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        血清IL-35在評估核苷(酸)類似物治療慢性乙型肝炎中的臨床應(yīng)用

        2019-09-02 02:17:16馮霞劉貴章趙登蘊李聲方
        肝臟 2019年8期
        關(guān)鍵詞:血清研究

        馮霞 劉貴章 趙登蘊 李聲方

        我國是乙型肝炎病毒感染的高發(fā)地區(qū),每年大約100萬人口死于HBV感染相關(guān)疾病,同時用于防治乙型肝炎的費用也是國家財政支出的重要組成部分[1-2]??梢娨倚透窝撞《靖腥疽讶怀蔀橥{我國公共衛(wèi)生健康的主要疾病種類。

        目前慢性乙型肝炎抗病毒藥物包括核苷(酸)類似物(NAs)及干擾素,核苷(酸)類似物可提高HBV-DNA轉(zhuǎn)陰率, 且人均成本遠(yuǎn)低于干擾素。本研究從血清炎癥因子及免疫系統(tǒng)方面出發(fā),評價兩者指標(biāo)在NAs治療慢性乙型肝炎方面的實用性,從而為臨床治療慢性乙型肝炎肝炎的診療提供理論基礎(chǔ)。

        資料與方法

        一、 一般資料

        選取2016 年1月至2017年12月我院感染科收治的慢性乙型肝炎患者60例, 核苷酸類似物治療后是否復(fù)發(fā)分為復(fù)發(fā)組和未復(fù)發(fā)者,同時抽取門診健康體檢者30例作為對照組。慢性乙型肝炎患者的診斷符合《慢性乙型肝炎防治指南》(2015年更新版)。納入標(biāo)準(zhǔn):(1)年齡>18周歲者;(2)無肝硬化者;(3)無合并其他器官功能不全者(心、腦、肺);(4)自愿參加本項研究并配合隨訪;(5)核苷(酸)類似物治療;排除標(biāo)準(zhǔn):(1)合并其他肝炎病毒感染者;(2)合并梅毒、HIV等病毒感染者;(3)合并其他部位腫瘤者;(4)合并免疫系統(tǒng)疾病者;(5)住院前兩周無感染者;(6)住院前使用免疫抑制劑者。兩組患者均對此研究知情同意并簽署同意書,本研究經(jīng)本院倫理委員會批準(zhǔn)通過。

        二、方法

        (一)臨床治療方法 我院感染科對患者采取恩替卡韋對乙肝患者進(jìn)行治療,劑量為0.5 mg,1次/d,空腹口服。停藥標(biāo)準(zhǔn):HBeAg陽性者連續(xù)治療至HBeAg血清學(xué)轉(zhuǎn)換、ALT復(fù)常、HBV DNA低于檢測下限即100 IU/mL后繼續(xù)給予3年的維持治療;HBeAg陰性者連續(xù)治療至HBsAg消失且HBV DNA檢測不到后繼續(xù)給予1年的維持治療。復(fù)發(fā)標(biāo)準(zhǔn):達(dá)治療結(jié)束時應(yīng)答,但停藥后定期隨訪復(fù)查HBV DNA >1×103IU /mL。

        (二)炎癥因子檢測方法 記錄乙肝患者治療前后的及對照組研究對象血清IL-35、TNF-α及IL-10變化,具體檢測方法:獲取患者治療前及治療后外周靜脈血,量約6~8 mL,加入抗凝管,然后放入離心機(jī),3 000 r/分的速度離心,分離上清液,放入-80℃保存?zhèn)溆?,?yīng)用酶聯(lián)免疫吸附法試劑盒檢測IL-6、TNF-α及IL-10的血清含量,具體操作方法按照試劑盒的方法操作。

        (三)CD4+/CD8+比值 抽取外周靜脈血3~5 mL, 采用EDTA-K2抗凝, 常規(guī)采用淋巴細(xì)胞分離液常規(guī)分離血細(xì)胞及淋巴細(xì)胞,分離成功后待檢。然后按照操作說明書進(jìn)行T細(xì)胞亞群的測定。CD4+/CD8+比值正常值在1.2~1.7之間,低于最低下限認(rèn)為機(jī)體免疫功能受到了影響。

        三、統(tǒng)計方法

        所有數(shù)據(jù)均使用SPSS 20.0統(tǒng)計學(xué)分析軟件對其進(jìn)行分析,計量資料采用平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(Mean±s)表示,組間計量比較方差分析,組間率的比較采用卡方檢驗。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

        結(jié) 果

        一、乙型肝炎患者與對照組對象基線資料比較

        本研究結(jié)果顯示,慢性乙型肝炎組男性患者為40例,女性患者為20例,平均年齡(42.63±11.48)歲,對照組研究對象男性20例,女性10例,平均年齡(41.95±10.97)歲,兩組研究對象在年齡、性別、高血壓(10 vs 7)、糖尿病(9 vs 6)等方面無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),具有可比性。詳見表1。

