胡晟，劉永國，陳翔

重慶市第四人民醫(yī)院肝膽外科，重慶400014

膽囊癌患者的預后較差，且生活質量明顯下降[1-2]。在對膽囊癌病情進展的內在機理進行研究的過程中發(fā)現(xiàn)，腫瘤調控蛋白的改變在膽囊癌病情進展過程中發(fā)揮重要作用。信號轉導蛋白和轉錄激活物3（signal transducer and activator of transcription 3，STAT3）的表達上調，能夠通過提高腫瘤細胞內腫瘤信號通路的激活程度，提高腫瘤基因的轉錄激活程度，進而促進膽囊上皮細胞的早期異常分裂[3]。多能蛋白聚糖（versican）的表達，能夠通過提高膽囊癌細胞對鄰近間質組織成分的黏附和浸潤能力，促進膽囊癌細胞的擴散和轉移[4]。本研究對膽囊癌患者膽囊癌組織中STAT3、versican蛋白的表達情況進行分析，并探討其與患者臨床特征的關系，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2014年1月至2017年7月重慶市第四人民醫(yī)院收治的膽囊癌患者。納入標準：①符合人民衛(wèi)生出版社《外科學》第8版中膽囊癌的診斷標準[5]；②經術后病理學檢查確診為膽囊癌；③年齡≤79歲；④TNM分期為Ⅰ～Ⅲ期。排除標準：①合并其他部位惡性腫瘤；②獲取標本前，患者具有放化療史。根據(jù)納入和排除標準，本研究共納入膽囊癌患者58例作為膽囊癌組。另外，選取同期因膽囊息肉于重慶市第四人民醫(yī)院行手術切除的膽囊息肉患者80例作為膽囊息肉組，所有患者均符合人民衛(wèi)生出版社《外科學》第8版中膽囊息肉的診斷標準[5]。膽囊癌組患者中，男28例，女30例；年齡47～76歲，平均（58.6±8.0）歲；組織學分化程度：高分化16例，中分化23例，低分化19例；有淋巴結轉移30例，無淋巴結轉移28例；TNM分期：I期14例，Ⅱ期23例，Ⅲ期21例。膽囊息肉組患者中，男40例，女 40例；年齡 43～79歲，平均（59.2±13.0）歲。收集膽囊癌組患者的膽囊癌組織標本進行研究，并選取膽囊息肉組患者的膽囊息肉組織標本作為對照。

1.2 檢測方法

采用免疫組化染色法檢測膽囊癌組織和膽囊息肉組織中STAT3、versican蛋白的表達。采用二甲苯將組織石蠟切片常規(guī)脫蠟至水，5%雙氧水常溫孵育10 min，采用磷酸鹽緩沖液孵育5 min，蒸餾水沖洗3次，每次5 min；5%山羊血清抗體封閉10 min，不沖洗，滴加一抗（購自英國Abcam公司，濃度1∶500），4℃冰箱孵育過夜，蒸餾水沖洗3次，每次5 min；滴加生物素標記的二抗（購自北京康泰生物，濃度1∶1000），37℃孵育30 min，蒸餾水沖洗3次，每次5 min；滴加第二代辣根過氧化物酶標記的工作液體，37℃孵育10 min，蒸餾水沖洗3次，每次5 min，顯色后采用乙醇脫水、二甲苯透明、樹膠封片，鏡下觀察。

1.3 判定標準

免疫組化染色評分標準：以細胞質內出現(xiàn)淡黃色、黃色、棕黃色、褐色或黑色顆粒為STAT3蛋白陽性表達，以細胞核或細胞質內出現(xiàn)黃色、橙色、棕色或褐色顆粒為versican蛋白陽性表達。根據(jù)染色強度進行評分：0分，未染色；1分，淡黃色；2分，棕黃色；3分，褐色、黑色。根據(jù)陽性細胞所占比例進行評分：1分，陽性細胞所占比例≤10%；2分，陽性細胞所占比例為11%～50%；3分，陽性細胞所占比例為51%～75%；4分，陽性細胞所占比例≥76%。將著色程度與陽性細胞所占比例評分相乘，最終得分＜3分為陰性，≥3分為陽性。

1.4 統(tǒng)計學方法

采用SPSS 21.0軟件對數(shù)據(jù)進行分析。符合正態(tài)分布的計量資料以均數(shù)±標準差（±s）表示，組間比較采用t檢驗；計數(shù)資料以例數(shù)和率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 STAT 3蛋白、versican蛋白表達情況的比較

膽囊癌組織中STAT3蛋白、versican蛋白的陽性表達率均明顯高于膽囊息肉組織，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）。（表1）

表1 不同組織中STAT 3蛋白、Versican蛋白陽性表達情況的比較[ n（%）]

