曹麗娟，姜恒麗，張 旭，屈文佳，耿曉康，李向日*

(1.盛實(shí)百草藥業(yè)有限公司，天津市中藥飲片炮制技術(shù)企業(yè)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，天津 300301； 2.北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院，北京 102488)

人參為五加科植物人參(PanaxginsengC A Mey)的干燥根和根莖。人參大補(bǔ)元?dú)?，?fù)脈固脫，補(bǔ)脾益肺，生津養(yǎng)血，安神益智，功能顯著，用于體虛欲脫，肢冷脈微，脾虛食少，肺虛喘咳，津傷口渴，內(nèi)熱消渴，氣血虧虛，久病虛羸，驚悸失眠，陽痿宮冷[1]。明代名醫(yī)張景岳將人參與附子、地黃、大黃列為藥中四維，藥中四維者，乃治病保命之要藥也。其作為傳統(tǒng)中藥材，已有數(shù)千年的歷史，在世界各國得到廣泛的應(yīng)用。人參在歷版《中國藥典》中均有收載，此外，在《美國藥典》、《歐洲藥典》、《日本藥局方》中也有收載。人參的含量測定一般以其主要活性成分人參皂苷為分析指標(biāo)，主要有人參皂苷Rb1、Rg1、Re等。

作者在長期的研究和生產(chǎn)實(shí)踐中發(fā)現(xiàn)，在按照《中國藥典》(2015年版)方法對人參進(jìn)行含量檢測時，指標(biāo)成分人參皂苷Rb1含量合格率低。與此同時，由于企業(yè)人參大量出口日本，在按照《日本藥局方》(第17版)方法檢測人參含量時，發(fā)現(xiàn)人參皂苷Rb1含量合格率很高。在上述基礎(chǔ)上，同時選取國際具有代表性的《美國藥典》及《歐洲藥典》進(jìn)行比較研究?！睹绹幍洹?、《歐洲藥典》、《日本藥局方》是世界主要藥典，應(yīng)用地區(qū)廣泛，影響力大，建立的檢測方法水平較高。本文主要比較了中、美、歐、日4種藥典人參檢測前處理方法及分析方法對人參皂苷類成分Rb1和Rg1的影響。為人參含量測定方法的優(yōu)化奠定基礎(chǔ)，也為人參質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的完善提供參考。如何更合理、科學(xué)地制定人參的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，既可以提高國內(nèi)參類產(chǎn)品的技術(shù)水平，又能夠參與國際市場競爭，加速國內(nèi)參類產(chǎn)品進(jìn)入國際市場，是值得認(rèn)真考慮的問題。

1 儀器與試藥

1.1儀器 Agilent Technology 1260 Series 高效液相色譜儀；色譜柱：YMC-Park ODS-A(150 mm×4.6 mm，5 μm)，《中國藥典》(2015年版)；YMC-Park ODS-A(150 mm×4.6 mm，5 μm)，《美國藥典》(第40版)；TSK-GEL ODS-80TS(250 mm×4.6 mm，5 μm)，《歐洲藥典》(9.0版本)；YMC-Park ODS-A(150 mm×4.6 mm，5 μm)、TSK-ODS-80TS(150 mm×4.6 mm，5 μm)，《日本藥局方》(第17版)；Agilent ChemStation 化學(xué)工作站(美國Agilent公司)。

1.2試藥 《中國藥典》對照品：人參皂苷Rb1(批號110704-201726，質(zhì)量分?jǐn)?shù)：91.1%)、人參皂苷Re(批號110754-281626，質(zhì)量分?jǐn)?shù)：97.4%)、人參皂苷Rg1(批號110703-281731，質(zhì)量分?jǐn)?shù)：93.6%)，均由中國食品藥品檢定研究院提供?！度毡舅幘址健穼φ掌罚喝藚⒃碥誖b1(批號Rb1007，質(zhì)量分?jǐn)?shù)：91.59%)、人參皂苷Re(批號GRE006，質(zhì)量分?jǐn)?shù)：100%)、人參皂苷Rg1(批號Rg1003，質(zhì)量分?jǐn)?shù)：93.26%)，均由津村株式會社提供。人參(批號A1800290、A1800450、A1800640、C-JH-103、C-JH-112、C-JH-113、C-JH-166、C-JH-117，產(chǎn)地：吉林，白山林村中藥開發(fā)有限公司)，經(jīng)北京中醫(yī)藥大學(xué)李向日教授鑒定為五加科人參PanaxginsengC A Meg。乙腈為色譜純(Merck)，水為雙蒸水，其余試劑均為分析純。

