葉遠玲 王瑞明 胡芳玉 朱滿剛

(杭州市中醫(yī)院急診科，浙江 杭州 310007)

厭食癥是指因心情低落、怕胖而過分拒食、節(jié)食，導致體重下降、營養(yǎng)不良甚至不愿意保持最低體重的一種心理障礙性疾病〔1〕。厭食癥好發(fā)于女性，女性患者占比約為95%，這類患者常在青少年時期出現(xiàn)類似性格傾向〔2〕。厭食癥的治療目前存在較多難題，疾病帶來的早亡率依然居高不下，達10%～20%，早亡原因多為營養(yǎng)不良導致的并發(fā)癥與精神抑郁引起的自殺行為〔3〕。目前，厭食癥的治療手段主要包括手術治療、西藥治療、精神治療、中藥治療、心理治療、推拿等，且以西藥治療與心理治療為主，二者常聯(lián)合展開，但效果仍不盡人意〔4,5〕。傳統(tǒng)醫(yī)學認為厭食癥是因飲食不節(jié)導致的脾失健運、脾胃不和、胃納失司導致，長時間食欲不振、食量減少〔6〕。厭惡進食等為主要表現(xiàn)，四季皆可發(fā)病，病程長，患者若接受有效且合理的治療一般預后良好，若早期誤診、誤治則不愈風險高，嚴重影響患者日常生活與工作，可見為厭食癥患者找到一種安全有效的治療用藥的臨床意義〔7〕。黃芪是一種延用多年的中藥材，研究證實，黃芪內(nèi)含有諸多活性成分，如蔗糖、多糖等，這些成分均屬于大分子物質(zhì)，富含銅、硒、鋅等諸多微量元素，在這些大分子物質(zhì)中，與黃芪多糖相關的研究較多，其藥理作用寬，具有提高免疫力、抑菌、清除氧自由基、調(diào)節(jié)腸胃功能之效〔8,9〕。結(jié)合厭食癥病情表現(xiàn)，考慮可將黃芪多糖用于疾病的治療中，但目前國內(nèi)并無此類研究報道。本研究建立厭食大鼠模型，為其使用黃芪多糖治療，分析黃芪多糖對厭食大鼠胃腸動力與氧自由基表達的影響。

1 材料與方法

1.1實驗條件 本實驗在浙江中醫(yī)藥大學動物實驗研究中心SPF級實驗室展開，全部大鼠均在不銹鋼鼠籠飼養(yǎng)，且均為單獨分開飼養(yǎng)，給予其特制、充足、常規(guī)喂養(yǎng)，自由飲水，飼養(yǎng)室溫為20～24℃，飼養(yǎng)相對濕度為30%～50%，換氣量為10～20次/h，采光均為日光燈明暗交替。實驗展開期間全部墊料與飼料均由浙江中醫(yī)藥大學動物中心提供。

1.2實驗動物 SPF級健康SD大鼠105只，體重50～70 g，平均(65.14±3.52)g；雌雄各半，均由浙江中醫(yī)藥大學SPF級實驗動物中心提供。

1.3實驗藥品 黃芪多糖，購自天津賽諾制藥有限公司，國藥準字：Z20040086，規(guī)格：250 mg/瓶。多潘立酮混懸液(嗎丁啉片)，購自西安楊森制藥有限公司，國藥準字：H10910003，規(guī)格：10 mg/片。江中健胃消食片，購自江中藥業(yè)股份有限公司，批準文號：H14051011，規(guī)格：500 mg/片。

