王莎莎 曲悅 薛大權(quán) 李蘭清 向陽(yáng) 張寶徽

中圖分類號(hào) R282 文獻(xiàn)標(biāo)志碼 A 文章編號(hào) 1001-0408（2019）17-2379-05

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2019.17.15

摘 要 目的：為完善和提高地龍藥材的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供參考。方法：采用高效液相色譜（HPLC）法測(cè)定藥材樣品中次黃嘌呤、肌苷的含量，同時(shí)按“中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)”（2012版）軟件建立地龍藥材的HPLC指紋圖譜并進(jìn)行相似度評(píng)價(jià)。色譜柱為Purospher STAR RP-18 endcapped;流動(dòng)相為甲醇-水（梯度洗脫）;流速為1 mL/min;檢測(cè)波長(zhǎng)為248 nm;柱溫為30 ℃;進(jìn)樣量為20 μL。結(jié)果：含量測(cè)定方法學(xué)考察結(jié)果顯示，次黃嘌呤、肌苷的檢測(cè)質(zhì)量濃度線性范圍分別為1.58～31.6 μg/mL（r=0.999 9）、5.52～110.4 μg/mL（r=0.999 8）;定量限分別為0.316、0.552 μg/mL;檢測(cè)限分別為0.158、0.110 μg/mL;精密度、穩(wěn)定性（24 h）、重復(fù)性試驗(yàn)的RSD均小于2.0%（n=6）;平均回收率分別為103.0%（RSD=1.7%，n=6）、101.2%（RSD=1.2%，n=6）。成功建立了15批樣品的HPLC指紋圖譜，共確定了8個(gè)共有色譜峰。其中有14批樣品的HPLC指紋圖譜與對(duì)照?qǐng)D譜R的相似度>0.900。結(jié)論：建立的次黃嘌呤、肌苷含量測(cè)定及地龍藥材HPLC指紋圖譜方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，可用于地龍藥材的質(zhì)量控制。

關(guān)鍵詞 地龍;次黃嘌呤;肌苷;高效液相色譜法;指紋圖譜;質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

Study on Quality Standard Improvement of Pheretima

WANG Shasha1，QU Yue1，XUE Daquan1，LI Lanqing1，XIANG Yang2，ZHANG Baohui1（1.School of Pharmacy， Hubei University of TCM， Wuhan 430065， China;2.Jianmin Pharmaceutical Group Co.， Ltd.， Wuhan 430050， China）

ABSTRACT OBJECTIVE： To provide reference for improving the quality standard of Pheretima. METHODS： The contents of hypoxanthine and inosine in medicinal material samples were determined by HPLC. HPLC fingerprint of Pheretima was established according to “Similarity evaluation system for TCM chromatogramtic fingerprint” （2012 edition） software， and similarity evaluation was conducted. The determination was performed on Purospher STAR RP-18 endcapped with mobile phase consisted of methanol-water （gradient elution） at the flow rate of 1 mL/min. The detection wavelength was 248 nm， and the column temperature was set at 30 ℃. The sample size was 20 μL. RESULTS： The results of methodological investigation of content determination showed that the linear range of hypoxanthine and inosine were 1.58-31.6 μg/mL （r=0.999 9）， 5.52-110.4 μg/mL（r=0.999 8）， respectively. limits of quantify were 0.316， 0.552 μg/mL， respectively; limits of detection were 0.158， 0.110 μg/mL， respectively; RSDs of precision， stability （24 h） and repeatability tests were all less than 2.0% （n=6）. Average recovery rates were 103.0% （RSD=1.7%， n=6） and 101.2% （RSD=1.2%， n=6）， respectively. HPLC fingerprint for 15 batches of samples were established， and 8 common peaks were identified. The similarity of HPLC fingerprint of 14 batches of sample with control fingerprint R was higher than 0.900. CONCLUSIONS： The established method for content determination of hypoxanthine and inosine and HPLC fingerprint of Pheretima are simple， accurate and reproducible， and can be used for quality control of Pheretima.

