李登勇 王建國(guó) 支胡鈺

摘要 [目的]篩選一株柑橘酸腐病拮抗菌，用于柑橘采后酸腐病的防治。[方法]篩選一株對(duì)柑橘酸腐病具有高效拮抗作用的生防菌，并研究其對(duì)柑橘可溶性固形物、可滴定酸、抗壞血酸及揮發(fā)性物質(zhì)含量的影響。[結(jié)果]篩選出的拮抗菌株在平板上對(duì)白地霉 （Geotrichum candidum Link）的抑菌率為82.58%。當(dāng)柑橘酸腐病發(fā)病率為96.67%時(shí)，接種108 CFU/mL生防菌能有效降低柑橘酸腐病發(fā)病率至13.89%。經(jīng)鑒定發(fā)現(xiàn)拮抗菌為解淀粉芽孢桿菌植物亞種（Bacillus amyloliqufaciens subsp.plantarum），其能延緩柑橘貯藏過(guò)程中抗壞血酸含量的下降，保持柑橘果實(shí)中可溶性固形物和可滴定酸的含量，延緩果實(shí)衰老，提高多種香味物質(zhì)，特別是檸檬烯、月桂烯、沉香醇及奎醛等的含量，同時(shí)延緩正己醛和反式-2-己烯醛等揮發(fā)性物質(zhì)的降解，從而有效延長(zhǎng)柑橘的貯藏期，保證柑橘貯藏期內(nèi)良好的果實(shí)風(fēng)味、食品品質(zhì)和營(yíng)養(yǎng)價(jià)值。[結(jié)論]該研究可推動(dòng)柑橘采后生物保鮮產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。

關(guān)鍵詞 酸腐?。晦卓咕?；解淀粉芽孢桿菌植物亞種；揮發(fā)性物質(zhì)

中圖分類號(hào) TS205 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A

文章編號(hào) 0517-6611（2019）08-0186-04

doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2019.08.049

Abstract [Objective]To screen out a strain of antagonistic bacillus of citrus sour rot for the prevention and control of citrus sour rot after harvest.[Method]A strain of biocontrol bacteria with highly antagonistic effect on citrus sour rot was screened out，and its effects on the contents of soluble solid，titratable acid，ascorbic acid and volatiles in citrus were studied.[Result]The inhibition rate of screened antagonistic bacillus on Geotrichum candidum Link was 82.58%.The morbidity of sour rot decreased from 96.67% to about 13.98% when the biocontrol bacilluss innoculation amount was 108 CFU/mL.The antagonistic bacillus was identified as Bacillus amyloliqufaciens subsp.plantarum，which could prolong the decrease of ascorbic acid content，maintain the content of soluble solid and titratabe acid in the storage period，delaying the fruits aging，increase the content of multiple flavor compounds，especially limonene，yrcene，linalool and kratos aldehyde，and reduce the degradation of some volatiles that could inhibit the propagation of pathogenic bacteria，such as hexanal，trans2hexenal，and so on.Furthermore，it could effectively prolong the storage period of citrus，and ensure good fruit flavor，food quality and nutritional value during the storage period of citrus.[Conclusion]The research could promote the development of citrus postharvest biological preservation industry.

Key words Sour rot；Antagonistic bacteria；Bacillus amyloliqufaciens subsp.plantarum；Volatile substance

柑橘采后病害嚴(yán)重，青霉病、綠霉病、酸腐病和蒂腐病是其最主要病害，每年因采后病害對(duì)柑橘產(chǎn)業(yè)造成的損失難以估計(jì)[1]。抑霉唑、嘧霉胺、咪鮮胺和咯菌腈等化學(xué)殺菌劑是抑制柑橘采后病害的主要手段，近年來(lái)因其對(duì)人類健康、生態(tài)環(huán)境的不利影響，許多國(guó)家和地區(qū)已嚴(yán)格限制使用[2]。

