施陽(yáng)陽(yáng) 蒲 彬 劉燕林 葉瑞興 盧 紅 吳麗莉 左少純

(1.新疆和田蠶?？茖W(xué)研究所，新疆 和田 848000； 2.新疆和田玉圣科技有限責(zé)任公司，新疆 和田 848000)

桑黃因寄生于桑樹(shù)等闊葉樹(shù)上的一種多年生藥用真菌而得名，別稱桑臣、桑耳、桑黃菇[1]，又稱作“森林黃金”?！侗静菥V目》和《中藥大辭典》等均有記載桑黃的藥用功效，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)證明，桑黃具有滋補(bǔ)強(qiáng)壯、延年益壽、養(yǎng)生美容、提高機(jī)體免疫等功效，不同樹(shù)種的桑黃活性物質(zhì)含量差異較大，以桑樹(shù)桑黃含量最高[2-4]。桑黃多糖能抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移，是國(guó)際公認(rèn)的最有效抗癌真菌，具有較大的藥用價(jià)值和開(kāi)發(fā)潛力[5]。桑枝富含纖維素、粗蛋白等多種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，同時(shí)桑枝富含有鐵、鈣、銅等16種礦物質(zhì)元素，尤其以硒的含量高。作為蠶桑副產(chǎn)物，試驗(yàn)用桑枝栽培桑黃,不僅是開(kāi)拓了一條變廢為寶的途徑,而且對(duì)促進(jìn)蠶桑產(chǎn)業(yè)實(shí)現(xiàn)可持續(xù)發(fā)展具有重要的意義。

1 材料與方法

1.1 供試菌株

野生桑樹(shù)桑黃采自新疆南部地區(qū)桑樹(shù)上，取子實(shí)體內(nèi)部組織，經(jīng)分離接種至PDA培養(yǎng)基培養(yǎng)得到桑黃母種。經(jīng)DNA測(cè)序法鑒定[6-8]，測(cè)序結(jié)果經(jīng)美國(guó)國(guó)立生物技術(shù)信息中心(National Center of Biotechnology Information, NCBI)數(shù)據(jù)庫(kù)比對(duì)，與數(shù)據(jù)庫(kù)桑黃菌種相似度為98%，經(jīng)分離鑒定，結(jié)合文獻(xiàn)資料，判定該野生桑樹(shù)桑黃為Inonotuslinteus[9]，與裂蹄木層孔菌(Phellinuslinteus)為同種異名。

1.2 供試材料

新鮮桑枝木屑經(jīng)堆積發(fā)酵7d處理，棉籽殼、麩皮、白砂糖、石膏粉、生石灰。

圖1 野生桑黃的采集與分離

1.3 供試培養(yǎng)基

試驗(yàn)設(shè)5配方組配方(表1)，每配方組500袋，桑樹(shù)品種為和田白桑，選用新鮮、干燥、無(wú)霉變、無(wú)蟲(chóng)蛀的桑枝，粉碎備用。

表1 供試培養(yǎng)基配方

注：“-”表示未添加。

1.4 試驗(yàn)方法

1.4.1 栽培袋的制作及接種

先將桑枝屑、棉籽殼和麩皮按比例均勻混合，將白砂糖、石膏粉、生石灰溶解后拌入培養(yǎng)料中，含水量調(diào)制50%～65%，pH調(diào)制6.0～7.0，充分?jǐn)嚢杈鶆?，選用高壓聚丙烯菌袋(17.00cm×38.00cm×0.05cm)，裝袋(每袋料重500g),常規(guī)滅菌100℃，12h，滅菌完畢后，待料冷卻下來(lái)后，取出進(jìn)行接種。

1.4.2 菌絲培養(yǎng)及生長(zhǎng)情況觀察

將接種后的菌袋，置于室內(nèi)按常規(guī)進(jìn)行避光培養(yǎng),室溫控制在20℃～28℃,空氣相對(duì)濕度65%～70%,每隔7d翻1次菌袋，觀察菌絲的生長(zhǎng)情況，若有雜菌出現(xiàn),及時(shí)將感染雜菌的菌袋移開(kāi)。

1.4.3 桑黃子實(shí)體和孢子生長(zhǎng)情況觀察

當(dāng)菌絲長(zhǎng)滿菌袋時(shí)進(jìn)行出黃管理, 出黃管理要采用噴霧設(shè)施給予桑黃補(bǔ)濕，觀察子實(shí)體和孢子的生長(zhǎng)情況,若有雜菌或病蟲(chóng)害出現(xiàn),要及時(shí)進(jìn)行處理或防治。

