黃傳書 趙 珮 黃先智 唐小平 劉 艷 雷 霆 羅 莉

(1. 重慶市蠶業(yè)科學(xué)技術(shù)研究院，重慶 400700；2.西南大學(xué)蠶學(xué)與系統(tǒng)生物學(xué)研究所，重慶400716；3.西南大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，重慶 400716)

桑葉蛋白質(zhì)含量高，并具降糖、降脂、消炎抗菌等作用，能提高畜禽水產(chǎn)動(dòng)物的免疫力，在健康養(yǎng)殖方面具有巨大的發(fā)展?jié)摿?。研究發(fā)現(xiàn)：桑葉除含有豐富的礦物質(zhì)及維生素外，還含有許多特殊功效的天然活性物質(zhì)成分。100g干物質(zhì)含甾醇46mg(比綠茶高3～4倍)，還含有異槲皮苷200～500mg、槲皮苷30mg、槲皮苦素100mg等能抑制脂質(zhì)氧化作用的黃酮類物質(zhì)。在飼料中添加10%的桑葉不會(huì)影響羅非魚的生長(zhǎng)性能,同時(shí)可有效調(diào)節(jié)羅非魚的脂質(zhì)代謝,改善其肌肉品質(zhì)[1]，發(fā)酵桑葉能劑量依賴性地降低高脂血癥羅非魚的血脂、血糖水平，提高機(jī)體的抗氧化能力[2]，飼料中添加MLM和FMLM對(duì)胡須雞有降低血脂含量、增強(qiáng)免疫力、提高抗氧化能力等作用[3]，發(fā)酵桑葉粉替代50%的魚粉時(shí)，巴塔野鯪的增重率、特定生長(zhǎng)率明顯高于對(duì)照組[4]，在草魚飼料中添加5%桑葉粉對(duì)其生長(zhǎng)性能無顯著影響，當(dāng)桑葉粉含量達(dá)到10%時(shí)，其生長(zhǎng)性能受到抑制[5]。

草魚是中國重要的淡水養(yǎng)殖經(jīng)濟(jì)魚類，產(chǎn)量位居全國淡水養(yǎng)殖之首，在集約化水產(chǎn)養(yǎng)殖過程中，普遍采用提高飼料脂肪水平以節(jié)約蛋白質(zhì)的策略，以達(dá)到促進(jìn)魚類生長(zhǎng)，減少氮磷排放，保護(hù)養(yǎng)殖水體環(huán)境的目的。由于草魚攝食量大、對(duì)能量的需求低以及對(duì)高脂飼料利用能力低，飼料中脂肪水平過高時(shí)容易導(dǎo)致魚體脂肪沉積過多、機(jī)體抗氧化能力下降，脂質(zhì)過氧化程度加重，甚至導(dǎo)致高脂血癥和營養(yǎng)性脂肪肝的發(fā)生，危害魚類的生長(zhǎng)。本研究以草魚幼魚為試驗(yàn)對(duì)象，研究桑葉發(fā)酵飼料對(duì)投喂高脂飼料的草魚生長(zhǎng)、肌肉營養(yǎng)組成、血液指標(biāo)、肝臟脂肪含量、抗氧化能力的影響，旨在為探索解決高脂飼料導(dǎo)致草魚脂肪沉積增多、抗氧化能力降低及脂質(zhì)代謝紊亂等問題，為草魚的健康養(yǎng)殖提供數(shù)據(jù)參考。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗(yàn)飼料

桑葉粉(桐鄉(xiāng)青高溫殺青烘干)、進(jìn)口魚粉、菜籽粕、棉籽粕、豆渣(豆粕)、面粉、維生素和礦物質(zhì)混合料、發(fā)酵劑。

1.1.2 試驗(yàn)魚苗

從漁場(chǎng)購0.55kg左右大小草魚苗，配0.52kg左右白鰱，整理前魚池內(nèi)鯽魚、鯉魚留大小比較均勻若干尾(共9.10kg)。

1.2 養(yǎng)殖魚塘

實(shí)驗(yàn)魚塘為重慶市蠶業(yè)科學(xué)研究院果桑品種比較試驗(yàn)園100m2水面魚池。于2017年9月12日清塘，用鮮石灰全池均勻撒布消毒，用鐵絲網(wǎng)將魚池均分為2等分，保證兩邊魚苗(草魚、鯽魚、白鰱等)不能混，只有水可以兩邊流動(dòng)，兩邊魚池分別放置長(zhǎng)、寬1.2m×0.8m的活動(dòng)飼料臺(tái)，便于每日飼料食下情況觀察記錄，魚池準(zhǔn)備完畢關(guān)水15d左右投放魚苗。