1.4主要試劑 蘭州軍區(qū)陸軍總院提供10%水合氯醛，生工生物工程股份有限公司提供抑肽酶，天津市大茂化學試劑廠提供的冰醋酸，天津市德恩化學試劑有限公司提供的氫氧化鈉，上海生工生物工程股份有限公司提供的羥甲基纖維素鈉，制備營養(yǎng)性半固體糊：取羥甲基纖維素鈉16 g置入400 ml蒸餾水內(nèi)，分別向內(nèi)加入糖12.8 g、奶粉25.6 g、淀粉12.8 g與50.7 g 10%活性炭粉末，均勻攪拌，配制為300 g約300 ml碳末半固體糊狀物，放于4℃冰箱內(nèi)冷藏，在使用時置入室溫下恢復。酶聯(lián)免疫吸附試劑盒由北京解放軍總醫(yī)院東亞免疫技術研究所提供。

1.5主要儀器 常熟市天量儀器公司提供電子天平，河南原陽振華公司提供動物手術器械箱及動物固定器，長沙平凡公司提供的臺式高速離心機，美國雷杜公司提供全自動酶標儀，長沙湘平科技公司提供電子分析天平，青海海爾電器提供超低溫保存箱，澳大利亞Dynamica公司提供冷凍離心機、燒杯、試管、灌胃針等。

1.6方法

1.6.1分組方法 SPF級健康SD大鼠105只，將其中15只作為空白對照組，其他90只作為建模組，空白對照組給予常規(guī)飼養(yǎng)與自由飲水，建模組喂養(yǎng)特制飼料、自由飲水；經(jīng)隨機數(shù)字表法將建模組分為6組，模型組：不給藥；中成藥對照組：給予江中健胃消食片；西藥對照組：給予嗎丁啉；黃芪多糖低劑量組：給予低劑量黃芪多糖；黃芪多糖中劑量組：給予中劑量黃芪多糖；黃芪多糖高劑量組：給予高劑量黃芪多糖。

1.6.2制備模型 使用病因模擬法〔10〕制備模型。制作特制飼料：按照相應比例將新鮮肥肉、白糖、魚肉松、奶粉、玉米粉、鮮雞蛋、黃豆粉等混勻，捏為餅狀，烘干，放入4℃環(huán)境冷卻。給予空白對照組常規(guī)飼料喂養(yǎng)，其他組均喂養(yǎng)特制飼料，全部大鼠單籠飼養(yǎng)，自由飲水、進食，飼養(yǎng)時間為35 d，每日均需嚴格記錄大鼠體重及攝入量。制備模型成功標準參照文獻〔11〕：其他組大鼠攝入量較空白對照組大鼠平均下降20%～30%，或體重較空白對照組降低10%～15%。

1.6.3給藥方法與劑量 空白對照組不給藥，其他各治療組，劑量根據(jù)人與大鼠表面積比換算為等效劑量：低劑量組、中劑量組、高劑量組分別腹腔注射黃芪多糖100 mg/kg、200 mg/kg、300 mg/kg，將黃芪多糖注入0.5 ml 0.9%氯化鈉注射液腹腔注射；中成藥對照組給予0.576 g/kg江中健胃消食片溶劑灌服，西藥對照組給予1.03 mg/kg嗎丁啉溶劑灌服，1次/d。模型制備成功7 d后給予各組大鼠正常飼料常規(guī)喂養(yǎng)，并灌胃給藥或腹腔注射，連續(xù)給藥15 d，給藥結(jié)束后不禁水但禁食16 h，在第16天給予藥物注射或灌服40 min后給予各組2 ml半固體糊灌服，灌服20 min后對其實施脫椎人道處死，進行標本采集。

