史向華 ，楊文彬 ，薛潤(rùn)苗 ，張彩峰 ，李百?gòu)?qiáng) ，柴秋彥 ，張俊榮

（1.山西省醫(yī)藥與生命科學(xué)研究院，山西太原030006； 2.山西中醫(yī)藥大學(xué)，山西晉中030619）

皮炎濕疹屬于臨床變態(tài)反應(yīng)性皮膚病之一，變態(tài)反應(yīng)即過(guò)敏，具有較復(fù)雜的病理成因與類(lèi)型多樣的皮膚損傷形式。臨床上以紅斑、丘疹、丘皰疹、瘙癢難忍為主要表現(xiàn)，慢性者表現(xiàn)為浸潤(rùn)肥厚，難以徹底治愈且具有極高的復(fù)發(fā)性［1]。目前西醫(yī)治療濕疹常采用抗過(guò)敏療法，盡管初期可快速控制病情，但容易復(fù)發(fā)，不良反應(yīng)較大。故而臨床開(kāi)始注重使用中醫(yī)療法。新型中藥制劑白菊濕疹乳膏是在臨床經(jīng)驗(yàn)方的基礎(chǔ)上研制而成，作用明確，療效顯著。本研究受中國(guó)人民武裝警察部隊(duì)藥品儀器檢驗(yàn)所委托，對(duì)其藥效學(xué)進(jìn)行評(píng)價(jià)，并為臨床試驗(yàn)提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 藥品與試劑 白菊濕疹乳膏由中國(guó)人民武裝警察部隊(duì)藥品儀器檢定所提供（樣品為淡棕褐色軟膏，純度：99.1%，置冰箱中備用）。復(fù)方醋酸地塞米松乳膏（皮炎平）20 g：15 mg，廣州白云山制藥有限公司白云山何濟(jì)公制藥廠，批號(hào)：V1037。2，4-二硝基氯苯（DNCB）：中國(guó)醫(yī)藥公司北京分公司，批號(hào)：20101026，使用時(shí)配制成l%致敏濃度，0.1%激發(fā)濃度。

1.1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 雄性清潔級(jí)KM小鼠50只，體質(zhì)量18～21 g，軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，許可證號(hào)：SCXK-（軍）2007-004，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量合格證號(hào)：0017609。雄性清潔級(jí)KM小鼠，60只，體質(zhì)量（20±2.0）g，中國(guó)食品藥品檢定研究院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物資源研究所提供，許可證號(hào)：SCXK-（京）2009-0017，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量合格證號(hào)：0269607。豚鼠，60只，雌雄各半，北京昌揚(yáng)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物養(yǎng)殖中心提供，合格證號(hào)：SCXK（京）2011-0010。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 白菊濕疹膏對(duì)二甲苯致小鼠耳腫脹的影響［2]雄性小鼠50只，隨機(jī)分為低、中、高劑量藥物組，陽(yáng)性對(duì)照組及空白對(duì)照組5組，每組10只。低、中、高劑量藥物組分別在小鼠右耳耳廓均勻涂抹白菊濕疹乳膏 0.5 g/kg，1.0 g/kg，2.0 g/kg，陽(yáng)性對(duì)照組在小鼠右耳耳廓均勻涂抹皮炎平乳膏1.0 g/kg，空白對(duì)照組在小鼠右耳耳廓均勻涂抹空白基質(zhì)1.0 g/kg，2 次/d，連續(xù) 3 d，第 4 天涂藥 1 h 后，對(duì)各組小鼠右耳涂予二甲苯致炎，每只0.05mL，4 h后，各組以純化水洗去小鼠右耳耳廓涂抹的藥液，用棉球擦干后將小鼠處死，剪下雙耳，用直徑為8 mm打孔器將雙耳相同部位打下圓耳片，用電子天平稱(chēng)重，以左耳作對(duì)照，左右耳片質(zhì)量之差為腫脹程度，計(jì)算各組腫脹度，求出腫脹抑制率。即空白對(duì)照組平均腫脹度與給藥組平均腫脹度之差占空白對(duì)照組平均腫脹度的百分比。