1.3 魚苗投放

2017年9月26日，從市場(chǎng)購買0.55kg左右大小的草魚苗50尾、0.52kg左右大小的白鰱12尾及原池中鯽魚(鯉魚)共9.10kg，分別放在鐵絲網(wǎng)分隔的兩邊魚池，2d后開始按比較試驗(yàn)設(shè)計(jì)投放飼料。

1.4 精飼料配制

(1)處理組(CL)：桑葉粉混合發(fā)酵飼料,按干物重量比，魚粉4.9%～5.3%、豆渣19.0%～22.0%、豆粕38.0%～42.0%、棉籽粕26.0%～28.0%、維生素與礦物質(zhì)預(yù)混料0.8%～1.2%、桑葉粉3.0%～5.0%、發(fā)酵劑0.2%。

(2)對(duì)照組(CK)：無桑葉粉發(fā)酵飼料，按干物重量比，魚粉4.9%～5.3%、豆渣19.0%～22.0%、豆粕38.0%～42.0%、棉籽粕26.0%～28.0%、維生素與礦物質(zhì)預(yù)混料0.8%～1.2%、面粉3.0%～5.0%、發(fā)酵劑0.2%。

按食用草魚飼料國家標(biāo)準(zhǔn)(GB/T36205-2018)粗蛋白≥20.0%、粗脂肪≥2.0%、灰分≤13.0%，達(dá)到所配混合飼料粗蛋白36.0%～37.5%、粗脂肪3.7%～3.9%、灰分7.0%～10.0%、總能量11.5～12.0MJ/kg。

將上述飼料混合均勻，在25℃～28℃下，發(fā)酵48h干燥備用。

1.5 飼養(yǎng)

對(duì)照組(CK)用青草+無桑葉混合發(fā)酵飼料飼養(yǎng)，處理組(CL)用青草+桑葉粉混合發(fā)酵飼料，每天早上8:30和下午5:00各投放兩次飼料，每次投放飼料前，將上次投放飼料剩余量進(jìn)行測(cè)量記錄，便于計(jì)算食下量。

1.6 記錄與抽樣調(diào)查方法

1.6.1 記錄

記錄投放魚苗重量、每日天氣情況、飼料食下量、魚兒生長(zhǎng)情況等內(nèi)容。每次投放飼料前，將上次投放飼料全部清除并稱重，計(jì)算食下量，再根據(jù)上次食下量，確定下次飼料投放量。

1.6.2 抽樣調(diào)查

將魚塘所有魚全部清塘，并分類稱重，將未受傷草魚按CK和CL兩組分別放在充氧水箱，并在水箱放入適量MS-222 麻醉劑進(jìn)行麻醉減少草魚活動(dòng)，直接送到實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)肝臟組成、肉質(zhì)、風(fēng)味物質(zhì)、血清脂質(zhì)、肝臟抗氧化能力等指標(biāo)。

1.7 樣品的制備與分析

將取回樣品，禁食24h后稱重，每個(gè)重復(fù)隨機(jī)取4 尾魚，用MS-222進(jìn)行麻醉，剝離出內(nèi)臟、肝胰臟，用于肝體指數(shù)(HSI)和肝脂含量的測(cè)定; 每個(gè)重復(fù)另隨機(jī)取3尾魚于尾靜脈取血，于4000×g4℃條件下離心10min，收集血清，-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

血脂指標(biāo)均采用全自動(dòng)生化分析儀(日立7100)測(cè)定，包括血清總膽固醇(TCHO)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)含量。血清超氧化物歧化酶(SOD)和過氧化氫酶(CAT)活性以及丙二醛(MDA)含量采用試劑盒(南京建成生物工程研究所生產(chǎn))進(jìn)行測(cè)定。蛋白質(zhì)含量采用考馬斯亮藍(lán)法測(cè)定。