1.7觀察指標

1.7.1胃腸動力 (1)胃動素(MTL)：①血胃動素：處死大鼠前采血，采血前向每管內(nèi)加入20 μl/ml抑肽酶，由股動脈采集6 ml全血注入抗凝管內(nèi)搖勻置于4℃冰箱內(nèi)保存，3 h內(nèi)經(jīng)4 000 r/min轉(zhuǎn)速離心10 min，血漿分離，置于-80℃低溫冰箱保存待檢，參照試劑盒說明書，經(jīng)放射免疫法檢測外周血MTL表達。②下丘腦MTL：取血后將大鼠處死，即刻斷頭將全腦取出，放入沸騰生理鹽水中煮約5 min，將下丘腦分離出，分別使用分析天平稱重放入漿管內(nèi)，向內(nèi)加入1 ml醋酸，勻漿置入塑料試管置于室溫下，低溫離心，取上清液，使用放射免疫法檢測下丘腦MTL含量。(2)胃內(nèi)殘留率：迅速解剖死去大鼠，結(jié)扎取胃，使用濾紙擦拭后稱重，沿著胃大彎將胃體剪開，將胃內(nèi)容物洗去后擦拭干凈，稱重。將全胃重減去胃凈重則為胃內(nèi)殘留物之重，計算胃內(nèi)殘留率，胃內(nèi)殘留率=(全胃重-胃凈重)/灌碳末半固體糊重量×100%。(3)小腸推進率：將胃取出后迅速將腸系膜分離，將小腸取出，平鋪在白紙上，仔細測量幽門到盲腸部位的全長與幽門到碳末半固體糊前沿距離。小腸推進率=(碳末半固體糊小腸內(nèi)推進距離/小腸全長)×100%。

1.7.2氧自由基表達 取血于25℃環(huán)境下靜置30 min，經(jīng)3 000 r/min離心10 min，取上清液，使用全自動生化分析儀，經(jīng)酶聯(lián)免疫吸附試驗參照試劑盒說明書檢測超氧化物歧化酶(SOD)。

1.8統(tǒng)計學方法 應用SPSS20.0統(tǒng)計學軟件進行單因素方差分析、LSD-t檢驗。

2 結(jié) 果

2.1空白對照組與建模組實驗期間攝食量比較 攝食第1天兩組攝食量比較，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；攝食第7、14、21、28、35天，兩組攝食量均呈遞增趨勢，但建模組升高幅度不及空白對照組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表1。

2.2空白對照組與建模組實驗期間體重比較 攝食第1、7、14、21、35天兩組體重比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；攝食第28天，建模組大鼠體重明顯低于空白對照組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表2。

表1 空白對照組與建模組實驗期間攝食量比較

表2 空白對照組與建模組體重比較

2.3各組胃腸動力相關指標水平比較 模型組胃內(nèi)殘留率最高，后由高至低依次為黃芪多糖低劑量組、中成藥對照組、空白對照組、西藥對照組、黃芪多糖中劑量組、黃芪多糖高劑量組，組間整體比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，經(jīng)組間兩兩比較發(fā)現(xiàn)，空白對照組、中成藥對照組、黃芪多糖低劑量組組間兩兩比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；其他組間兩兩比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。7組大鼠中，黃芪多糖高劑量組小腸推進率最高，后由高至低依次為黃芪多糖中劑量組、西藥對照組、空白對照組、中成藥對照組、模型組，組間整體比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，經(jīng)組間兩兩比較發(fā)現(xiàn)，空白對照組、中成藥對照組、黃芪多糖低劑量組組間兩兩比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；其他組間兩兩比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表3。

表3 各組胃腸動力相關指標水平比較

與空白對照組比較:1)P<0.05；與模型組比較:2)P<0.05；與中成藥對照組比較:3)P<0.05；與西藥對照組比較:4)P<0.05；與黃芪多糖低劑量組比較:5)P<0.05；與黃芪多糖中劑量組比較:6)P<0.05，下表同

2.4各組MTL比較 黃芪多糖高劑量組大鼠外周血、下丘腦MTL表達均最高，其次為黃芪多糖中劑量組、西藥對照組、空白對照組、中成藥對照組、黃芪多糖低劑量組、模型組，組間比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；空白對照組、中成藥對照組、黃芪多糖低劑量組3組組間兩兩比較，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。見表4。