1.2.2 白菊濕疹膏對(duì)磷酸組胺致豚鼠足跖致癢閾的影響［3－5]豚鼠 60 只，雌雄各半，體質(zhì)量 300～350g，隨機(jī)分為空白對(duì)照組，陽(yáng)性對(duì)照組，低、中、高劑量藥物組，基質(zhì)對(duì)照組6組，每組10只。白菊濕疹膏低、中、高劑量組均涂抹相應(yīng)藥膏 0.5 g/kg，1.0 g/kg，2.0 g/kg，陽(yáng)性對(duì)照組在小鼠右耳耳廓均勻涂抹皮炎平乳膏1.0 g/kg，空白對(duì)照組在小鼠右耳耳廓均勻涂抹0.9%氯化鈉注射液0.05 mL，基質(zhì)對(duì)照組涂抹空白基質(zhì)1.0 g/kg。每天涂藥2次，間隔6 h給藥1次，連續(xù)給藥 7 d。實(shí)驗(yàn)前1 d，給各組豚鼠右后足背剃毛，并涂藥1次。實(shí)驗(yàn)當(dāng)日，用0號(hào)砂紙擦傷動(dòng)物右后足背剃毛處，以少量滲血為度，面積約1 cm2，局部再涂藥1次，末次給藥后30min開(kāi)始在創(chuàng)面處滴以 0.02%磷酸組胺 0.05mL/只，每次間隔時(shí)間為3min，以開(kāi)始出現(xiàn)豚鼠回頭舔右后足時(shí)所給予的磷酸組胺總量為致癢閾。

1.2.3 白菊濕疹膏對(duì) DNCB誘發(fā)小鼠遲發(fā)型超敏反應(yīng)的影響［3－4]昆明種小鼠60只，隨機(jī)分為6組，脫毛前處理、涂藥方法及分組均同 1.2.2。實(shí)驗(yàn)第2天與第3天均用5%DNCB溶液0.1 mL均勻涂抹各組小鼠腹部致敏，第7天于涂藥后2 h，用1%DNCB 0.1mL涂各小鼠右耳激發(fā)，在激發(fā)24 h后，頸椎脫臼處死小鼠，剪下雙耳，對(duì)齊，用8 mm打孔器取下圓型耳片，迅速用分析天平稱(chēng)量雙耳，并計(jì)算腫脹度。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 白菊濕疹膏對(duì)二甲苯致小鼠耳腫脹的影響結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 對(duì)小鼠二甲苯所致耳廓腫脹情況 （±s）

表1 對(duì)小鼠二甲苯所致耳廓腫脹情況 （±s）

注：與空白對(duì)照組比較，1）P＜0.05，2）P＜0.01

組別 n 劑量（g·kg） 腫脹度（mg） 腫脹抑制率（%）低劑量藥物組 10 0.5 8.42±2.801） 20.11中劑量藥物組 10 1.0 6.30±3.602） 40.23高劑量藥物組 10 2.0 5.32±2.822） 49.53陽(yáng)性對(duì)照組 10 1.0 6.10±2.582） 42.13空白對(duì)照組 10 1.0 10.54±3.32 20.11

由表1可以看出，與空白對(duì)照組比較，低、中、高劑量藥物組及陽(yáng)性對(duì)照組耳廓腫脹度均明顯減輕，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05，P＜0.01）。表明皮炎平及白菊濕疹乳膏能明顯抑制二甲苯所致的小鼠耳廓炎癥，且實(shí)驗(yàn)藥物隨劑量增大效果更趨明顯。

2.2 白菊濕疹膏對(duì)磷酸組胺致豚鼠足跖癢致癢閾的影響

結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 對(duì)豚鼠磷酸組胺致足癢致癢閾的影響 （±s）

表2 對(duì)豚鼠磷酸組胺致足癢致癢閾的影響 （±s）

注：與空白對(duì)照組比較，P＜0.05，P＜0.01

組別 n 劑量（g·kg） 致癢閾（vg）空白對(duì)照組 12 0 56.8±23.2基質(zhì)對(duì)照組 12 0.5 78.8±25.7低劑量藥物組 12 0.5 79.6±31.6中劑量藥物組 12 1.0 105.0±44.61）高劑量藥物組 12 2.0 165.8±58.92）陽(yáng)性對(duì)照組 12 0.5 204.2±55.12）1）2）