2 藥典方法比較分析

2.1中、美、歐、日4種藥典供試品制備方法比較 中、美、歐、日4種藥典中，人參含量檢測過程中供試品制備方法如表1所示。各國藥典的供試品前處理過程在提取溶劑、具體處理過程中存在一定的差異。從表中可以看出，對提取時效進(jìn)行分析，《日本藥局方》最高，《中國藥典》次之，《美國藥典》和《歐洲藥典》中減壓干燥操作較為耗時，提取效率最低。對提取試劑進(jìn)行分析，《美國藥典》僅使用乙醇作為提取溶劑，最為環(huán)保。對提取設(shè)備進(jìn)行分析，《日本藥局方》僅使用振蕩機(jī)、離心機(jī)，操作簡單，可同時提取多批樣品，《美國藥典》、《歐洲藥典》使用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，多批次同時提取時需多臺設(shè)備，成本較高。對提取原理進(jìn)行分析，《中國藥典》方法除雜效果最好，《日本藥局方》對人參皂苷Rb1的提取率較高。

表1 中、美、歐、日4種藥典供試品制備方法

2.2中、美、歐、日4種藥典對照品制備方法比較 中、美、歐、日4種藥典中，人參含量檢測過程中對照品制備方法如表2所示?！吨袊幍洹?2015版)中對照品人參皂苷Rg1、Re、Rb1各為0.2 mg/ml；《美國藥典》(第40版)中對照品人參皂苷Rg1為0.2 mg/ml；《歐洲藥典》(9.0版本)中對照品人參皂苷Rg1、Re、Rf、Rb1為0.3 mg/ml；《日本藥局方》(第17版)中對照品人參皂苷Rg1、Rb1為0.1 mg/ml。

表2 中、美、歐、日4種藥典對照品制備方法

2.3中、美、歐、日4種藥典色譜分析條件對比 中、美、歐、日4種藥典中，主要是流動相、洗脫條件等方面存在差異，檢測波長一致，均為203 nm。4種藥典人參含量檢測色譜分析條件如下。

2.3.1《中國藥典》(2015年版)色譜分析條件 流動相A為乙腈、B為水，梯度洗脫，洗脫條件見表3。檢測波長為203 nm。理論板數(shù)按人參皂苷Rg1峰計(jì)算應(yīng)不低于6 000。分別精密吸取對照品溶液10 μl與供試品溶液10～20 μl，注入液相色譜儀，測定，即得。

表3 《中國藥典》(2015年版)梯度洗脫條件

2.3.2《美國藥典》(第40版)色譜分析條件 流動相A為水、B為乙腈-水(4∶1)，梯度洗脫，洗脫條件見表4。流速：1.5 ml/min，柱溫：25 ℃，檢測波長為203 nm。系統(tǒng)適用性應(yīng)符合要求。分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10 μl,注入液相色譜儀，測定，即得。

表4 《美國藥典》(第40版)梯度洗脫條件

2.3.3《歐洲藥典》(9.0版)色譜分析條件 流動相A為調(diào)pH至2的磷酸溶液、B為乙腈，梯度洗脫，洗脫條件見表5。流速：1.0 ml/min，柱溫：35 ℃，檢測波長為203 nm。系統(tǒng)適用性：對照溶液人參皂苷Rg1與人參皂苷Re分離度≥1.0。分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20 μl,注入液相色譜儀，測定，即得。

表5 《歐洲藥典》(9.0版)梯度洗脫條件

2.3.4《日本藥局方》(第17版)色譜分析條件

2.3.4.1人參皂苷Rg1流動相：水-乙腈(4∶1)，流速：自行調(diào)整至人參皂苷Rg1保留時間為25 min左右，柱溫：30 ℃，檢測波長為203 nm。系統(tǒng)性能：分別取1 mg人參皂苷Rg1對照品與人參皂苷Re對照品，用稀甲醇(3∶5)溶解并定容至10 ml。在上述條件以對照品溶液10 μl進(jìn)樣，人參皂苷Rg1與人參皂苷Re的分離度不得低于1.5。系統(tǒng)重復(fù)性：RSD≤1.5%。

2.3.4.2人參皂苷Rb1流動相：水-乙腈(7∶3)，流速：自行調(diào)整至人參皂苷Rb1保留時間為20 min左右，柱溫：40 ℃，檢測波長為203 nm。系統(tǒng)性能：分別取1 mg人參皂苷Rb1對照品與人參皂苷Re對照品，用稀甲醇(3∶5)溶解并定容至10 ml。在上述條件以對照品溶液10 μl進(jìn)樣，人參皂苷Rb1與人參皂苷Re的分離度不得低于3。系統(tǒng)重復(fù)性：RSD≤1.5%。分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10 μl，注入液相色譜儀，測定，即得。

2.4中、美、歐、日4種藥典人參含量限定標(biāo)準(zhǔn)比較 中、美、歐、日4種藥典對人參含量的限定標(biāo)準(zhǔn)要求如表6所示。各國藥典雖然對人參含量限值標(biāo)準(zhǔn)要求有所區(qū)別，但是集中體現(xiàn)在對人參皂苷Rb1、人參皂苷Rg1提出要求，《中國藥典》對人參皂苷Re也提出了要求。

表6 中、美、歐、日4種藥典人參含量限定標(biāo)準(zhǔn)比較

3 方法與結(jié)果

3.1供試品處理方法對人參含量指標(biāo)的影響

3.1.1方法 選取3批次人參樣品(A1800290、A1800450、A1800640)，對照品溶液按照《中國藥典》(2015年版)中要求進(jìn)行制備，供試品處理方法分別依照中、美、歐、日4種藥典要求，檢測時按照《中國藥典》色譜分析條件進(jìn)行，收集試驗(yàn)數(shù)據(jù)。