KEYWORDS Pheretima; Hypoxanthine; Inosine; HPLC; Fingerprint; Quality standard

地龍為鉅蚓科動(dòng)物參環(huán)毛蚓[Pheretima aspergillum（E. Perrier）]、通俗環(huán)毛蚓（Pheretima vulgaris Chen）、威廉環(huán)毛蚓[Pheretima guillelmi（Michaelsen）]或櫛盲環(huán)毛蚓（Pheretima pectinifera Michaelsen）的干燥體。前一種習(xí)稱“廣地龍”，后3種習(xí)稱“滬地龍”，其性寒，味咸，具有清熱定驚、通經(jīng)活絡(luò)、平喘利尿的功效[1]。地龍藥用始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》[2]，稱“白頸蚯蚓”，被列為下品。而地龍的名稱始記載于《圖經(jīng)本草》[3]，曰：“白頸蚯蚓生平土，今處處平澤膏壤土中皆有之，……方家謂之地龍”?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，地龍具有溶栓、抗凝血、抗心律失常、降壓、鎮(zhèn)靜、抗驚厥、解熱、鎮(zhèn)痛、抗炎、抗腫瘤和止咳平喘等多種藥理作用[4-7]。研究表明，核苷類成分是地龍舒張支氣管、抗組胺、平喘的重要藥用物質(zhì)基礎(chǔ)，也對(duì)人體的代謝和免疫有著重要作用[8-9]，其中次黃嘌呤的含量與地龍藥材止咳化痰、平喘的藥效作用成正相關(guān)[5]，而肌苷有免疫調(diào)節(jié)和神經(jīng)保護(hù)作用[10-11]。

2015年版《中國(guó)藥典》（一部）中地龍項(xiàng)下有性狀、鑒別、檢查（雜質(zhì)、水分、總灰分、酸不溶性灰分、重金屬、黃曲霉毒素）、水溶性浸出物等質(zhì)控項(xiàng)目，尚未收載地龍含量測(cè)定及指紋圖譜檢測(cè)方法，不能全面地控制其質(zhì)量。雖然也有學(xué)者對(duì)地龍中的多種成分同時(shí)進(jìn)行了定量分析[12-13]，但仍無(wú)法從整體角度評(píng)價(jià)地龍的質(zhì)量。中藥指紋圖譜具有整體性、相似性的特點(diǎn)，能突出中藥的完整面貌，可依據(jù)相似度的特點(diǎn)實(shí)現(xiàn)對(duì)中藥內(nèi)在化學(xué)成分的綜合評(píng)價(jià)和整體質(zhì)量的全面控制?；诖耍狙芯吭?015年版《中國(guó)藥典》（一部）現(xiàn)有質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)基礎(chǔ)上，增加以核苷類成分次黃嘌呤、肌苷為定量指標(biāo)，建立高效液相色譜（HPLC）定量法，并建立地龍藥材的HPLC指紋圖譜，旨在為提高地龍藥材的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供一定參考。

1 材料

1.1 儀器

1260型HPLC儀，包括G1311B型四元梯度泵、G1316A型柱溫箱、G1315D型二極管陣列檢測(cè)器、G1328A型手動(dòng)進(jìn)樣器（美國(guó)Agilent公司）;MS105DU型電子分析天平[梅特勒-托利多國(guó)際貿(mào)易（上海）有限公司];XB320M型電子天平（上海雙旭電子有限公司）;FW-80型高速萬(wàn)能粉碎機(jī)（溫嶺市林大機(jī)械有限公司）;SMART型超純水機(jī)（力康生物醫(yī)療科技控股有限公司）。

1.2 藥品與試劑

本研究收集了廣西、廣東、海南等不同產(chǎn)地的共15批地龍藥材，經(jīng)湖北中醫(yī)藥大學(xué)陳科力教授鑒定為鉅蚓科動(dòng)物P. aspergillum（E. Perrier）的干燥體;次黃嘌呤對(duì)照品（上海源葉生物科技有限公司，批號(hào)：TM0313- XC13，純度：98%）;肌苷對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：140669-201606，純度：98.6%）;甲醇（美國(guó)Tedia公司，色譜純）;0.9%氯化鈉注射液（江西科倫藥業(yè)有限公司，批號(hào)：D18102302-2）;其他試劑均為分析純，水為超純水。15批地龍藥材收集情況見表1。