由表2可見(jiàn)，低劑量藥物組雖有一定的作用，但與空白對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。中、高劑量藥物組及陽(yáng)性對(duì)照組與空白對(duì)照組比較，致癢閾顯著提高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05，P＜0.01）。說(shuō)明濕疹乳膏與皮炎平可顯著提高磷酸組胺對(duì)豚鼠的致癢閾。

2.3 白菊濕疹膏對(duì)DNCB誘發(fā)小鼠遲發(fā)型超敏反應(yīng)的影響

結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 對(duì)小鼠DNCB誘發(fā)小鼠遲發(fā)型超敏反應(yīng)的影響 （±s）

表3 對(duì)小鼠DNCB誘發(fā)小鼠遲發(fā)型超敏反應(yīng)的影響 （±s）

注：與空白對(duì)照組比較，1）P＜0.05，2）P＜0.01

組別 n 劑量（g·kg） 腫脹度（mg）腫脹抑制率（%）空白對(duì)照組 10 0 7.55±4.97 －基質(zhì)對(duì)照組 10 1.0 7.99±6.02 －低劑量藥物組 10 0.5 10.03±6.03 －25.53中劑量藥物組 10 1.0 4.17±4.161） 44.76高劑量藥物組 10 2.0 2.62±1.462） 65.29陽(yáng)性對(duì)照組 10 1.0 2.32±2.192） 69.27

由表3可見(jiàn)，DNCB誘發(fā)小鼠遲發(fā)型超敏反應(yīng)模型組（空白對(duì)照組）出現(xiàn)顯著腫脹，說(shuō)明模型復(fù)制成功。與模型組比較，中、高劑量藥物組和皮炎平組均可顯著減輕小鼠遲發(fā)型超敏反應(yīng)模型耳廓皮膚的腫脹質(zhì)量（P＜0.05，P＜0.01），說(shuō)明白菊濕疹膏可顯著改善小鼠遲發(fā)型超敏反應(yīng)模型耳廓皮膚病變。

3 討論

本研究是在前期實(shí)驗(yàn)結(jié)果的基礎(chǔ)之上，進(jìn)一步研究白菊濕疹乳膏的抗炎作用，以期為臨床用藥提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

炎癥早期的主要表現(xiàn)是毛細(xì)管擴(kuò)張、通透性增加、滲出和水腫，二甲苯作為致炎劑能夠增加小鼠耳部血流量、增強(qiáng)血管通透性，從而引起小鼠耳腫脹。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，白菊濕疹乳膏能明顯抑制二甲苯所致的小鼠耳廓腫脹度，且高劑量組抑制率達(dá)到49.53%，抗炎效果更趨明顯。

組織胺是經(jīng)典的瘙癢介質(zhì)。其通過(guò)H1或H2受體引起皮膚和黏膜毛細(xì)血管擴(kuò)張和滲透性增高，產(chǎn)生紅斑、水腫，通過(guò)刺激神經(jīng)末梢而引起瘙癢［6]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，白菊濕疹乳膏可明顯提高磷酸組胺對(duì)豚鼠的致癢閾，表明該制劑具有明顯的止癢作用。

DNCB是一種半抗原，與皮膚表面的蛋白質(zhì)結(jié)合后成為完全抗原，可誘發(fā)機(jī)體產(chǎn)生遲發(fā)型超敏反應(yīng)。當(dāng)一定抗原進(jìn)入機(jī)體內(nèi)，能刺激T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化為特異的致敏T淋巴細(xì)胞，致敏T淋巴細(xì)胞分布于全身皮膚內(nèi)，當(dāng)該抗原再次接觸皮膚，致敏T淋巴細(xì)胞大量增殖，并釋放多種細(xì)胞因子，局部引起以單核細(xì)胞浸潤(rùn)為主的炎癥反應(yīng)［7]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示白菊濕疹膏可顯著抑制DNCB誘發(fā)小鼠遲發(fā)型超敏反應(yīng)模型組出現(xiàn)的皮膚腫脹，且隨劑量增大抗炎效果增強(qiáng)，具有一定的量-效關(guān)系，表明白菊濕疹乳膏具有良好的抗炎、止癢作用。