2.5各組SOD水平比較 空白對照組SOD水平最高〔(95.41±8.21)U/ml〕，其次為黃芪多糖高劑量組〔(81.02±1.11)U/ml〕、黃芪多糖中劑量組〔(76.14±1.02)U/ml〕、中成藥對照組〔(62.24±3.12)U/ml〕、西藥對照組〔(61.96±2.54)U/ml〕、黃芪多糖低劑量組〔(60.95±2.62)U/ml〕、模型組〔(48.91±3.20)U/ml〕，組間比較差異有統(tǒng)計學意義(F=243.507,P<0.001)。中成藥對照組、西藥對照組、黃芪多糖低劑量組三組組間兩兩比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。

表4 各組MTL表達比較

3 討 論

目前為大鼠使用甲狀腺素片長時間喂養(yǎng)、向其腹腔或腦室內(nèi)注射CCK-8等均是致大鼠厭食主要手段，此外，運動限制、飲食等也可建立厭食癥大鼠模型。近年來，國內(nèi)多參照汪受傳教授建立的病因模擬法制備大鼠模型，相較于其他模型的建立該方法穩(wěn)定性更好。本研究參照該方法制作特殊飼料對大鼠進行喂養(yǎng)，模擬老年人群在日常生活中不合理飲食、營養(yǎng)搭配不當?shù)臓顟B(tài)，該狀態(tài)與厭食癥中醫(yī)病因機制基本一致，且在實驗開展期間讓大鼠自由飲水進食，這同臨床實際更相近，得到的數(shù)據(jù)結(jié)果也更具合理性。

厭食癥是多發(fā)病、常見病，其患病機制復雜多樣，以喂養(yǎng)不當、飲食不節(jié)較多見，脾胃不和、納化失職是其主要病機〔12～14〕。針對這一病機推測厭食癥治療全程應保證運脾和胃方法貫穿始終。黃芪是一味常用中藥，該藥味甘性溫，可補氣升陽、托毒排膿、固表止汗、生肌〔15〕。在我國藥典中有規(guī)定，黃芪作為藥物使用有兩種，包括膜莢黃芪干燥根與豆科植物蒙古黃芪干燥根。近幾年隨著中醫(yī)藥方面研究的深入，現(xiàn)代藥理研究發(fā)現(xiàn)，黃芪中除了富含黃酮、黃芪甲苷等具有較強活性的小分子化合物外，大分子化合物如黃芪多糖等也同樣具有諸多方面的藥用活性，在緩解食欲不振、增強機體免疫力方面均有一定應用價值〔16，17〕。本研究結(jié)果顯示，黃芪多糖高劑量組大鼠胃腸動力改善效果最佳，且氧自由基表達較其他組大鼠更接近空白對照組，提示黃芪多糖用于厭食大鼠有著理想的增強大鼠胃腸動力之效，大鼠氧自由基表達明顯改善。究其原因可能與黃芪多糖抗應激、抗氧化機制有關，該結(jié)果也從側(cè)面提示了黃芪多糖對厭食大鼠胃腸損傷的改善效果，尤其是該劑量黃芪多糖的應用更利于提高大鼠食欲，改善其食欲不振的情況，對其胃腸還有一定保護效果〔18，19〕。MTL是一種消化間期激素，屬于腦腸肽激素，其主要對胃與腸道的動力產(chǎn)生生理作用，誘發(fā)小腸分節(jié)運動與胃收縮，還能刺激胃液分泌與胃蛋白酶分泌，幫助食物消化〔20〕。故血中MTL含量可直接用于評估機體胃腸道的功能狀態(tài)與運動狀態(tài)。本研究結(jié)果顯示黃芪多糖高劑量組血中、下丘腦中MTL含量均高于其他組大鼠，提示高劑量黃芪多糖能改善厭食大鼠胃腸功能，幫助胃排空，改善脾虛之證，幫助厭食大鼠食欲提升。

綜上所述，黃芪多糖利于促進厭食癥大鼠小腸推進與胃排空功能加強與氧自由基表達改善，對提高患者血內(nèi)、下丘腦內(nèi)氧化自由基表達有重要應用價值，可能是治療厭食癥的機制之一。