2 方法與結(jié)果

2.1 地龍藥材中次黃嘌呤、肌苷的含量測(cè)定

2.1.1 色譜條件 色譜柱為Purospher STAR RP-18 endcapped（250 mm×4.6 mm，5 μm）;流動(dòng)相為甲醇（A）-水（B）（V/V），梯度洗脫;流速為1 mL/min;檢測(cè)波長(zhǎng)為248 nm;柱溫為30 ℃;進(jìn)樣量為20 μL。梯度洗脫程序見表2。

2.1.2 對(duì)照品貯備液的制備 稱取次黃嘌呤、肌苷對(duì)照品適量，精密稱定，加0.9%氯化鈉注射液分別制成每1 mL含次黃嘌呤31.6 μg、肌苷110.4 μg的單一溶液，即得。

2.1.3 供試品溶液的制備 稱取樣品粉末（過(guò)24號(hào)篩）約1.0 g，精密稱定，置于圓底燒瓶中，精密加入0.9%氯化鈉注射液50 mL，稱定質(zhì)量，加熱回流90 min，放冷，再次稱定質(zhì)量，用0.9%氯化鈉注射液補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，0.45 μm微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.1.4 系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 分別取上述對(duì)照品貯備液、供試品溶液適量，按“2.1.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜。結(jié)果，理論板數(shù)以次黃嘌呤峰計(jì)>6 000，基線分離良好，待測(cè)成分與相鄰峰間的分離度>1.5。色譜圖見圖1。

2.1.5 線性關(guān)系考察 精密量取“2.1.2”項(xiàng)下兩種對(duì)照品貯備液各0.5、1、2、4、6、8、10 mL，分別置于不同10 mL量瓶中，用0.9%氯化鈉注射液定容至刻度，搖勻，按“2.1.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。以峰面積為縱坐標(biāo)（y）、對(duì)照品質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)（x）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果，次黃嘌呤的回歸方程為y=87.562x+5.132 7（r=0.999 9），肌苷的回歸方程為y=54.066x-59.291（r=0.999 8）。結(jié)果表明，次黃嘌呤、肌苷分別在檢測(cè)質(zhì)量濃度為1.58～31.6、5.52～110.4 μg/mL范圍內(nèi)與其各自峰面積線性關(guān)系良好。

2.1.6 定量限與檢測(cè)限考察 取“2.1.2”項(xiàng)下兩種對(duì)照品貯備液適量，倍比稀釋，按“2.1.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，以信噪比為10 ∶ 1和3 ∶ 1分別計(jì)算定量限和檢測(cè)限。結(jié)果，次黃嘌呤、肌苷的定量限分別為0.316 、0.552 μg/mL，檢測(cè)限分別為0.158、0.110 μg/mL。

2.1.7 精密度試驗(yàn) 精密吸取“2.1.2”項(xiàng)下次黃嘌呤、肌苷對(duì)照品貯備液2、4 mL，置于不同10 mL量瓶中，分別用0.9%氯化鈉注射液稀釋至刻度，即得次黃嘌呤、肌苷質(zhì)量濃度分別為6.32、44.16 μg/mL的相應(yīng)對(duì)照品溶液。吸取上述對(duì)照品溶液，按“2.1.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，每個(gè)樣品連續(xù)進(jìn)樣分析6次，記錄峰面積。結(jié)果，次黃嘌呤峰面積的RSD=0.4%（n=6），肌苷峰面積的RSD=0.7%（n=6），表明儀器精密度良好。

2.1.8 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批藥材樣品（批號(hào)：170810）6份，按“2.1.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.1.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積，并計(jì)算次黃嘌呤、肌苷含量。結(jié)果，樣品中次黃嘌呤的平均含量為0.193 6 mg/g，RSD=1.6%（n=6）;肌苷的平均含量為2.345 8 mg/g，RSD=0.5%（n=6）。結(jié)果表明本方法重復(fù)性良好。

