孫玥，蘇京平，王勝軍，閆雙勇，孫林靜

文章編號： 1005-2690（2019）12-0026-02 ? ? ? 中圖分類號： S336 ? ? ? 文獻標(biāo)志碼： B

摘 ? 要：ISSR分子標(biāo)記是目前生物標(biāo)記上新型的標(biāo)記技術(shù)模式，通過引用設(shè)計簡單的SSR技術(shù)，按照兩端堿基礎(chǔ)序列，實施高重復(fù)性操作，完成多信息的綜合重組。在作物的種植鑒定、遺傳定位、多樣性區(qū)分上具有良好的標(biāo)記作用，可以實現(xiàn)多態(tài)化的操作。針對ISSR分子標(biāo)記技術(shù)的相關(guān)特點進行了分析，研究作物實驗操作上，通過遺傳育種技術(shù)領(lǐng)域的操作，完成作物遺傳育種的整體應(yīng)用操作過程。

關(guān)鍵詞：ISSR分子標(biāo)記;遺傳作物;育種;應(yīng)用

通過SSR技術(shù)標(biāo)記，對衛(wèi)星序列兩側(cè)的保守序列進行引物設(shè)計分析，完成PCR擴容和衛(wèi)星序列的增序操作。通過SSR序列的拷貝，可以重點分析其中的差異，依照技術(shù)的穩(wěn)定和重復(fù)情況，分析遺傳種質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)，明確SSR技術(shù)兩側(cè)引物的操作和特異性，依照引物設(shè)計費用消耗比例關(guān)系，分析一定程度上技術(shù)的廣泛應(yīng)用。

1 ? ISSR技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)特點分析

ISSR技術(shù)是以多分子標(biāo)記為基礎(chǔ)，通過組建內(nèi)的擴容，實現(xiàn)微衛(wèi)星序列的單一設(shè)計操作。依據(jù)兩側(cè)的反向序列對DNA進行SSR排列，完成單引物的擴增。通過染色體、色譜、色帶電泳等相對位置，判斷相同ISSR品間標(biāo)記下的多態(tài)數(shù)據(jù)內(nèi)容;通過ISSR的堿基數(shù)據(jù)引物操作分析，判斷串聯(lián)重復(fù)組建序列下的組成標(biāo)準(zhǔn)。按照3端、5端的錨定位堿基分析，確保ISSR引物下SSR的DNA數(shù)據(jù)序列擴增水平;通過衛(wèi)星基因的增效分布判斷，對燈位變異狀態(tài)進行分析，明確ISSR技術(shù)檢測的多態(tài)性操作;通過物種的特異性判斷，將ISSR、SSR進行特異性的研究;通過與動植物等各類基因的對比分析，可以從不同角度進行設(shè)計要求分析，判斷產(chǎn)物的多態(tài)水平，提供必要的基因組數(shù)據(jù)信息。

2 ? ISSR作物遺傳育種標(biāo)記上的作用分析

依照國際上的先進技術(shù)，通過組建分析獲取更加便捷、快速的多態(tài)性數(shù)據(jù)分析。通過對小麥的作圖分析、定位基因判斷、多樣遺傳分配等確定多方面的廣泛應(yīng)用操作模式。

2.1 ? 遺傳作圖數(shù)據(jù)分析

ISSR標(biāo)記中包含高度多態(tài)模式的整體基因組操作過程。根據(jù)有效繪制遺傳連圖操作，確定ISSR標(biāo)記下的小麥遺傳作圖數(shù)據(jù)。根據(jù)相關(guān)操作結(jié)果，對ISSR數(shù)據(jù)圖進行標(biāo)記，確定整體分布下的染色體組成過程。按照圖位置與之處理，明確標(biāo)記的區(qū)域范圍。分析飽和度的增加情況水平，通過分子標(biāo)記組建進行縮小，調(diào)整遺傳作圖數(shù)據(jù)的分析過程。

2.2 ? 基因的定位數(shù)據(jù)分析

按照ISSR標(biāo)記數(shù)據(jù)作物，對基因進行定位，明確小麥、水稻的標(biāo)記過程。分析與小麥之間的分子標(biāo)記，完成與小麥種子之間的連鎖操作。通過大種子之間的連鎖標(biāo)記，確定組建尋找控制的連鎖型模式。通過引物、定位完成數(shù)據(jù)基因的恢復(fù)操作。按照恢復(fù)基因的連鎖定位，落實在1B染色體上。依照ISSR引物定位的T型模式，逐步恢復(fù)系列因素;按照標(biāo)記小麥的T連鎖狀態(tài)后才能對細胞質(zhì)基因的連鎖處理，控制遺傳基因的距離范圍。通過輪回本位分析，判斷相關(guān)基因下的數(shù)據(jù)分析，發(fā)現(xiàn)基因連鎖下的ISSR標(biāo)記過程。依照細胞質(zhì)不育與之強化恢復(fù)系列的配組操作，通過不同群體的恢復(fù)性定位群體判斷。使用ISSR引物，完成恢復(fù)基因的定位連鎖分析，表明數(shù)據(jù)緊縮的連續(xù)性，確定交換律和成圖距離范圍。

