孫 瀾 鄒 偉 劉曉華

（1 遼寧省遼陽市中心醫(yī)院檢驗科，遼寧 遼陽 111000；2 遼寧省瓦房店市中心醫(yī)院檢驗科，遼寧 瓦房店 116300）

葡萄球菌是臨床上的一個重要致病菌，尤其是金黃色葡萄球菌，由于他能產(chǎn)生多種毒素和酶類，因而更引起人們的重視。而金黃色葡萄球菌與其他葡萄球菌的鑒別主要依據(jù)凝固酶試驗。凝固酶試驗又分：試管法凝固酶（游離凝固酶試驗）、凝聚因子試驗（又稱玻片法凝固酶）、乳膠凝集試驗[1-2]。為了了解這3種方法的敏感性和特異性，我們先用MicroScan auto SCAN4細(xì)菌鑒定儀對從臨床各種標(biāo)本分離出來的208株葡萄球菌進(jìn)行鑒定，再與這3種方法進(jìn)行比較。報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料：本組208株葡萄球菌是從2016年1月至2017年10月臨床各類標(biāo)本（血、痰、膿汁、尿、大便等）中分離而得。

1.2 試劑和儀器：陽性質(zhì)控菌AFCC25923為省臨檢中心所供、陰性質(zhì)控菌為我院所鑒定的凝固酶陰性的表皮葡萄球菌、乳膠試劑購自英國OXOID公司、MicroScan auto SCAN4細(xì)菌鑒定儀。

1.3 方法：①儀器法：從臨床各標(biāo)本中分離出的細(xì)菌經(jīng)革蘭染色、觸酶試驗后上機鑒定。②玻片法：取一環(huán)生理鹽水于玻片上，挑數(shù)個菌落混勻觀察有無自凝現(xiàn)象，如無，再加一環(huán)混合血漿，10 s之內(nèi)出現(xiàn)明顯凝集顆粒為陽性。③試管法按《全國臨床檢驗操作規(guī)程》操作。④乳膠法：按（Diagnostic REAGENTS》說明書操作，并作陰、陽質(zhì)控對照。

2 結(jié) 果

用儀器鑒定208株菌，其中金黃色葡萄球菌150株（MRSA為114株）、溶血葡萄球菌26株（均耐甲氧西林）、表皮葡萄球菌30株（其中26株耐甲氧西林）、華納葡萄球菌2株。與儀器相比較，玻片法實際上測得金葡菌108株、試管法測得金葡菌142株。玻片法假陽性主要為耐甲氧西林溶葡萄球菌。玻片法、試管法的假陰性基本上是MRSA，乳膠法陽性結(jié)果為152株。乳膠法敏感性為100%特異性為98.7%，試管法敏感性為94.7%，特異性為100%，玻片法敏感性為72%，特異性為78.7%。3種方法的結(jié)果與比較見表1、表2。

表1 3種鑒定金黃色葡萄球菌凝集試驗方法學(xué)的結(jié)果的比較（n=150）

表2 3種不同凝集方法不一致的結(jié)果

3 討 論

本試驗結(jié)果顯示用乳膠法和試管法檢測金葡菌結(jié)果可靠，其敏感性和特異性均無顯著性差異（P＞0.05），且試驗結(jié)果與沈陽軍區(qū)總醫(yī)院候麗娜所報道的相似[3-4]。玻片法、試管法凝固酶試驗假陰性主要發(fā)生在耐甲氧西林金黃色葡萄球菌，尤其是玻片法，在本試驗中114株耐甲氧西林金黃色葡萄球菌中有34株凝固酶試驗測的為陰性。造成這種現(xiàn)象的原因，普遍認(rèn)為是耐甲氧西林金黃色葡萄球菌能產(chǎn)生大量的多糖英膜，包被細(xì)胞壁，使得凝固酶試驗假陰性，從而使敏感性降低[5-6]。用玻片法檢測52株耐甲氧西林溶血葡萄球菌，其假陽性高達(dá)92.3%，另外我們在血平板上還觀察到溶血葡萄球菌的菌落形態(tài)、溶血特征都酷似金葡菌，如用玻片法測其凝聚因子，很容易誤報為金黃色葡萄球菌。因此我們認(rèn)為玻片法凝聚因子試驗不宜作為鑒定金黃色葡萄球菌的可靠指標(biāo)。葡萄球菌能產(chǎn)生幾種細(xì)胞外蛋白水解酶（蛋白酶），這些酶不能形成葡萄球菌凝血酶，但能產(chǎn)生假凝固酶。這些蛋白酶在一定條件下可刺激葡萄球菌凝固酶的凝固作用。溶血葡萄球菌不含有凝固酶和凝聚因子，耐甲氧西林溶血葡萄球菌玻片法凝固酶試驗假陽性，是否是產(chǎn)生了細(xì)胞外蛋白水解酶所致，還值得探討。掌握怎樣觀察乳膠試劑結(jié)果，我們認(rèn)為非常重要。在本試驗中華納葡萄球菌被誤報為金葡菌，就是把細(xì)小的凝集顆粒作為了陽性。真正的凝集顆粒呈粗沙粒狀，凝集后的液體清亮。另外觀察的時間一定要控制在10秒之內(nèi)[7-8]。