生物防治是利用生物自然拮抗性抑制或殺死病原菌的一種方法，具有目標(biāo)特異性和環(huán)境友好型等優(yōu)點(diǎn)[3]，是近年來(lái)相關(guān)行業(yè)研究的熱點(diǎn)。有文獻(xiàn)報(bào)道植物次級(jí)代謝產(chǎn)物或者提取物能夠抑制柑橘病原菌的繁殖，比如Hao等[1-2]發(fā)現(xiàn)茶皂素僅僅與少量的咪鮮胺或抑霉唑混合就能顯著提高殺菌效果，并延長(zhǎng)茶皂素在柑橘表面的保存時(shí)間，同時(shí)也發(fā)現(xiàn)茶皂素與Bacillus amyloliquefaciens聯(lián)合使用能夠顯著抑制P.digitatm，P.italicum 和 G.candidum的繁殖。Talibi等[4]研究發(fā)現(xiàn)C.villosus、C.siliqua 和 H.umbellatum 3種植物的提取物能不同程度抑制G.candidum的繁殖。Faten等[5]建立了檸檬醛與殼聚糖的聯(lián)合抑制酸腐病菌的方法。Liu等[6]研究了2種酵母菌對(duì)酸腐病病原菌的抑制情況，發(fā)現(xiàn)C.laurentii能夠競(jìng)爭(zhēng)性抑制酸腐病病原菌的繁殖。

化學(xué)殺菌劑抑霉唑、咪鮮胺等不能很好抑制酸腐病病菌的繁殖，只有鄰苯酚鈉能減緩其生長(zhǎng)繁殖[7]。Talibi等[4]發(fā)現(xiàn)C.villosus等植物提取物能夠不同程度抑制酸腐病病原菌的繁殖。然而，植物代謝物提取過(guò)程工藝相對(duì)復(fù)雜、繁瑣。筆者以白地霉（Geotrichum candidum Link）為標(biāo)靶，篩選高效拮抗菌，研究其對(duì)柑橘中可溶性固形物、可滴定酸、抗壞血酸及揮發(fā)性物質(zhì)含量的影響，以期推動(dòng)柑橘采后生物保鮮產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。

1 材料與方法

1.1 材料

拮抗菌分離樣采集于福建省三明市大田縣老樹(shù)林土壤，擔(dān)子菌綱傘菌紅菇科食用真菌根部；柑橘和馬鈴薯購(gòu)買于當(dāng)?shù)剞r(nóng)貿(mào)市場(chǎng)。

枯草芽孢桿菌菌株B1、B2、B3、B4和B5分別購(gòu)買于武漢某公司、江西某公司、浙江某公司、北京某公司和山東某公司；枯草芽孢桿菌R31、白地霉（Geotrichum candidum Link）為實(shí)驗(yàn)室保存菌種。

馬鈴薯瓊脂培養(yǎng)基 （PDA）：葡萄糖 20 g，去皮馬鈴薯 200 g，瓊脂粉 20 g，蒸餾水 1 000 mL，pH 7.0。

1.2 試劑 2，6-二氯酚靛酚、蛋白胨、牛肉膏、氯化鈉、葡萄糖等試劑均購(gòu)自天津市百世化工有限公司；C5～C20正構(gòu)烷烴及環(huán)已酮標(biāo)準(zhǔn)品（色譜級(jí)）購(gòu)自德國(guó)Dr.Ehrenstorfer GmbH公司。

1.3 儀器 7890/5973氣相色譜-單四極桿質(zhì)譜儀，為美國(guó)Agilent公司產(chǎn)品；Combi PAL氣相色譜多功能自動(dòng)進(jìn)樣器，為瑞士CTC公司產(chǎn)品； DB-5MS石英毛細(xì)管柱 （30 m×0.25 mm，0.25 μm）；DVB/CAR/PDMS 50/30 μm （二乙烯基苯/碳分子篩/聚二甲基硅氧烷）萃取頭購(gòu)自美國(guó)Supelco 公司。