2.1.9 穩(wěn)定性試驗(yàn) 稱取同一批藥材樣品（批號(hào)：170810）適量，按“2.1.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，分別在放置0、2、4、6、8、10、12、24 h后，再按“2.1.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。結(jié)果，次黃嘌呤峰面積的RSD=0.4%（n=8），肌苷峰面積的RSD=0.2%（n=8）。結(jié)果表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.1.10 加樣回收率試驗(yàn) 精密稱取已知含量的藥材樣品（批號(hào)：170810）0.5 g，共6份，分別加入約與樣品中次黃嘌呤、肌苷含量相同的對(duì)照品，按“2.1.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.1.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積，并計(jì)算次黃嘌呤、肌苷含量及其加樣回收率。結(jié)果，次黃嘌呤平均回收率為103.0%，RSD=1.7%（n=6）;肌苷的平均回收率為101.2%，RSD=1.2%（n=6）。結(jié)果表明該方法準(zhǔn)確度較好。加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果見表3。

2.1.11 地龍樣品中次黃嘌呤、肌苷的含量測(cè)定 將15批地龍樣品分別按“2.1.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.1.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，每個(gè)樣品測(cè)定3次，記錄峰面積，并計(jì)算次黃嘌呤、肌苷含量。結(jié)果，15批地龍樣品中次黃嘌呤、肌苷的平均含量分別為0.558 7、2.042 3 mg/g。樣品含量測(cè)定結(jié)果見表4。

2.2 地龍藥材HPLC指紋圖譜的構(gòu)建

2.2.1 色譜條件 同“2.1.1”項(xiàng)下色譜條件。

2.2.2 供試品溶液的制備 同“2.1.3”項(xiàng)下供試品溶液的制備方法。

2.2.3 精密度試驗(yàn) 取地龍藥材（批號(hào)：170810）按“2.1.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.1.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄色譜。以肌苷峰（峰5）的保留時(shí)間和峰面積為參照，記錄各共有峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積。結(jié)果，8個(gè)共有峰相對(duì)保留時(shí)間的RSD為0.3%～0.9%（n=6），相對(duì)峰面積的RSD為0.8%～2.3%（n=6）。結(jié)果表明該儀器的精密度良好。

2.2.4 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取地龍藥材（批號(hào)：170810）按“2.1.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，分別在0、2、4、8、12、24 h后，再按“2.1.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析，記錄色譜。以肌苷峰（峰5）的保留時(shí)間和峰面積為參照，記錄各共有峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積。結(jié)果，8個(gè)共有峰相對(duì)保留時(shí)間的RSD為0.08%～0.70%（n=6），相對(duì)峰面積的RSD為0.5%～2.6%（n=6）。結(jié)果表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.2.5 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批地龍藥材樣品（批號(hào)：170810）6份，分別按“2.1.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.1.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜。以肌苷峰（峰5）的保留時(shí)間和峰面積為參照，記錄各共有峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積。結(jié)果，6份樣品中8個(gè)共有峰相對(duì)保留時(shí)間的RSD為0.1%～1.0%（n=6），相對(duì)峰面積的RSD為1.6%～3.3%（n=6）。結(jié)果表明本方法重復(fù)性良好。

2.2.6 地龍藥材HPLC指紋圖譜的生成 將15批地龍樣品分別按“2.1.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.1.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，將得到的色譜圖導(dǎo)入“中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)”（2012版）中，以8號(hào)圖譜為參考圖譜，設(shè)置時(shí)間窗寬度為0.2 min，采用多點(diǎn)校正法進(jìn)行色譜峰匹配，采用中位數(shù)法生成對(duì)照?qǐng)D譜（R）。樣品的對(duì)照指紋圖譜R見圖2，15批樣品的HPLC疊加指紋圖譜見圖3。

2.2.7 相似度分析 采用“中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)”（2012版）軟件，以生成的對(duì)照?qǐng)D譜R為參照，進(jìn)行整體相似度評(píng)價(jià)。結(jié)果顯示，15批樣品中僅有1批樣品（批號(hào)：170804）的相似度小于0.900，其余14批樣品的相似度均大于0.900，且與對(duì)照指紋圖譜R具有較好的一致性。結(jié)果表明地龍藥材樣品間差異較小，質(zhì)量穩(wěn)定性良好，相似度評(píng)價(jià)結(jié)果見表5。