1.4.4 采收

當(dāng)桑黃菌蓋不再增大，此時(shí)應(yīng)采收。統(tǒng)計(jì)時(shí)每配方組隨機(jī)選取50袋的桑黃子實(shí)體，于60℃烘干至恒重，用于產(chǎn)量和質(zhì)量的分析。

1.4.5 數(shù)據(jù)的測(cè)定和處理

桑黃的生物學(xué)轉(zhuǎn)化率=(鮮子實(shí)體重/培養(yǎng)料干重)×100%。桑黃子實(shí)體多糖測(cè)定，用硫酸-蒽酮分光光度法方法進(jìn)行[10]，所有數(shù)據(jù)均采用spss13.0系統(tǒng)進(jìn)行整理和統(tǒng)計(jì)分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同培養(yǎng)基的桑黃菌絲生長(zhǎng)情況

從表2中可以看出，除了C配方組和D配方組的菌絲平均生長(zhǎng)比對(duì)照配方組的慢，其他配方組的菌絲平均生長(zhǎng)速度均大于對(duì)照配方組，A配方組菌絲平均生長(zhǎng)速度最快，為0.36 cm·d-1，D配方組的菌絲平均生長(zhǎng)速度最慢為0.27 cm·d-1。隨著桑枝屑量的減少，桑黃菌絲生長(zhǎng)速度隨之下降，添加桑枝屑的A配方組和B配方組的菌絲生長(zhǎng)狀況優(yōu)于對(duì)照配方組。除A配方組的感染雜菌率低于對(duì)照組為2%，其他配方組均高于對(duì)照組，隨著麥麩的添加量的增加感染雜菌率逐漸增多，D配方組的染菌率最高，為11%。

表2 不同培養(yǎng)基的菌絲生長(zhǎng)情況

2.2 不同培養(yǎng)基的桑黃子實(shí)體和孢子生長(zhǎng)情況

各培養(yǎng)基的桑黃子實(shí)體均能正常生長(zhǎng),形狀為半圓形,偶見(jiàn)馬蹄形,外觀形態(tài)正，光澤均勻一致,形態(tài)特征正常。從表3中可以看出，除了C配方組和D配方組的桑黃子實(shí)體的速度小于對(duì)照配方組，其他配方組的桑黃子實(shí)體生長(zhǎng)速度均大于對(duì)照配方組，且隨著桑枝屑量的增加，桑黃子實(shí)體的生長(zhǎng)速度相應(yīng)增加，各配方組出黃率均在92.0%以上，而A配方組的桑枝屑培養(yǎng)基桑黃的出黃率最高，達(dá)到99.8%。

表3 不同培養(yǎng)基的子實(shí)體和孢子生長(zhǎng)情況

2.3 不同培養(yǎng)基的桑黃產(chǎn)量和質(zhì)量比較

從表4可以看出，A配方組、B配方組的桑黃子實(shí)體平均產(chǎn)量、子實(shí)體最高產(chǎn)量、平均生物學(xué)轉(zhuǎn)化率均高于對(duì)照配方組，而C配方組、D配方組的桑黃子實(shí)體平均產(chǎn)量、子實(shí)體最高產(chǎn)量、平均生物學(xué)轉(zhuǎn)化率均低于對(duì)照配方組，各配方組分的子實(shí)體多糖含量卻都高于對(duì)照配方組，隨著桑枝屑量的減少，各配方組的桑黃子實(shí)體平均產(chǎn)量、子實(shí)體總產(chǎn)量、平均生物學(xué)轉(zhuǎn)化率有所降低。

表4 不同培養(yǎng)基的桑黃產(chǎn)量和質(zhì)量

3 小結(jié)與討論

試驗(yàn)結(jié)果表明,隨著桑枝屑代料中的桑枝屑量的增加，各配方組桑黃菌絲生長(zhǎng)速度、桑黃子實(shí)體的生長(zhǎng)速度、桑黃子實(shí)體平均產(chǎn)量、子實(shí)體最高產(chǎn)量、平均生物學(xué)轉(zhuǎn)化率均相應(yīng)的增加，桑枝屑添加量為80%時(shí)，其生物學(xué)轉(zhuǎn)化率和產(chǎn)量最高，因此可以得出桑枝屑代料培養(yǎng)基栽培桑黃的最佳配方組為A配方組，在以后的生產(chǎn)中，桑枝屑的添加量控制在80%以內(nèi)為宜。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果還表明,桑枝屑代料栽培的桑黃的多糖含量卻顯著性高于對(duì)照配方組,而多糖正是桑黃最主要的藥理活性成分,原因之一是桑枝中營(yíng)養(yǎng)成分豐富,存在多糖、維生素、微量元素等特殊誘導(dǎo)因子,促進(jìn)桑黃胞外多糖的合成。