1.4 方法

1.4.1 拮抗菌株的篩選及處理濃度。

將食用真菌根部及土壤樣品各研磨成粉，混合均勻。從混合均勻的2個(gè)樣品中各稱取5.00 g食用真菌根部及土壤混合粉樣置于玻珠瓶中，使用振蕩器振蕩均勻，采用梯度稀釋法適當(dāng)稀釋后涂布于PDA培養(yǎng)基，每天觀察并挑選長(zhǎng)勢(shì)良好、對(duì)周邊菌具明顯拮抗作用的菌落于PDA培養(yǎng)基培養(yǎng)，并進(jìn)行純化。

1.4.1.1 拮抗菌株的篩選。

無(wú)菌條件下從培養(yǎng)7 d的白地霉PDA 培養(yǎng)基中打取菌餅（直徑 5 mm），菌絲面向下接種于已經(jīng)凝固的PDA 培養(yǎng)基中心點(diǎn)，以中心點(diǎn)為軸，繪制X、Y軸。然后，將培養(yǎng)于PDA培養(yǎng)基上12 h的待篩選菌株、標(biāo)準(zhǔn)菌株，以同樣方式取出菌餅（直徑 5 mm），并將菌餅沿X、Y軸等距離接種于已接種白地霉的PDA培養(yǎng)基中并封口，于28 ℃培養(yǎng)7 d后利用十字交叉法測(cè)定白地霉菌落直徑。菌株抑菌率按照以下公式計(jì)算：

抑菌率=[（對(duì)照平板中菌落直徑-處理平板中菌落直徑）/對(duì)照平板菌落直徑]×100%（1）

1.4.1.2 效果驗(yàn)證及濃度篩選。

將已篩選出的高效拮抗菌于三角瓶中活化培養(yǎng)12 h，用血球板測(cè)量菌體濃度，將菌體濃度稀釋成105、106、107、108和109 CFU/mL，待用。將培養(yǎng)基中培養(yǎng)了7 d的白地霉用無(wú)菌水配制成菌懸液，控制濃度為1×107 孢子數(shù)/mL。

將柑橘果實(shí)洗凈，然后用200 mg/L次氯酸鈉浸泡1 min，去除表面各種雜菌，并于通風(fēng)處晾干。用滅菌金屬針沿赤道部位刺孔1個(gè)（直徑5 mm、深2 mm），然后分別用移液槍移入不同濃度的拮抗菌各15 μL，自然晾干。然后，將晾干后的果實(shí)每孔再移入白地霉菌懸液15 μL，自然晾干。

最后，用聚乙烯袋（0.03 mm）進(jìn)行單果包裝，每個(gè)處理設(shè)3次重復(fù)，每個(gè)重復(fù)60個(gè)果。置于室溫（25±2）℃下，在相對(duì)濕度85%～95%條件下貯藏，定期觀察損傷接種果實(shí)酸腐病的發(fā)病情況，5 d后統(tǒng)計(jì)發(fā)病率。發(fā)病率根據(jù)以下公式計(jì)算：

發(fā)病率= （發(fā)病果數(shù)/檢查總果數(shù)）×100%（2）

1.4.2 拮抗菌傳代穩(wěn)定性試驗(yàn)。

對(duì)已篩選出的高效拮抗菌株的第2、4、6、8及10代菌分別進(jìn)行對(duì)白地霉（Geotrichum candidum Link）的抑菌實(shí)驗(yàn)，試驗(yàn)方法與“1.4.1.1”相同。

1.4.3 菌株分子生物學(xué)及生理生化鑒定。菌種分子生物學(xué)和生理生化鑒定均委托中國(guó)工業(yè)微生物菌種保藏中心完成。

1.4.4 拮抗菌株對(duì)柑橘品質(zhì)的影響。

三角瓶中活化培養(yǎng)篩選出的拮抗菌12 h，用血球板測(cè)量菌體濃度，將菌體濃度稀釋成108 CFU/mL，待用。將柑橘果實(shí)洗凈，用200 mg/L次氯酸鈉浸泡1 min，去除表面各種雜菌，通風(fēng)處晾干。然后將晾干后的果實(shí)分別于無(wú)菌水、108 CFU/mL菌液中浸泡1 min，自然晾干。再用聚乙烯袋（0.03 mm）進(jìn)行單果包裝，每個(gè)處理120個(gè)果。置于室溫（25±2）℃，相對(duì)濕度85%～95%條件下貯藏，定期取樣測(cè)定。