1.8 數(shù)據(jù)處理與分析

部分?jǐn)?shù)據(jù)采用SPSS22.0 對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析，差異較大數(shù)據(jù)直接用平均數(shù)比較。

2 結(jié)果與分析

2.1 桑葉粉混合發(fā)酵飼料能有效改善草魚肝臟健康

由表1可知，CL組草魚生長(zhǎng)速度、尾均重顯著高于對(duì)照。同時(shí)，CL組草魚肝體比和臟體比較CK組草魚比較，都有所下降，肝體比下降了71.7%，臟體比下降了30.1%，肥滿度CL組低于CK組，草魚體型優(yōu)美、鱗片緊實(shí)，形體接近于野生草魚形態(tài)，可能與添加桑葉量偏多有一定的關(guān)系，還需要進(jìn)一步優(yōu)化其添加量。

表1 桑葉發(fā)酵飼料對(duì)草魚形體指標(biāo)與尾增重影響比較

由表2可知，CK組草魚肝臟顏色偏淡，脂肪附著面積、脂肪厚度顯著高于CL組，CL組魚肝臟水分、肝臟脂肪、腸脂肪含量分別為73.80%、21.30%、8.86%，魚肝臟水分較CK組增加了6.26%；肝臟脂肪、腸脂肪分別較CK組下降了36.73%、54.38%，大幅改善了草魚脂肪肝的狀態(tài)，提高了草魚肝臟健康。

表2 桑葉發(fā)酵飼料對(duì)草魚肝臟脂肪的影響

2.2 桑葉粉混合發(fā)酵飼料能提高草魚肝臟抗氧化能力

機(jī)體中自由基清除酶主要包括超氧化物歧化酶(SOD)、過氧化氫酶(CAT)和谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)等。SOD可清除機(jī)體內(nèi)的超氧自由基，CAT和GSH-Px可清除機(jī)體內(nèi)的過氧化氫。丙二醛(MDA)是多不飽和脂肪酸過氧化的主要分解產(chǎn)物，是反映草魚氧化應(yīng)激的重要指標(biāo)。

由表3可知，CL組草魚與CK組草魚比較，肝臟總抗氧化能力(T-AOC)和T-SOD均有明顯增加， MDA明顯降低。飼料中添加發(fā)酵桑葉粉能極顯著提高草魚抗氧化能力，對(duì)草魚抗應(yīng)激、耐缺氧能力有較大的作用，從而促進(jìn)草魚生長(zhǎng)。

2.3 桑葉粉混合發(fā)酵飼料能有效調(diào)節(jié)血清脂肪代謝，促進(jìn)草魚健康

由表4可知，適量添加發(fā)酵桑葉粉飼養(yǎng)草魚，能有效調(diào)節(jié)其脂質(zhì)代謝，顯著降低草魚血清指標(biāo)中的總膽固醇、甘油三酯、葡萄糖含量(P<0.05)，能有效改善高能高脂飼料對(duì)草魚生長(zhǎng)的不利影響，促進(jìn)草魚健康。

表3 桑葉飼料對(duì)草魚抗氧化能力的影響

表4 桑葉飼料對(duì)草魚血清指標(biāo)的影響

2.4 桑葉粉混合發(fā)酵飼料能顯著提高肉質(zhì)及草魚風(fēng)味物質(zhì)

由表5和表6可知，CL組與CK組草魚比較，全魚水分、全魚灰分、全魚蛋白含量差異不顯著，但天冬氨酸、谷氨酸、丙氨酸、甘氨酸、酪氨酸等風(fēng)味氨基酸含量均有顯著的提高，風(fēng)味物質(zhì)肌苷酸含量提高19.78%、苷氨酸提高21.74%，CL組全魚脂肪含量顯著低于CK組，但肌肉脂肪含量差異不顯著，說明桑葉主要是降低內(nèi)臟脂肪，CL組草魚肌肉中的不飽和脂肪酸總量高于CK組108.00%，影響肉質(zhì)的油酸提高190.63%、亞油酸提高144.40%、亞麻酸提高14.29%,顯著提高了草魚的肉質(zhì)和風(fēng)味。