2.3 ? 中間種質(zhì)數(shù)據(jù)資源的分析

按照ISSR數(shù)據(jù)的高度應(yīng)用多態(tài)標(biāo)準(zhǔn)，以準(zhǔn)確高效地鑒別數(shù)據(jù)等位分析，通過區(qū)別不同物種的基因，判斷在引物狀態(tài)下的多倍體小麥品種擴增情況。通過引物可以清晰地觀察其譜帶情況。按照ISSR數(shù)據(jù)的對比信息分析，判斷譜帶的多態(tài)程度，分析標(biāo)記多態(tài)性能的估測。按照小麥品種間的親緣關(guān)系，通過標(biāo)記確定結(jié)果的一致性[1]。根據(jù)標(biāo)記構(gòu)建，明確小麥品種體系的圖譜。通過使用PAPD進行對比分析，發(fā)現(xiàn)數(shù)據(jù)中二核苷酸的重復(fù)引物類型，分析親緣關(guān)系，確定品系間的分別。

通過引入的供試小麥品種，采用明顯區(qū)分的操作方法，對各個基因之間的遺傳差異、親緣關(guān)系進行判斷。依照具體的ISSR分子，合理標(biāo)記小麥雜種的劃分優(yōu)勢，確定結(jié)論關(guān)系。按照具體的作物數(shù)據(jù)分析，通過ISSR標(biāo)記完成品種遺傳差異的數(shù)據(jù)效果分析。根據(jù)作物的多樣性，及時檢查ISSR數(shù)據(jù)分析標(biāo)記的栽培過程。

依據(jù)結(jié)果的ISSR引物判斷，確定擴增的多態(tài)鏈條模式，根據(jù)每一個引物的平均擴增標(biāo)準(zhǔn)，明確多態(tài)性鏈條的模式。擴增產(chǎn)物中，需要根據(jù)大小進行區(qū)間分析，按照普通化的栽培遺傳關(guān)系親密度，判斷野生稻之間的親緣關(guān)系水平。通過聚類標(biāo)準(zhǔn)分析，明確栽培野生稻的顯示分組關(guān)系。按照標(biāo)準(zhǔn)建立水稻光溫度敏感不育體系的核算圖譜。利用ISSR引物完成引物檢測分析，通過多態(tài)形式的數(shù)據(jù)分析，判斷ISSR引物檢測的比例關(guān)系，完成更多大段的數(shù)據(jù)分配，確定聚合類型。通過材料確定聚合形式，按照不育體系標(biāo)準(zhǔn)，分析顯示的亞類群，將衍生的不育體系聚集在一起。通過遺傳差異的數(shù)據(jù)分析，判斷總體計算遺傳距離內(nèi)容。根據(jù)收到的數(shù)據(jù)模式，分析多態(tài)下的狀況水平[2]，完成多態(tài)ISSR數(shù)據(jù)標(biāo)記。利用ISSR標(biāo)記、PAPD標(biāo)記，完成組建多栽培品種的遺傳多樣數(shù)據(jù)分析。通過品類數(shù)據(jù)分析，判斷現(xiàn)骨干多態(tài)性帶因素。結(jié)合2種標(biāo)記，完成聚合類物質(zhì)的研究、供貨引物操作類別的區(qū)分。

3 ? ISSR體系作物的鑒定應(yīng)用分析

ISSR是按照準(zhǔn)確的聚合酶鏈接反應(yīng)操作完成分子標(biāo)記。通過檢查各類因素的影響情況，判斷其反應(yīng)體系和建設(shè)程序流程。依照鑒定的通用反應(yīng)水平體系，分析擴增程序流程。充分利用擴增標(biāo)準(zhǔn)穩(wěn)定性，判斷ISSR快速標(biāo)記下的作物品鑒視頻，明確ISSR技術(shù)反應(yīng)體系和反作用程度特異性。依照ISSR分子反應(yīng)程序進行優(yōu)化，明確不同作物的優(yōu)化建設(shè)模式，獲取ISSR反應(yīng)體系完成鑒定分析效果的準(zhǔn)確判斷。

3.1 ? 試驗分析

選取小麥、棉花、水稻、玉米、煙草等品種進行試驗分析。采用聚合酶蛋白下DNA數(shù)據(jù)標(biāo)記的模式，分析測定其濃度和質(zhì)量水平。

3.1.1 ? ISSR數(shù)據(jù)反映優(yōu)化

按照ISSR數(shù)據(jù)反映優(yōu)化體系，對名稱、序列信息進行調(diào)整，記錄ISSR反映優(yōu)化的過程，分析聚合酶DNA以判斷數(shù)據(jù)水平，結(jié)合相關(guān)組合完成數(shù)據(jù)優(yōu)化的測試分析。記錄PCR反映程序，通過對溫度、擴增循環(huán)數(shù)的組合分析，調(diào)整擴增譜帶內(nèi)容。按照火溫梯度試驗水平進行判斷，明確反映下的測算。通過分析混合擴容增產(chǎn)物，按照瓊脂糖凝膠染色，通過凝膠圖像數(shù)據(jù)，檢測拍圖，判斷PCR反應(yīng)試劑情況[3]。通過聚合酶的合生分析，判斷優(yōu)化方式。