1.4.4.1 可溶性固形物及可滴定酸的測(cè)定。

可溶性固形物的測(cè)定參考國(guó)標(biāo)GB/T 12295—1990[8]，具體如下：準(zhǔn)確稱取250 g柑橘果肉于水果搗碎機(jī)混合均勻，用2層紗布過(guò)濾得到濾液。在20 ℃恒溫水浴下，以蒸餾水為空白，使用折射儀測(cè)定可溶性固形物濃度，每個(gè)樣品重復(fù)3次。

可滴定酸的測(cè)定方法：準(zhǔn)確稱取果肉10.0 g，研磨勻漿后，用約60 mL蒸餾水洗入100 mL容量瓶中，放在沸水浴中浸提30 min。冷卻定容至刻度，充分搖勻后過(guò)濾至100 mL錐形瓶中。量取20 mL濾液置于三角瓶中，加入2滴1%酚酞指示劑，用已標(biāo)定的氫氧化鈉溶液進(jìn)行滴定。滴定至溶液初顯粉色并在30 s內(nèi)不褪色時(shí)為終點(diǎn)，記錄氫氧化鈉滴定液的用量，重復(fù)3次。以蒸餾水作為空白對(duì)照。

1.4.4.2 抗壞血酸含量的測(cè)定。

抗壞血酸含量的測(cè)定參考Dewhirst等[9]的方法，略做修改。稱取 10.0 g果肉樣品，加少量 2%草酸溶液在冰浴條件下研磨成漿狀，轉(zhuǎn)入到100 mL棕色容量瓶中，再用 2%草酸溶液定容至刻度搖勻，并于黑暗處?kù)o置30 min提取，過(guò)濾，收集濾液于棕色瓶。準(zhǔn)確吸取10 mL濾液，用已標(biāo)定的2，6-二氯酚靛酚溶液滴定至出現(xiàn)微紅色，且15 s不褪色為止，記下用量，重復(fù)3次。同時(shí)，以10 mL 2%草酸溶液做空白滴定。按以下公式計(jì)算抗壞血酸含量：

W=V×（V1-V0）×ρVS×m×1 000（3）

式中，W表示抗壞血酸含量（mg/kg）；V0為空白滴定消耗的染料的體積（mL）；V1為樣品液滴定消耗的染料的體積（mL）；ρ為1 mL染料溶液相當(dāng)于抗壞血酸的質(zhì)量（mg/mL）；VS為測(cè)定時(shí)所用樣品溶液體積（mL）；V為樣品提取液總體積（mL）；m為樣品質(zhì)量（g）。

1.4.4.3 柑橘果肉中揮發(fā)性物質(zhì)的測(cè)定。分別取新鮮、正常貯存的、拮抗菌菌液處理后儲(chǔ)藏的柑橘果肉樣品5.00 g置于20 mL螺口樣品瓶中，加入3.00 g NaCl，準(zhǔn)確加入2 μL環(huán)己酮 （0.947 89 μg/mL），作為內(nèi)標(biāo)物，旋緊瓶蓋。頂空固相微萃取條件：40 ℃平衡20 min；頂空吸附35 min；解吸5 min。

色譜和質(zhì)譜條件：載氣為氦氣，l mL/min；進(jìn)樣口溫度250 ℃，不分流進(jìn)樣；以35 ℃為程序性升溫起示溫度，在此溫度下維持5 min，然后以3 ℃/min升至180 ℃保持2min，最后以5 ℃/min的升溫速度升至240 ℃，保持2 min。傳輸線溫度280 ℃；離子源溫度230 ℃；四極桿溫度150 ℃；離子化方式電子電離源 （electronionization，EI），電子能量70 eV，質(zhì)量范圍m/z 35～400。

