法是通過抗原與抗體的特異性結合來進行的一種檢測方法，其主要優(yōu)勢是敏感性與特異性，可有效排除雜質的干擾。

（1）酶聯免疫法（ELISA）

該方法的最主要原理是抗原與抗體相結合的方法，把特定的酶與抗體結合在一起，跟蹤抗原與抗體的標記物， 一旦樣品中存在待測的物體，抗體或者是抗原就會與其發(fā)生反應產生抗體復合物，再根據顯色情況判斷樣品中是否含有待測物。金黃色葡萄球菌 5 種腸毒素 A、B、C、D、E 就有相應的 ELISA 試劑盒。

（2）免疫磁性微球技術

免疫磁性微球技術具有檢測時間短、準確度高等優(yōu)點，但是成本高。Yazdankhah?等人采用酶聯免疫吸附試驗

（ELISA）結合免疫磁珠分離法檢測牛奶中的金黃色葡萄球菌。劉琳琳制備金屬螯合免疫磁性微球分離金黃色葡萄球

菌 spa 蛋白及 western blot 檢測金黃色葡萄球菌。

（3）免疫熒光技術

免疫熒光技術的最大優(yōu)勢是操作過程簡單且敏捷度高，但是檢測所需設備價格昂貴。Khan 等人員把酶聯免疫技術、免疫熒光技術相結合，以此檢測金黃色葡萄球菌腸毒素;朱廣發(fā)等人用熒光抗體技術快速檢測食品中的金黃色葡萄球菌。

（4）乳膠凝集技術

這項技術的操作過程十分簡單，成本也很低，但由于檢測所需乳膠不太容易保存，不容易自凝，靈敏度就會有所下降。因此鮑行豪等人利用反向間接血凝的技術使乳膠反向凝集，用此方法檢測食品中的金黃色葡萄球菌。

（五）生物傳感器

這個方法主要利用的是生物物質的敏感性，把其濃度轉換成電信號的一種需要檢測的儀器。我們都知道生物產生化學反應的過程是十分多元化的，微電子學和現代傳感技術的成果已為檢測這些信息提供了豐富的手段。

綜上所述，社會在不斷發(fā)展，科學技術在不斷進步， 食品中金黃色葡萄球菌的檢測方法也在不斷發(fā)展更新，經過長期實踐，已經為食品衛(wèi)生監(jiān)督提供了重要技術支持， 期待先進高效的技術未來得到更多普及。