3.1.2結(jié)果及分析 采用《中國藥典》對照品及分析方法，按照中、美、歐、日4種藥典的供試品處理方法后檢測得到的人參含量指標(biāo)情況如表7所示。人參皂苷Rg1含量結(jié)果差異不明顯，而人參皂苷Rb1含量差異較大，日本方法檢出含量相對較高，其他3國相近?？梢钥闯鋈藚⒃碥誖b1檢出高低，在一定程度上受前處理方法影響比較明顯，《日本藥局方》前處理方法操作簡單省時，檢出Rb1含量高。Rg1和Re的分離度為2.79，Rb1和Re分離度32.85，均符合要求。

表7 供試品處理方法對人參百分含量指標(biāo)的影響(n=3)

3.2中、日對照品差異對人參含量指標(biāo)的影響

3.2.1方法 選取3批次人參樣品(A1800290、A1800450、A1800640)，選用中國食品藥品檢定研究院及日本津村株式會社提供的人參皂苷Rb1、人參皂苷Re、人參皂苷Rg1對照品，按照《日本藥局方》(第17版)要求進(jìn)行供試品溶液制備，并按其色譜條件進(jìn)行檢測。收集試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行比較分析。

3.2.2結(jié)果及分析 對照品差異對人參含量指標(biāo)的影響結(jié)果如表8所示。3個批次同一樣品分別采用中國食品藥品檢定研究院以及日本津村株式會社提供的人參皂苷對照品，按照《日本藥局方》方法制備供試品溶液以及進(jìn)行分析檢測，發(fā)現(xiàn)人參皂苷Rb1及Rg1結(jié)果差異都不大。供試品制備方法及檢測方法相同時，不同權(quán)威機(jī)構(gòu)提供的對照品對人參含量測定結(jié)果影響不明顯。

表8 對照品差異對人參百分含量指標(biāo)的影響(n=3)

3.3不同藥典檢測方法對人參含量指標(biāo)的影響

3.3.1方法 選取上述3批次人參樣品(A1800290、A1800450、A1800640)，選用中國食品藥品檢定研究院及日本津村株式會社提供的人參皂苷Rb1、人參皂苷Re、人參皂苷Rg1對照品，分別按照中、美、歐、日4種藥典要求制備供試品溶液及按照4種藥典色譜分析條件進(jìn)行檢測，收集試驗(yàn)數(shù)據(jù)。選取5批次人參樣品(C-JH-103、C-JH-112、C-JH-113、C-JH-166、C-JH-117)，統(tǒng)一選用中國食品藥品檢定研究院提供的對照品，分別按照中、美、歐、日4種藥典要求制備供試品溶液并分別按照上述藥典色譜分析條件進(jìn)行檢測，收集試驗(yàn)數(shù)據(jù)，通過上述數(shù)據(jù)對中、美、歐、日的分析方法對人參含量結(jié)果影響進(jìn)行重復(fù)驗(yàn)證。

3.3.2結(jié)果及分析 按照中、美、歐、日4種藥典前處理方法及分析方法檢測8批次人參各含量指標(biāo)，結(jié)果如表9所示。人參皂苷Rb1，日本方法檢出含量最高，其余3國差異不明顯；人參皂苷Rg1，日本、歐洲方法檢出含量偏高，中國、美國方法次之。人參皂苷Rb1含量檢測結(jié)果趨勢與單獨(dú)考查4國藥典前處理方法時結(jié)果趨勢具有一定相似性，分析推測不同藥典檢測方法對人參皂苷Rb1含量檢出高低的影響以前處理方法影響最為明顯。各國方法分離度均符合要求。

表9 不同藥典檢測方法對人參百分含量指標(biāo)的影響(n=8)

4 小結(jié)

人參作為最常用的中藥滋補(bǔ)品之一，幾十年來，對其質(zhì)量控制方法的研究從未停止過。本文比較分析了《中國藥典》(2015年版)、《美國藥典》(第40版)、《歐洲藥典》(9.0版本)及《日本藥局方》(第17版)中人參含量檢測方法的異同點(diǎn)，重點(diǎn)開展試驗(yàn)考查中、美、歐、日4種藥典前處理方法、中日對照品及中、美、歐、日4種藥典分析方法對人參含量的影響。結(jié)果表明，4種測定方法均能很好地對3種皂苷成分進(jìn)行提取和測定，但在人參含量檢測過程中，前處理方法對人參含量指標(biāo)影響明顯，4國藥典前處理方法各有優(yōu)勢，《中國藥典》方法除雜效果好，《美國藥典》方法最為環(huán)保，《日本藥局方》成本最低，使用有毒試劑較少，且人參皂苷Rg1、Rb1的提取率高，為后期人參含量標(biāo)準(zhǔn)提升提供一定的參考。