2.2 膽囊癌組織中STAT 3蛋白、versican蛋白表達與膽囊癌患者臨床特征的關系

TNM分期為Ⅲ期、有淋巴結轉移的膽囊癌患者膽囊癌組織中STAT3蛋白的陽性表達率分別高于TNM分期為Ⅰ～Ⅱ期、無淋巴結轉移的患者，差異均有統(tǒng)計學意義（χ2=5.100、4.592，P＜0.05）；不同分化程度膽囊癌患者膽囊癌組織中STAT3蛋白的陽性表達率比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。TNM分期為Ⅲ期、分化程度為低分化、有淋巴結轉移的膽囊癌患者膽囊癌組織中versican蛋白的陽性表達率分別高于TNM分期為Ⅰ～Ⅱ期、分化程度為中高分化、無淋巴結轉移的患者，差異均有統(tǒng)計學意義（χ2=4.196、5.100、7.067，P＜0.05）。（表2）

表2 不同臨床特征膽囊癌患者膽囊癌組織中STAT 3蛋白、versican蛋白的陽性表達情況（ n=58）

3 討論

膽道系統(tǒng)基礎性疾病、膽囊息肉或有膽囊癌家族史等因素，均能夠促進膽囊癌的發(fā)生[6]。已有研究顯示，膽囊癌患者的5年生存率不足40%，膽囊癌患者接受綜合性治療方案治療后，總體生存時間不足38個月[7-9]。目前，臨床仍缺乏對膽囊癌患者病情評估的腫瘤相關指標。本研究通過對膽囊癌患者膽囊癌組織中STAT3、versican蛋白的表達情況進行分析，旨在揭示膽囊癌疾病進展機制的同時，為臨床上膽囊癌的病情評估提供新的參考指標。

STAT3是信號轉導相關因子，其表達水平升高時能夠通過激活下游絲裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase，MAPK）或信號轉導與轉錄激活子（signal transducer and activator of tranions，STAT）信號通路，提高腫瘤細胞轉錄上游的基因激活程度[10]。已有研究表明，STAT3能夠促進腫瘤細胞紡錘體的異常分裂，增加腫瘤基因錯配修復的風險[11]。versican是腫瘤細胞間糖蛋白黏附因子，能夠通過提高腫瘤細胞的黏附和浸潤能力，促進腫瘤細胞間質成分的分解，從而為腫瘤細胞的擴散提供前提。相關研究對STAT3表達與膽囊癌的關系進行探討，結果發(fā)現(xiàn)相比于膽囊結石良性組織，膽囊癌病灶組織中STAT3蛋白表達水平明顯升高，但缺乏對versican表達的分析研究[12-13]。

本研究結果顯示，膽囊癌組織中STAT3蛋白、versican蛋白的陽性表達率均明顯高于膽囊息肉組織（P＜0.01），提示STAT3、versican蛋白可能與膽囊癌的發(fā)生有關。李福利等[14]研究發(fā)現(xiàn)，在膽囊癌患者中，versican的陽性表達率明顯升高，相比于無淋巴結轉移的患者，在發(fā)生明顯腹腔內轉移或淋巴結轉移的患者中，versican蛋白的陽性表達率可進一步上升。本研究在探討STAT3、versican蛋白表達與膽囊癌患者臨床特征的關系過程中發(fā)現(xiàn)，TNM分期為Ⅲ期、有淋巴結轉移膽囊癌患者膽囊癌組織中STAT3蛋白的陽性表達率分別高于TNM分期為Ⅰ～Ⅱ期、無淋巴結轉移的患者（P＜0.05），提示STAT3蛋白表達能夠影響到膽囊癌患者的病情進展。但本研究并未發(fā)現(xiàn)不同分化程度膽囊癌患者膽囊癌組織中STAT3的表達差異。本研究還發(fā)現(xiàn)，TNM分期為Ⅲ期、分化程度為低分化、有淋巴結轉移膽囊癌患者膽囊癌組織中versican蛋白的陽性表達率分別高于TNM分期為Ⅰ～Ⅱ期、分化程度為中高分化、無淋巴結轉移的患者（P＜0.05），提示versican的表達與膽囊癌患者病情進展同樣密切相關，分析其原因可能與以下兩點有關[15-16]：①STAT3表達水平增高，能夠影響到腫瘤細胞基因錯配修復能力，導致癌基因的異常激活；②versican水平增高，能夠提高腫瘤細胞生物學特征的惡化程度，加劇腫瘤細胞浸潤能力的改變。因此，臨床上可以通過檢測STAT3、versican等指標，對膽囊癌患者的臨床病情進行評估。

綜上所述，膽囊癌患者膽囊癌組織中STAT3、versican蛋白的陽性表達率均明顯升高，而且STAT3、versican蛋白的表達均與膽囊癌患者的臨床分期及淋巴結轉移有關。希望后續(xù)研究能夠繼續(xù)深入探討STAT3、versican蛋白表達與膽囊癌患者臨床轉歸的關系。