在相同的色譜及質(zhì)譜條件下，以C5～C20的正構(gòu)烷烴作為標(biāo)準(zhǔn)，以其保留時(shí)間的不同計(jì)算樣品測(cè)試中的化合物的保留指數(shù)（retention indices，RI），結(jié)合圖譜庫(kù)（NIST2008和Havour2.0）檢索結(jié)果，同時(shí)與文獻(xiàn)中已有相應(yīng)保留值相比來(lái)完成揮發(fā)性物質(zhì)的定性。以環(huán)己酮為內(nèi)標(biāo)，對(duì)揮發(fā)性物質(zhì)進(jìn)行半定量分析，并將影響因子視為1。所有樣品重復(fù)3次，結(jié)果均以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。

Cx=AxAs×Cs×Vs（4）

式中，Cx表示未知揮發(fā)性組分的濃度（μg/mL）：Ax表示未知揮發(fā)性組分的色譜峰面積；As表示內(nèi)標(biāo)的色譜峰面積；Cs表示內(nèi)標(biāo)濃度（mg/mL）；Vs表示內(nèi)標(biāo)溶液的體積（μL）。

1.4.5 數(shù)據(jù)處理。

使用方差分析（ANOVA）對(duì)不同樣品進(jìn)行顯著性分析（P<0.05），所有統(tǒng)計(jì)分析及數(shù)據(jù)可視化均使用SPPS 17.0和Origin8.50軟件進(jìn)行。

2 結(jié)果與分析

2.1 拮抗菌的篩選

通過(guò)初篩及與標(biāo)準(zhǔn)菌株的對(duì)比，共篩選出4株對(duì)白地霉具有高抑制率的菌株，分別命名為HF-1、HF-2、HF-3和HF-4。由表1可知，HF-3菌株對(duì)白地霉的抑菌作用最強(qiáng)，抑菌率為82.58%，高于從其他公司購(gòu)買的標(biāo)準(zhǔn)菌株及實(shí)驗(yàn)室自存的菌株。

從圖1可知，隨著HF-3濃度的增加，HF-3對(duì)果實(shí)酸腐病的抑制作用逐漸增強(qiáng)。當(dāng)HF-3濃度達(dá)到108 CFU/mL時(shí)酸腐病發(fā)病率降低到13.89%，空白發(fā)病率為96.67%。當(dāng)HF-3濃度升至109 CFU/mL時(shí)，對(duì)酸腐病的抑制效果沒(méi)有顯著增加，可能與拮抗菌過(guò)度消耗果實(shí)表面營(yíng)養(yǎng)從而降低了果實(shí)本身的抗性有關(guān)。酸腐病是柑橘采后最難防控的病害，當(dāng)空白組5 d損傷接種發(fā)病率為96.67%，拮抗菌HF-3能有效作用于酸腐病菌，降低病害的發(fā)生率，表明拮抗菌HF-3對(duì)酸腐病有較好的拮抗作用，108 CFU/mL是最適作用濃度。

2.2 拮抗菌的性能穩(wěn)定性

拮抗菌產(chǎn)業(yè)化過(guò)程中最大的問(wèn)題是穩(wěn)定性問(wèn)題。由圖2可知，HF-3菌株的第2、4、6、8及10傳代菌對(duì)白地霉的抑菌率都超過(guò)80%，表明HF-3菌株對(duì)白地霉的抑菌性能是穩(wěn)定的，并未因傳代次數(shù)的增多而降低對(duì)白地霉的抑菌效果。

2.3 拮抗菌的鑒定

經(jīng)鑒定，HF-3為革蘭氏陽(yáng)性菌，菌體成桿狀，中生或端生橢圓形芽孢，飽囊不腫大，菌落乳白色，表面光滑，不透明，邊緣整齊，直徑約1 mm（圖3）。HF-3的生理生化分析結(jié)果如表2所示，對(duì)照伯杰氏細(xì)菌鑒定手冊(cè)，初步判斷HF-3為解淀粉芽孢桿菌植物亞種。