        二、各研究對象血清TNF-α及IL-10以及CD4+/CD8+比值變化

        本研究結(jié)果顯示慢性乙型肝炎患者感染者患者血清TNF-α(7.65±1.22 ng/L vs 4.48±2.33 ng/L)及IL-10(9.92±1.45 ng/L vs 5.64±1.59 ng/L)水平顯著高于研究對照組(allP<0.05),同時CD4+/CD8+比值低于對照組(0.69±0.11 vs 1.22±0.38,P<0.05),可見乙肝病毒會引起機(jī)體的炎性反應(yīng)并影響患者的免疫系統(tǒng)。

        三、各研究對象血清IL-35水平變化

        本研究結(jié)果顯示,慢性乙型肝炎患者血清IL-35水平高于正常健康者(8.59±0.21 vs 5.38±0.18,P<0.05),此外,復(fù)發(fā)者血清IL-35水平高于未復(fù)發(fā)者(10.37±1.97 vs 8.46±1.35,P<0.05),可見IL-35可以作為動態(tài)監(jiān)測慢性乙型肝炎患者預(yù)后的指標(biāo)。

        四、復(fù)發(fā)組患者于未復(fù)發(fā)組患者相關(guān)資料比較

        本研究結(jié)果顯示本組共有16例患者復(fù)發(fā),44例患者未復(fù)發(fā)病情控制尚好,其中復(fù)發(fā)組年齡及病程均與未復(fù)發(fā)組之間存在差異,說明年齡及病程因素是慢性乙型肝炎病毒感染患者復(fù)發(fā)的危險因素。詳見表1。

        表1 復(fù)發(fā)組與未復(fù)發(fā)組患者資料比較

        討 論

        乙肝病毒侵入機(jī)體后,會刺激機(jī)體炎性細(xì)胞產(chǎn)生諸如白細(xì)胞介素-10,TNF-α及IL-35[3]。而IL-35作為一種新發(fā)現(xiàn)的趨化因子,在乙肝病毒的發(fā)生發(fā)展過程中作用也逐漸研究明了。IL-35作為IL-12的家族成員,但其不是由巨噬細(xì)胞分泌,而是由其T淋巴細(xì)胞分泌,可見IL-35可作為乙肝病毒感染的第一反應(yīng)因子。而本研究結(jié)果顯示了乙肝病毒感染者血清IL-35的含量明顯高于健康體檢者,同時復(fù)發(fā)者的血清IL-35的水平也高于未復(fù)發(fā)者,可見IL-35在監(jiān)測乙肝病毒感染方面具有重要應(yīng)用意義,與之前的研究結(jié)果類似[4]。

        IL-35入血后,通過機(jī)體特定的信號通路,與T細(xì)胞表面的受體結(jié)合,從而產(chǎn)生新型的免疫細(xì)胞,從而起到了強烈的免疫抑制作用[5]。在乙型肝炎免疫方面,IL-35抑制CD4+T細(xì)胞分化成為Th17細(xì)胞,從而減弱了機(jī)體清除乙肝病毒的能力,此外,IL-35誘導(dǎo)T淋巴細(xì)胞分化為CD8+T,從而使CD4+/CD8+比值下降[6]。而本研究結(jié)果顯示乙肝感染患者的CD4+/CD8+比值低于健康對照組,證實了乙肝病毒對免疫系統(tǒng)的影響,可能與IL-35的作用相關(guān),既往的研究也得出了類似的結(jié)論[7]。

        體外實驗證明了IL-35可顯著增加用PCR-Elase 技術(shù)檢測體外CD4+T 細(xì)胞培養(yǎng)液IL-10的含量[8]。而本研究結(jié)果也證實了慢性乙型肝炎病毒的患者的血清IL-10水平明顯高于對照組,佐證了既往的研究結(jié)果[9]。而有研究證實了乙肝病毒可誘導(dǎo)單核細(xì)胞產(chǎn)生TNF-α,可見TNF-α是機(jī)體早期應(yīng)答的主要表現(xiàn)[10]。而IL-35也可促進(jìn)單核細(xì)胞分泌TNF-α,從而提高機(jī)體的應(yīng)答,而本研究結(jié)果也顯示乙肝病毒感染者的血清TNF-α水平高于健康對照組,證實了國內(nèi)王玉澤的研究結(jié)果[11]。在慢性乙型肝炎感染者復(fù)發(fā)方面,由于年齡及病程因素,機(jī)體的免疫系統(tǒng)能力逐漸下降,從而增加了乙肝病毒復(fù)發(fā)的幾率,而本研究也證實了復(fù)發(fā)組患者的年齡與病程均較未復(fù)發(fā)者長,證實了兩者在乙肝病毒復(fù)發(fā)方面的影響,和國內(nèi)王傳敏發(fā)現(xiàn)的結(jié)論一致[12]。

        總而言之,IL-35在診療慢性乙型肝炎方面具有良好的臨床效果,但具體機(jī)制未知。此外,本研究兩組患者的遠(yuǎn)期的隨訪結(jié)果及樣本量的進(jìn)一步補充則需要更長時間的隨訪以及多中心合作來完成,最后,慢性乙型肝炎病毒的復(fù)發(fā)的相關(guān)風(fēng)險因素的完善也有待我們下一步研究的方向。

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