梁宛楠，陳丕坤

（哈藥集團(tuán)生物疫苗有限公司，哈爾濱 150069）

豬細(xì)小病毒病與偽狂犬病是危害全球養(yǎng)豬業(yè)的三種重要傳染病，分別是由豬細(xì)小病毒（PPV）和偽狂犬病毒（PRV）。目前這兩種傳染病在豬場的發(fā)生率較高，給養(yǎng)豬業(yè)帶來了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。因此，為了預(yù)防和控制這些疾病，安全、高效的疫苗是最主要的解決途徑。本研究試制的豬細(xì)小病毒病、偽狂犬病二聯(lián)滅活疫苗是一種含有豬細(xì)小病毒L株抗原和豬偽狂犬病毒H株抗原的油乳劑滅活疫苗。取試制的3批滅活疫苗，制備后立即置于2～8 ℃冰箱保存，分別于保存后的3、6、9、12 和15 個月，按照現(xiàn)行《中國獸藥典》要求進(jìn)行疫苗的物理性狀及無菌檢驗(yàn)；按照擬定的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行疫苗的效力檢驗(yàn)，來確定疫苗的保存期，為養(yǎng)殖戶可以應(yīng)用到安全、高效的疫苗提供保證。

1 材料和方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 試制疫苗

豬細(xì)小病毒病、豬偽狂犬病二聯(lián)滅活疫苗，批號：201601、201602和201603。

1.1.2 試驗(yàn)動物

體重＞350 g、豬細(xì)小病毒HI 抗體效價(jià)≤1:8 的豚鼠；體重10～20 kg、豬偽狂犬病毒中和抗體陰性的斷奶仔豬，

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 疫苗物理性狀檢驗(yàn)

按現(xiàn)行《中國獸藥典》附錄的規(guī)定進(jìn)行滅活疫苗的外觀、劑型、黏度和穩(wěn)定性檢驗(yàn)，應(yīng)符合要求。

1.2.2 無菌檢驗(yàn)

按現(xiàn)行《中國獸藥典》附錄的規(guī)定進(jìn)行檢驗(yàn)，應(yīng)符合規(guī)定。

1.2.3 效力檢驗(yàn)

按照擬定的《豬細(xì)小病毒病、偽狂犬病二聯(lián)滅活疫苗（L株+H株）質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》（草案）的要求進(jìn)行疫苗的效力檢驗(yàn)。每批疫苗抽檢3 瓶，經(jīng)充分混合后，對試驗(yàn)動物進(jìn)行免疫。

豬細(xì)小病毒：每批疫苗在保存3、6、9 個月時(shí)接種豚鼠5 只，在保存12、15 個月時(shí)，接種豚鼠10 只，劑量0.5 mL·只-1，觀察28 d，連同條件相同的對照豚鼠3 只，采血，測定血清中HI 抗體效價(jià)。

豬偽狂犬病毒：每批疫苗在保存3、6、9、12、15個月時(shí)，接種10～20 kg、豬偽狂犬病毒血清中和抗體陰性的豬5 頭，劑量3 mL·頭-1，觀察28 d，連同條件相同對照豬3 頭，采血，測定豬偽狂犬病毒血清抗體中和指數(shù)。

1.2.4 研究指標(biāo)

按下述標(biāo)準(zhǔn)判定保存的疫苗是否合格。合格：疫苗物理性狀符合擬定的《豬細(xì)小病毒病、偽狂犬病二聯(lián)滅活疫苗（L株+H株）質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》（草案）的規(guī)定；疫苗無細(xì)生長；接種豚鼠的豬細(xì)小病毒HI 抗體效價(jià)≥1:64，接種豬的血清中和指數(shù)≥316。不合格：達(dá)不到上述標(biāo)準(zhǔn)的疫苗判為不合格。

2 試驗(yàn)結(jié)果

2.1 物理性狀檢查結(jié)果

在疫苗于2～8 ℃保存后的3、6、9、12和15個月，檢查保存疫苗物理性狀，檢驗(yàn)結(jié)果見表1。

表1 豬細(xì)小病毒病、豬偽狂犬病二聯(lián)滅活疫苗保存期試驗(yàn)物理性狀檢查結(jié)果

2.2 無菌檢驗(yàn)結(jié)果

在疫苗于2～8 ℃保存后的3、6、9、12和15個月，按照現(xiàn)行《中國獸藥典》附錄進(jìn)行無菌檢驗(yàn)，結(jié)果見表2。

2.3 效力檢驗(yàn)結(jié)果

2.3.1 豬細(xì)小病毒

以不同保存時(shí)間的疫苗，每批疫苗各取3瓶混合后接種豚鼠5只，肌肉注射0.5 mL·只-1，于注射疫苗后28 d，連同4 只對照豚鼠一起采血進(jìn)行檢測，血清中豬細(xì)小病毒HI 抗體效價(jià)測定結(jié)果見表3。

由表3 可知，疫苗經(jīng)不同時(shí)間保存后測定，3批疫苗接種豚鼠后，能引起良好的免疫反應(yīng)，HI抗體效價(jià)均＞1:64。

表2 豬細(xì)小病毒病、豬偽狂犬病二聯(lián)滅活疫苗保存期試驗(yàn)無菌檢驗(yàn)結(jié)果

表3 豬細(xì)小病毒血清HI抗體效價(jià)測定結(jié)果

2.3.2 豬偽狂犬病毒

以不同保存時(shí)間的疫苗，每批疫苗各取3瓶混合后接種豬5頭，頸部肌肉注射，3 mL·頭-1，于注苗后28 d，連同對照豬10 頭一起采血，檢測血清中和抗體指數(shù)，結(jié)果見表4。

由表4 可知，疫苗在2～8 ℃條件下、經(jīng)過不同時(shí)間保存后測定，3批疫苗接種豬后，均能引起良好的免疫反應(yīng)，血清中和抗體指數(shù)均＞316。

4 結(jié) 論

豬細(xì)小病毒病、豬偽狂犬病二聯(lián)滅活疫苗在2～8 ℃保存12個月物理性狀及無菌檢驗(yàn)均未發(fā)生變化，效力檢驗(yàn)合格。