周 宇 師 園 馮 秀 楊 梅 李美文 葛興農(nóng)

（延安市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，陜西延安 716000）

豬偽狂犬病是生豬養(yǎng)殖中能通過(guò)垂直傳播的生殖障礙性疾病，在不同發(fā)育階段表現(xiàn)不同癥狀，是危害養(yǎng)豬業(yè)重要疾病之一。為控制本病在延安地區(qū)的流行，迫切需要掌握延安市豬偽狂犬病流行現(xiàn)狀，為進(jìn)一步制定凈化措施提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 待檢血清

2017～2018年分春秋兩季共四次在延安市13個(gè)縣區(qū)，通過(guò)現(xiàn)場(chǎng)調(diào)查后，采取隨機(jī)采樣原則，每個(gè)豬場(chǎng)采集血樣2份～30份不等，常規(guī)分離血清后，置-20℃保存?zhèn)溆?。共采?96個(gè)不同規(guī)模豬場(chǎng)1460份血清，其中規(guī)模場(chǎng)血清1150份，來(lái)自91個(gè)規(guī)模養(yǎng)豬場(chǎng)，散養(yǎng)戶(hù)血清310份，來(lái)自105個(gè)散養(yǎng)戶(hù)。

1.2 試劑

所用PRV gB 抗體檢測(cè)ELISA試劑盒和PRV gE抗體檢測(cè)ELISA試劑盒，均來(lái)自北京愛(ài)德士元亨生物科技有限公司。

1.3 儀器設(shè)備

單道微量移液器均為德國(guó)普蘭德公司生產(chǎn)；超純水儀型號(hào)為EPED-RL-60TH，南京易普易達(dá)發(fā)展有限公司生產(chǎn)；酶標(biāo)儀型號(hào)Multiskan FC型，賽默飛世爾（ 上海） 儀器有限公司生產(chǎn)；電熱恒溫培養(yǎng)箱型號(hào)為DK98-II，天津市泰斯特儀器有限公司生產(chǎn)。

1.4 方法

所有血清樣品，均按愛(ài)德士公司生產(chǎn)的PRV gB抗體檢測(cè)ELISA試劑盒與愛(ài)德士公司生產(chǎn)的PRV gE抗體檢測(cè)ELISA試劑盒說(shuō)明書(shū)操作進(jìn)行。對(duì)于來(lái)自用PRV gE基因缺失疫苗免疫的豬場(chǎng)的血清樣品，PRV gE抗體如果為陽(yáng)性，則判斷為豬偽狂犬病野毒感染。在對(duì)豬場(chǎng)感染豬偽狂犬病結(jié)果判定和統(tǒng)計(jì)時(shí)，該豬場(chǎng)出現(xiàn)一個(gè)陽(yáng)性樣品，則判定該豬場(chǎng)為豬偽狂犬病野毒感染陽(yáng)性場(chǎng)。對(duì)監(jiān)測(cè)結(jié)果運(yùn)用SPASS軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同年份延安市豬偽狂犬抗體監(jiān)測(cè)情況

由表1，可知，在2017年共監(jiān)測(cè)gE樣品724份，來(lái)自93個(gè)場(chǎng)，其中PRV gE抗體陽(yáng)性場(chǎng)數(shù)為31個(gè)，抗體陰性場(chǎng)數(shù)為62個(gè)，場(chǎng)陽(yáng)性率為33.33%（31/93）； PRV gE樣品陽(yáng)性數(shù)為97份，樣品陽(yáng)性率為13.40%（97/724）。2018年共監(jiān)測(cè)gE樣品736份，來(lái)自103個(gè)場(chǎng)，其中 PRV gE抗體陽(yáng)性場(chǎng)數(shù)為24個(gè)，抗體陰性場(chǎng)數(shù)為79個(gè)，場(chǎng)陽(yáng)性率為23.30%（24/103），PRV gE樣品陽(yáng)性數(shù)為92份，樣品陽(yáng)性率為12.5%（92/736）。

由表2，可知，在2017年共監(jiān)測(cè)gB樣品724份，來(lái)自13個(gè)縣區(qū)93個(gè)場(chǎng)，PRV gB抗體陽(yáng)性場(chǎng)數(shù)為31個(gè)，抗體陰性場(chǎng)數(shù)為66個(gè)，場(chǎng)陽(yáng)性率為33.33%（31/93），PRV gB樣品陽(yáng)性數(shù)為278份，樣品陽(yáng)性率為38.40%（278/724）。2018年共監(jiān)測(cè)gB樣品736份，來(lái)自103個(gè)場(chǎng)其中 PRV gB抗體陽(yáng)性場(chǎng)數(shù)為43個(gè)，抗體陰性場(chǎng)數(shù)為58個(gè)，場(chǎng)陽(yáng)性率為43.70%（43/103），PRV gB樣品陽(yáng)性數(shù)為313份，樣品陽(yáng)性率為42.53%（313/736）。