表5 桑葉飼料對(duì)草魚全魚和組織常規(guī)組成的影響

備注：水分外的其他成分(粗蛋白、粗脂肪和粗灰分)為干樣基礎(chǔ)。

表6 桑葉飼料對(duì)草魚肌肉風(fēng)味物質(zhì)含量比較

表7 桑葉飼料對(duì)草魚肉質(zhì)脂肪酸含量比較

3 討論

研究發(fā)現(xiàn)，鮮桑葉中含有一些防御蛋白、植物凝集素和丹寧等抗?fàn)I養(yǎng)因子，對(duì)水產(chǎn)動(dòng)物消化吸收造成負(fù)面影響，另外桑葉表面覆蓋蠟質(zhì)層，單胃動(dòng)物難以消化利用[4]。本次試驗(yàn)過程中發(fā)現(xiàn)，在用青草飼養(yǎng)草魚時(shí)，過多添加鮮桑葉對(duì)草魚生長(zhǎng)有一定影響，草魚消化不完全，同時(shí)草魚排泄物直接造成水面大量綠藻生長(zhǎng)，直接污染水質(zhì)，對(duì)草魚生長(zhǎng)有一定影響。飼料中添加75%的發(fā)酵桑葉養(yǎng)殖淡水鯰魚(Heteropneu-stesfossilis)不影響其生長(zhǎng)和飼料利用，用發(fā)酵桑葉粉替代50%的魚粉飼養(yǎng)巴塔野鱗增重率、特定生長(zhǎng)率顯著高于對(duì)照組，而且還展現(xiàn)出良好的飼料利用率[4]。本試驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，將適量桑葉粉與其他飼料成分混合共同發(fā)酵飼養(yǎng)草魚,草魚的健康性和生長(zhǎng)率明顯高于對(duì)照，且飼養(yǎng)過程中草魚耐缺氧能力明顯提高。因此，在用桑葉養(yǎng)殖草魚最好不用鮮桑葉直接飼養(yǎng)。

SOD主要清除氧自由基，減輕或避免自由基和脂質(zhì)過氧化物對(duì)動(dòng)物機(jī)體造成的損傷。而CAT將SOD清除活性氧時(shí)產(chǎn)生的過氧化氫(H2O2)轉(zhuǎn)化為水(H2O)，保護(hù)機(jī)體免受損傷，預(yù)防性給予發(fā)酵桑葉能夠增加高脂血癥羅非魚血清SOD和CAT活性以及CAT/SOD，降低血清MDA含量[2]。本試驗(yàn)結(jié)果也進(jìn)一步證實(shí)這種推斷，即飼料中添加發(fā)酵桑葉能顯著降低試驗(yàn)草魚血清指標(biāo)中的總膽固醇、甘油三酯、葡萄糖含量(P<0.05)，極顯著提高了草魚抗氧化能力，通過提高機(jī)體抗氧化能力及抑制脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，改善脂質(zhì)代謝功能，對(duì)改善草魚肝臟健康，提高草魚抗應(yīng)激、耐缺氧能力有較大的作用，從而達(dá)到提高草魚健康養(yǎng)殖。

用桑葉粉混合發(fā)酵飼料與常規(guī)飼料飼養(yǎng)草魚比較，影響魚肉風(fēng)味物質(zhì)天冬氨酸、谷氨酸、丙氨酸、甘氨酸、酪氨酸等含量顯著高于對(duì)照(P<0.05)，全魚脂肪含量顯著低于對(duì)照(P<0.05)，但肌肉脂肪不顯著，說明桑葉主要是降低內(nèi)臟脂肪，桑葉草魚肌肉中的不飽和脂肪酸總量高于對(duì)照組108.00%，影響肉質(zhì)的油酸高于對(duì)照190.63%、亞油酸高于對(duì)照144.40%、亞麻酸高于對(duì)照14.29%，說明桑葉發(fā)酵飼料飼養(yǎng)草魚不僅可以提高草魚養(yǎng)殖健康性，還可以提高草魚肉質(zhì)和風(fēng)味。

4 結(jié)論

適量添加桑葉粉混合發(fā)酵飼料，可以有效改善草魚肝臟健康，提高草魚抗氧化能力、抗體應(yīng)激能力，從而促進(jìn)草魚健康生長(zhǎng)。同時(shí)，還可以提高營養(yǎng)價(jià)值和風(fēng)味物質(zhì)。