分別擴(kuò)增HF-3的16S rDNA及gyr基因，純化測(cè)序后并采用鄰接法 （MEGA 5.0）進(jìn)行1 000次的相似度重復(fù)計(jì)算，構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)。16S rDNA基因進(jìn)化樹(shù)顯示，HF-3屬于枯草芽孢桿菌群，而gyr基因進(jìn)化樹(shù)顯示HF-3基因序列與甲基型營(yíng)養(yǎng)芽孢桿菌（Bacillus metylotrophicus）和解淀粉芽孢桿菌植物亞種（Bacillus amyloliqufaciens subsp.plantarum）相似度最高，達(dá)98%以上。因此確定HF-3菌株為解淀粉芽孢桿菌植物亞種 （Bacillus amyloliqufaciens subsp.plantarum），最終菌株命名為ZFH-3。

2.4 HF-3菌液處理對(duì)柑橘可溶性固形物及可滴定酸的影響

可溶性固形物和可滴定酸是評(píng)價(jià)柑橘品質(zhì)的重要指標(biāo)，同時(shí)可溶性固形物與可滴定酸的比值常作為柑橘成熟度的評(píng)價(jià)指標(biāo)。從圖4可看出，在柑橘采摘5 d內(nèi)，由于營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)被切斷等原因，可溶性固形物含量急劇下降，同時(shí)可滴定酸含量略微上升；后期隨著內(nèi)源乙烯的積累合成（乙烯合成系統(tǒng) Ⅱ），使柑橘中纖維素、淀粉等大分子物質(zhì)足漸分解為可溶性小分子。與HF-3L （菌液處理后儲(chǔ)藏）和CKL （正常儲(chǔ)藏）相比，HF-3菌液能夠促成柑橘貯存過(guò)程中可溶性糖分的積累，貯存20 d后HF-3L可溶性糖約比CKL高8%。CKL果中可滴定酸在10 d后沒(méi)有發(fā)生顯著變化，而HF-3L中可滴定酸在10 d后會(huì)逐漸上升，20 d達(dá)到最高。同時(shí)，HF-3L與CKL相比能有效延緩果實(shí)的衰老，這種作用在后期更加明顯。這可能是因?yàn)镠F-3菌株能夠在柑橘表面形成一層由多糖-蛋白質(zhì)化合物-細(xì)菌組成，并帶有負(fù)電荷的生物膜[2]，另外HF-3的呼吸作用能夠增加CO2的濃度，一定程度上抑制柑橘自身的呼吸作用，減少可溶性糖的損失；抑制乙烯的產(chǎn)生和降低果膠酶的活性，從而延緩柑橘的成熟和果實(shí)軟化[10]。

2.5 HF-3菌液處理對(duì)柑橘抗壞血酸含量的影響

由圖5可知，在自然貯存中柑橘的抗壞血酸含量呈現(xiàn)先急劇下降后略微上升再降低的過(guò)程，與西柚貯存中抗壞血酸含量的變化趨勢(shì)相同[11]。與正常貯藏柑橘（CKL）相比，貯藏前期HF-3菌液能延緩抗壞血酸含量的下降，貯藏中后期能較好地保持抗壞血酸在果實(shí)中的含量，第20、25天抗壞血酸含量分別為CKL樣品中的2.5倍和1.9倍。

2.6 HF-3菌液處理對(duì)柑橘揮發(fā)性物質(zhì)含量的影響

應(yīng)用HS-SPME-GC/MS聯(lián)用技術(shù)分析了新鮮柑橘 （XXL）、HF-3菌液處理柑橘 （HF-3L）及對(duì)照柑橘 （CKL）果肉的揮發(fā)性物質(zhì)。通過(guò)圖譜庫(kù)檢索與RI值比對(duì)，結(jié)合相關(guān)文獻(xiàn)，得出香氣成分及其定量值。結(jié)果表明，在3種柑橘果肉中共檢出53種香氣成分，其中23種為共有成分，31種為非共有成分，并且各有5～8種相對(duì)含量較低的獨(dú)特成分。HF-3L柑橘樣品中香氣含量最多，共檢出39種揮發(fā)性物質(zhì)，總含量為223.90 μg/g，其次為CKL樣品果肉，檢出38種，揮發(fā)性物質(zhì)總含量為184.39 μg/g；XXL果肉中共為檢出35種揮發(fā)性物質(zhì)，總含量為117.72 μg/g。檢出的揮發(fā)性物質(zhì)主要包括萜烯、醛類、酯類、醇類、酚類等；CKL中萜烯類、酯類、酮類含量較XXL增加，醛類、醇類、其他等含量則減少。與XXL相比，HF-3L柑橘中酮類減少，其他類型成分顯著上升。柑橘果肉中主要揮發(fā)性物質(zhì)及其風(fēng)味描述見(jiàn)表3。