3.1.2 ? 反應(yīng)穩(wěn)定檢驗物品鑒定分析

依照不同的作物，分析優(yōu)化適應(yīng)的PCR體系模式。通過利用反應(yīng)體系確定擴增、篩選多態(tài)的引物品種，完成數(shù)據(jù)的鑒定分析。

3.2 ? 結(jié)果分析

ISSR檢驗結(jié)果顯示，不同作物的PCR反應(yīng)不同。根據(jù)擴增結(jié)果判斷電泳，明確DNA測定的保準(zhǔn)。通過準(zhǔn)確的反應(yīng)體系逐步增容擴效，優(yōu)化適應(yīng)ISSR反應(yīng)體系。退火穩(wěn)度不同，擴增譜帶、清晰度不同。在低溫退火下，調(diào)整拖尾和彌散的情況下。在高溫退火下，調(diào)整穩(wěn)定條帶關(guān)系，逐步減少確定最佳的溫度范圍。

3.2.1 ? 煙草鑒定結(jié)果分析

通過利用ISSR體系，對煙草的生物體系進行鑒定，確定PCR穩(wěn)定反應(yīng)。其中有16條ISSR增擴容達65條，平均引物為4.1條。其中有30條多態(tài)條帶，多臺比率為46%。通過引物可以鑒別出品類。

3.2.2 ? 小麥鑒定結(jié)果分析

通過ISSR對反應(yīng)體系進行鑒定，判斷相關(guān)反應(yīng)體系下的穩(wěn)定性。按照擴增產(chǎn)物大小，判斷間值，明確譜帶范圍。根據(jù)多態(tài)磁條情況，分析每條ISSR引物擴增條目，確定引物標(biāo)準(zhǔn)。

3.2.3 ? 水稻鑒定結(jié)果分析

依照100條ISSR引物所篩選出的多態(tài)性水稻品種進行鑒定，其中有17條多態(tài)引物，共產(chǎn)生98條譜帶，平均每條5.76。按照引條完成組合分析，判斷帶型，明確鑒別的型號和標(biāo)準(zhǔn)，完成組建品類的分析。

3.2.4 ? 玉米鑒定結(jié)果分析

共5條多態(tài)ISSR引物，且共增擴出48條譜帶，平均引物為9.6條。按照擴增的大小進行分析，確定48條譜帶中有40條多態(tài)譜帶，多態(tài)比率為83%。通過對引腳擴增的多態(tài)進行目標(biāo)分析，確定3條引物組合，最終鑒定分析玉米的品種。

3.2.5 ? 棉花鑒定結(jié)果分析

按照棉花最適應(yīng)的反應(yīng)體系，分析優(yōu)化棉花的最佳標(biāo)準(zhǔn)。依照ISSR引物，分析棉花的PCR擴增比例關(guān)系，確定體系的穩(wěn)定性。通過試驗結(jié)果的優(yōu)化，加強對反應(yīng)體系下不同棉花品種的分析，適應(yīng)不同的ISSR引物操作。按照ISSR組合引物，調(diào)整棉花的品類鑒定過程，明確棉花的最佳品類。

3.3 ? PCR反應(yīng)體系的優(yōu)化分配

按照ISSR數(shù)據(jù)分析標(biāo)記，判斷遺傳多樣圖譜數(shù)據(jù)內(nèi)容。通過資源信息的收集，對ISSR進行鑒定分配，調(diào)整擴增的比例關(guān)系。通過用量數(shù)據(jù)分析，判斷聚合酶的用量特異性。分析電泳圖譜的比例關(guān)系，判別合成速率和產(chǎn)量關(guān)系。對比DNA聚合酶活性，控制濃度標(biāo)準(zhǔn)水

綜上所述，ISSR技術(shù)是一項快速、準(zhǔn)確、多態(tài)的分子標(biāo)記操作方法。通過大規(guī)模的數(shù)據(jù)基因分析，按照指紋數(shù)據(jù)、遺傳數(shù)據(jù)、基因定位數(shù)據(jù)等模式的判斷，從物種遺傳學(xué)角度，分析相關(guān)的整體作用發(fā)揮水平，判斷其實際的作用標(biāo)準(zhǔn)和應(yīng)用價值意義，滿足現(xiàn)代基因數(shù)據(jù)種植標(biāo)記分析的研究需求。

參考文獻：

[ 1 ] 孫洪，程靜，詹克慧，等.ISSR標(biāo)記技術(shù)及其在作物遺傳育種中的應(yīng)用[J].分子植物育種，2005（1）.

[ 2 ] 林志坤，孫威江，陳志丹，等.ISSR分子標(biāo)記技術(shù)及其在茶樹研究中的應(yīng)用[J].廣東農(nóng)業(yè)科學(xué)，2014（9）.

[ 3 ] 白成科，文苗苗，于鳳，等.基于ISSR分子標(biāo)記技術(shù)構(gòu)建黃芩核心種質(zhì)的方法研究[J].中藥材，2010（11）.