張爽 龐月
[摘要]針對(duì)潔凈區(qū)動(dòng)態(tài)沉降菌監(jiān)測(cè),A級(jí)區(qū)以平均值報(bào)告這個(gè)區(qū)域的監(jiān)測(cè)結(jié)果。但任何一個(gè)監(jiān)測(cè)碟中發(fā)現(xiàn)微生物都應(yīng)該調(diào)查原因;對(duì)90mm平皿TSA培養(yǎng)基,在標(biāo)準(zhǔn)條件下考察了暴露120min、240min的失水率,結(jié)果表明,在標(biāo)準(zhǔn)條件下,暴露120min的90mm平皿TSA培養(yǎng)基能保證各實(shí)驗(yàn)菌種培養(yǎng)霉要。
[關(guān)鍵詞]沉降菌;放置時(shí)間;失永率
[中圖分類(lèi)號(hào)]TQ460.8 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]A [文章編號(hào)]2096-5249(2019)06-0296-01
《中國(guó)藥典》2015年版四部通則1100中要求無(wú)菌檢查的試驗(yàn)環(huán)境必須達(dá)到無(wú)菌檢查的要求。日常檢驗(yàn)需要對(duì)試驗(yàn)環(huán)境沉降菌進(jìn)行監(jiān)控?!吨袊?guó)藥典》2015年版指導(dǎo)原則9205藥品潔凈實(shí)驗(yàn)室微生物監(jiān)測(cè)和控制指導(dǎo)原則中表4注:各潔凈級(jí)別環(huán)境微生物監(jiān)測(cè)的動(dòng)態(tài)標(biāo)準(zhǔn)的注解要求表中各數(shù)值均為平均值,根據(jù)EUGMP和FDA指南,A級(jí)潔凈區(qū)空氣氣流形式是層流,監(jiān)測(cè)碟的結(jié)果直接反映垂直上方的空氣質(zhì)量。所以A級(jí)區(qū)應(yīng)該在原始記錄體現(xiàn)每個(gè)監(jiān)控碟的原始結(jié)果,最后以平均值報(bào)告這個(gè)區(qū)域的監(jiān)測(cè)結(jié)果。但任何一個(gè)監(jiān)測(cè)碟中發(fā)現(xiàn)微生物都應(yīng)該調(diào)查原因。
《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范(2010年修訂版)》中規(guī)定動(dòng)態(tài)沉降菌監(jiān)測(cè)時(shí)間為4h,但單個(gè)培養(yǎng)皿暴露時(shí)間可以小于4h。中國(guó)藥典2015年版指導(dǎo)原則9205藥品潔凈實(shí)驗(yàn)室微生物監(jiān)測(cè)和控制指導(dǎo)原則中也規(guī)定單個(gè)沉降碟的暴露時(shí)間可以少于4小時(shí)。培養(yǎng)基適用性試驗(yàn)合格的沉降菌試驗(yàn)用培養(yǎng)基在監(jiān)測(cè)時(shí)有三個(gè)關(guān)鍵點(diǎn):培養(yǎng)基回收率、培養(yǎng)基含水量、培養(yǎng)基放置時(shí)間。我們知道一定條件下回收率和含水量呈正比關(guān)系,而含水量與培養(yǎng)基放置時(shí)間呈反比關(guān)系。
1沉降菌監(jiān)測(cè)(培養(yǎng)基放置)時(shí)間確定原則
1.1潔凈區(qū)環(huán)境(風(fēng)速、溫度及相對(duì)濕度)
無(wú)菌檢查所在區(qū)域?yàn)锳級(jí)潔凈區(qū),A級(jí)潔凈區(qū)風(fēng)速為0.36-0.54m/s,溫度一般控制在18-26℃,相對(duì)濕度在45%-65%。我們未挑戰(zhàn)極限條件,選擇標(biāo)準(zhǔn)條件:溫度24℃,相對(duì)濕度55%,風(fēng)速0.45.m/s。
1.2培養(yǎng)基的選擇
中國(guó)藥典2015年版規(guī)定:如果培養(yǎng)基不能終端滅菌,在使用前應(yīng)進(jìn)行100%的預(yù)培養(yǎng)。所以我們沉降菌監(jiān)測(cè)時(shí),使用的為用外購(gòu)培養(yǎng)基干粉自制90mm平皿培養(yǎng)基,培養(yǎng)基為T(mén)SA,灌注量為20ml。市售培養(yǎng)基很多,我們選擇一個(gè)品牌培養(yǎng)基干粉,自制平皿培養(yǎng)基預(yù)培養(yǎng)后進(jìn)行試驗(yàn)。
2試驗(yàn)材料
2.1材料
TSA培養(yǎng)基(批號(hào):160322北京陸橋技術(shù)有限責(zé)任公司)、溫濕度記錄儀、萬(wàn)分之一電子天平、刻度吸管等。
2.2失水率測(cè)定方法
在沉降菌監(jiān)測(cè)時(shí),培養(yǎng)基暴露于空氣中,水分不斷蒸發(fā)流失。沉降菌監(jiān)測(cè)培養(yǎng)基必須維持足夠水分,培養(yǎng)基水分低于一定限度,回收率無(wú)法實(shí)現(xiàn)。為了考察暴露時(shí)間與失水率的關(guān)系,對(duì)暴露不同時(shí)間的沉降碟測(cè)量重量變化情況,以估計(jì)其失水率情況。
在A級(jí)區(qū)域送風(fēng)風(fēng)速調(diào)節(jié)0.45.m/s,待風(fēng)速和溫濕度平衡。將90mm自制平皿培養(yǎng)基,共4塊,測(cè)定前用精確到0.01g的電子天平分別稱(chēng)重,后均勻鋪設(shè)在層流下方操作臺(tái)表面,打開(kāi)各個(gè)碟蓋,按沉降菌監(jiān)測(cè)方法操作,開(kāi)始計(jì)時(shí)。分別在第120分鐘、240分鐘將沉降碟各取出2塊,加蓋,用精確到0.01g的電子天平稱(chēng)重,后將各沉降碟培養(yǎng)基挖出,用精確到0.01g的電子天平稱(chēng)重,計(jì)算不同暴露時(shí)間的沉降碟的失水率。
3失水率測(cè)定結(jié)果
試驗(yàn)溫度24℃,相對(duì)濕度55%,暴露120min失水率達(dá)到9.76%,在暴露240min時(shí)失水率超過(guò)30%達(dá)到33.99%。
4本試驗(yàn)考察了沉降菌檢測(cè)試驗(yàn)過(guò)程中。某品牌培養(yǎng)基自制平皿培養(yǎng)基失水率與暴露時(shí)間的關(guān)系。
本試驗(yàn)采用的環(huán)境為模擬標(biāo)準(zhǔn)條件,暴露120min培養(yǎng)基失水近10%,能夠滿(mǎn)足沉降菌培養(yǎng)的需要??紤]失水率還與培養(yǎng)基品牌,溫濕度,風(fēng)速等條件有關(guān),每2h以?xún)?nèi)更換動(dòng)態(tài)沉降菌監(jiān)測(cè)培養(yǎng)皿能夠滿(mǎn)足環(huán)境監(jiān)測(cè)需要。以平均值報(bào)告A級(jí)區(qū)域的監(jiān)測(cè)結(jié)果。但任何一個(gè)監(jiān)測(cè)碟中發(fā)現(xiàn)微生物都應(yīng)該調(diào)查原因。