3 討論

3.1 色譜條件的優(yōu)化

在前期研究中，筆者曾采用Agilent公司的ZORBAX SB-C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）、賽分公司的Sapphire-C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）以及默克公司的Purospher STAR RP-18 endcapped色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）對(duì)本品進(jìn)行分析。結(jié)果采用ZORBAX SB-C18色譜柱時(shí)，次黃嘌呤、肌苷色譜峰都存在拖尾現(xiàn)象;采用Sapphire-C18色譜柱和Purospher STAR RP-18 endcapped色譜柱時(shí)，對(duì)供試品溶液各色譜峰的分離效果相對(duì)良好，但Sapphire-C18色譜柱不適合長(zhǎng)時(shí)間用純水相洗脫，故最終采用Purospher STAR RP-18 endcapped色譜柱進(jìn)行試驗(yàn)。在考察不同流動(dòng)相的組成時(shí)，筆者選用乙腈-水、甲醇-水、甲醇-5 mmol/L乙酸銨溶液、甲醇-10 mmol/L乙酸銨溶液等4種流動(dòng)相系統(tǒng)進(jìn)行梯度洗脫。分析圖譜發(fā)現(xiàn)，有機(jī)相選擇甲醇更適合分離，當(dāng)水相為5 mmol/L乙酸銨溶液或10 mmol/L乙酸銨溶液時(shí)，對(duì)色譜峰峰形、分離度并沒有顯著的改善，因此最終選擇甲醇-水流動(dòng)相系統(tǒng)。此外，筆者還考察了不同柱溫（25、30、35 ℃）對(duì)分離度、峰形等的影響，結(jié)果當(dāng)柱溫為30 ℃時(shí)，各峰分離度最好，因此選擇柱溫為30 ℃。本研究與現(xiàn)有報(bào)道[14-15]相比，選用甲醇和水為流動(dòng)相，不僅可達(dá)到較好的分離效果，在35 min內(nèi)全部出峰，還可避免緩沖鹽使用不當(dāng)對(duì)色譜柱的影響。

3.2 供試品溶液制備方法的考察

在前期研究中，筆者分別對(duì)供試品溶液制備過(guò)程中的提取溶劑、提取方法以及溶劑用量等進(jìn)行了考察。（1）提取溶劑的考察：根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，不同溶劑用于核苷類成分提取效果依次為甲醇<80%甲醇<40%甲醇<30%甲醇<20%甲醇<10%甲醇<純水，以0.9%氯化鈉注射液為提取溶劑時(shí)的色譜峰比以95%、75%、50%及25%甲醇為提取溶劑時(shí)更多[16-17]。在此研究背景下，本研究在供試品溶液制備中分別考察了以0.9%氯化鈉注射液和水為溶劑的提取效果。結(jié)果顯示，與以水為提取溶劑時(shí)比較，以0.9%氯化鈉注射液為提取溶劑時(shí)測(cè)得的地龍藥材中次黃嘌呤和肌苷含量均更高，故最終以0.9%氯化鈉注射液為提取溶劑進(jìn)行供試品溶液的制備。（2）提取方法的考察：筆者考察了超聲提取法和加熱回流提取法[18]的提取效果。結(jié)果，與超聲提取法相比，加熱回流提取法提取得到的次黃嘌呤和肌苷含量相對(duì)較高;改變回流提取時(shí)間（30、60、90、120 min），發(fā)現(xiàn)在提取90 min時(shí)待測(cè)物提取含量達(dá)到最高，故最終選擇采用加熱回流提取90 min。（3）溶劑用量的考察：筆者還考察了不同溶劑用量（25、50、100 mL）的提取效果。結(jié)果，當(dāng)溶劑用量為50、100 mL時(shí)，待測(cè)物提取含量無(wú)明顯差異，從經(jīng)濟(jì)角度出發(fā)，選擇溶劑用量為50 mL。故最終采用0.9%氯化鈉注射液50 mL加熱回流提取90 min的方法作為供試品溶液的制備方法。