進(jìn)一步對(duì)3種樣品中的揮發(fā)性物質(zhì)進(jìn)行了主成分分析（圖6）。從圖6可看出，PCA1和PCA2分別能解釋3種樣品中揮發(fā)性物質(zhì)差異的56.88%和43.12%，結(jié)合PCA1和PCA2能完全解釋3種樣品中揮發(fā)性物質(zhì)的差異。結(jié)果顯示，3種柑橘樣品中揮發(fā)性物質(zhì)的含量存在顯著差異，α-萜品烯、鄰苯二甲酸二乙酯、4-萜烯醇、乙烯胺、反式二烯酸等揮發(fā)性物質(zhì) （F1～F13）主要存在于XXL樣品中，檸檬烯、奎酸、壬醛、正辛醛、苯甲醛等多種揮發(fā)性物質(zhì) （F14～F41）主要存在于HF-3L樣品中，α-蒎烯、沉香醇等揮發(fā)性物質(zhì) （F42～F53）主要存在于CKL中。通過(guò)HF-3菌液處理，顯著提高了正辛醇、紫蘇醇、沉香醇、月桂烯、檸檬烯、γ-萜品烯、苯乙酮、壬醛、ρ-傘花烴和奎醛等香味物質(zhì)含量，同時(shí)減緩了正己醛、反式二烯醛，1-辛醇等香味物質(zhì)損耗。通過(guò)與OAV值相比較，表明沉香醇、月桂烯、檸檬烯、奎醛是柑橘香氣成分中最主要的貢獻(xiàn)者，使柑橘產(chǎn)生令人愉快的氣味。其中沉香醇僅僅在HF-3L樣品中檢測(cè)到，其相對(duì)含量為OAV值的540倍，能夠產(chǎn)生令人愉悅的花香[12]。檸檬烯、正己醛和反式-二烯醛等揮發(fā)性物質(zhì)不僅是柑橘獨(dú)特香味的貢獻(xiàn)者，而且抑制病原菌的生長(zhǎng)[13]。HF-3菌液處理后，柑橘中香茅醇、α-蒎烯和α-萜品烯等香味物質(zhì)的含量略微降低，但其本身香味貢獻(xiàn)度較低。

3 結(jié)論

該研究以白地霉為靶標(biāo)，從土壤及食用菌根際組織中進(jìn)行拮抗菌的篩選，篩選出一株對(duì)白地霉具高拮抗作用的解淀粉芽孢桿菌植物亞種（Bacillus amyloliqufaciens subsp.plantarum）。結(jié)果表明，當(dāng)拮抗菌濃度達(dá)到108 CFU/mL，能有效的降低柑橘果實(shí)酸腐病發(fā)病率，控制酸腐病發(fā)病率為13.89%；延緩柑橘貯藏過(guò)程中抗壞血酸含量的下降，顯著提高正辛醇、紫蘇醇、沉香醇、月桂烯、檸檬烯、γ-萜品烯、苯乙酮、壬醛、ρ-傘花烴和奎醛等香味物質(zhì)含量，同時(shí)減緩正己醛、反式二烯醛、1-辛醇等香味物質(zhì)損耗；保持柑橘果實(shí)中可溶性固形物、可滴定酸的含量，從而有效延長(zhǎng)柑橘的貯藏期，保證柑橘貯藏期內(nèi)良好的果實(shí)風(fēng)味、食品品質(zhì)和營(yíng)養(yǎng)價(jià)值。

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