本研究結(jié)果顯示，15批地龍藥材中肌苷的含量均高于次黃嘌呤，各地、各批次地龍藥材中次黃嘌呤和肌苷的含量差異較大，且未見明顯規(guī)律，這可能與其生存環(huán)境、產(chǎn)地、采收時(shí)間有關(guān)，具體原因有待后期采集更多產(chǎn)地、批次樣品設(shè)計(jì)相關(guān)試驗(yàn)進(jìn)一步研究。本研究基于2015年版《中國(guó)藥典》（一部）現(xiàn)有的地龍藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，增加了對(duì)地龍中次黃嘌呤、肌苷含量測(cè)定和HPLC指紋圖譜鑒別方法，且建立的方法操作簡(jiǎn)便、重復(fù)性好，提升了地龍藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)提高地龍藥材的質(zhì)量具有重要的意義。

參考文獻(xiàn)

[ 1 ] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典：一部[S]. 2015年版.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2015：122-123.

[ 2 ] 吳普.神功本草經(jīng)：第三卷[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，1963：123.

[ 3 ] 蘇頌.圖經(jīng)本草（輯復(fù)本）[M].福州：福建科技出版社，1988：463.

[ 4 ] 楊新，劉欣，萬(wàn)明，等.地龍抗凝血活性物質(zhì)研究進(jìn)展[J].江漢大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2017，45（1）：83-88.

[ 5 ] 利紅宇，李鐘，黃艷玲，等.不同炮制的廣地龍平喘化痰止咳藥效比較[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2010，21（6）：1464-1465.

[ 6 ] 唐鼎，凃乾，李娟，等.藥用地龍的藥理作用和臨床研究進(jìn)展[J].中國(guó)藥師，2015，18（6）：1016-1019.

[ 7 ] 孫姹，張長(zhǎng)林.地龍的藥理與臨床研究概況[J].食品與藥品，2011，13（11）：444-446.

[ 8 ] 張曉晨.地龍藥理與臨床研究進(jìn)展[J].中成藥，2011，33（9）：1574-1578.

[ 9 ] 杜航，孫佳明，郭曉慶，等.地龍的化學(xué)成分及藥理作用[J].吉林中醫(yī)藥，2014，34（7）：707-709.

[10] HASKO G，SITKOVSKY MV，SZABO C. Immunomodulatory and neuroprotective effects of inosine[J]. Trends Pharmacol Sci，2004，25（3）：152-157.

[11] FUKUMORI Y，MAEDA N，TAKEDA H，et al. Serum glucose and insulin response in rats administered with sucrose or starch containing adenosine，inosine or cytosine[J]. Biosci Biotech Bioch，2000，64（2）：237-243.

[12] 周恒，曹依敏，苗水，等. HPLC法測(cè)定滬地龍中7個(gè)核苷類成分的含量[J].藥物分析雜志，2018，38（1）：97-103.

[13] 張彬，李倩，黨愛華. HPLC法同時(shí)測(cè)定赤子愛勝蚓藥材中尿嘧啶、次黃嘌呤、黃嘌呤、尿苷、腺苷的含量[J].中國(guó)藥房，2016，27（12）：1692-1694.

[14] 姜文紅，張清波.地龍HPLC指紋圖譜分析方法的研究[J].中醫(yī)藥學(xué)報(bào)，2006，34（6）：13-14.

[15] 吳文如，李薇，賴小平. HPLC法測(cè)定不同產(chǎn)地地龍中尿嘧啶、次黃嘌呤、尿苷、肌苷的含量[J].中國(guó)藥師，2011，14（7）：914-917.

[16] 明凱利，向陽(yáng)，楊艷霞，等.小金膠囊的HPLC指紋圖譜建立及主成分分析[J].中國(guó)藥房，2019，30（2）：188-192.

[17] 曹文杰. HPLC法測(cè)定復(fù)方地龍膠囊中尿嘧啶、次黃嘌呤和肌苷的含量[J].北方藥學(xué)，2015，12（9）：5-6.

[18] 黃帥，徐風(fēng)，楊平，等.地龍的HPLC特征圖譜研究[J].中國(guó)藥房，2015，26（21）：2971-2974.

（收稿日期：2019-03-19 修回日期：2019-07-24）

（編輯：林 靜）