表1 不同年份延安市豬偽狂犬gE抗體監(jiān)測(cè)結(jié)果

表2 不同年份延安市豬偽狂犬gB抗體監(jiān)測(cè)結(jié)果

2.2 延安市不同縣（區(qū)）PRⅴ血清學(xué)檢測(cè)結(jié)果

由表3可知，本研究2017-2018年兩年在延安13個(gè)縣（區(qū)）的196個(gè)豬場(chǎng)采集血清樣品1460份，豬偽狂犬gB抗體檢測(cè)結(jié)果為PRV gB抗體總陽(yáng)性率為40.48%，其中洛川、延長(zhǎng)縣PRV gB抗體100%，安塞PRV gB抗體94.0%，PRV gB抗體40%-70%陽(yáng)性率的縣區(qū)由高至低分別為吳起65.00%、黃龍50.83%、富縣48.33%、寶塔46.67%，其余依次為宜川33.33%，黃陵21.31%，延川13.33%，志丹3.28%和子長(zhǎng)1.67%。甘泉PRV gB抗體為0。豬偽狂犬gE抗體檢測(cè)結(jié)果顯示延安市PRV gE抗體總的陽(yáng)性率為12.95%，黃龍縣PRV gE抗體陽(yáng)性率最高達(dá)到59.17%；其次是吳起46.67%；其后依次為志丹13.11%、子長(zhǎng)11.67%、黃陵11.48%、寶塔6.67%、富縣5.00%、延川1.67%和宜川1.67%；另外安塞、甘泉、洛川及延長(zhǎng)四縣PRV gE抗體陽(yáng)性檢出率為0。

表3 不同縣（區(qū)）豬偽狂犬病抗體陽(yáng)性率

2.3 不同飼養(yǎng)類(lèi)型豬偽狂犬抗體檢測(cè)結(jié)果

由表4可以看出，2017年～2018年兩年豬偽狂犬監(jiān)測(cè)血清1460份來(lái)自196個(gè)不同規(guī)模豬場(chǎng)，其中規(guī)模場(chǎng)血清1150份，來(lái)自91個(gè)規(guī)模養(yǎng)豬場(chǎng)，散養(yǎng)戶(hù)血清310份，來(lái)自105個(gè)散養(yǎng)戶(hù)。豬偽狂犬gE抗體檢測(cè)結(jié)果，91個(gè)規(guī)?；B(yǎng)殖場(chǎng)中陽(yáng)性豬場(chǎng)35個(gè)，gE抗體豬場(chǎng)陽(yáng)性率38.46%，來(lái)自規(guī)模場(chǎng)PRV gE陽(yáng)性數(shù)79份，血清陽(yáng)性率6.87%；105個(gè)散養(yǎng)戶(hù)中PRV gE陽(yáng)性豬場(chǎng)20個(gè)，豬場(chǎng)陽(yáng)性率19.05%，PRV gE樣品陽(yáng)性數(shù)112份，陽(yáng)性率36.13%。豬偽狂犬gB抗體檢測(cè)結(jié)果，91個(gè)規(guī)?；B(yǎng)殖場(chǎng)中陽(yáng)性豬場(chǎng)61個(gè)，gB抗體豬場(chǎng)陽(yáng)性率67.03%，來(lái)自規(guī)模場(chǎng)PRV gB陽(yáng)性數(shù)505份，血清陽(yáng)性率43.91%；105個(gè)散養(yǎng)戶(hù)中PRV gB陽(yáng)性豬場(chǎng)22個(gè)，豬場(chǎng)陽(yáng)性率20.95%，PRV gB樣品陽(yáng)性數(shù)86份，陽(yáng)性率27.74%。

表4 不同飼養(yǎng)類(lèi)型豬偽狂犬gE抗體檢測(cè)結(jié)果

表5 不同飼養(yǎng)類(lèi)型豬偽狂犬抗體gB監(jiān)測(cè)結(jié)果

3 小結(jié)與討論

本研究通過(guò)對(duì)延安市2017年～2018年13個(gè)縣區(qū)來(lái)自196個(gè)豬場(chǎng)的1460份血清進(jìn)行了豬偽狂犬血清學(xué)調(diào)查，除散養(yǎng)戶(hù)免疫狀況不明外，據(jù)了解大部分散養(yǎng)戶(hù)只做強(qiáng)制免疫豬瘟、豬口蹄疫的免疫，規(guī)模場(chǎng)免疫情況有現(xiàn)場(chǎng)或電話(huà)調(diào)查豬偽狂犬免疫情況，免疫規(guī)模場(chǎng)均采用PRV gE缺失苗免疫，因此使用 PRV gE基因抗體檢測(cè)試劑盒檢出的gE抗體陽(yáng)性，應(yīng)屬于PRV野毒抗體，通過(guò)PRV gE抗體分析可以評(píng)價(jià)檢測(cè)豬群PRV野毒感染狀況。檢測(cè)結(jié)果196個(gè)豬場(chǎng)55個(gè)豬場(chǎng)檢出PRV gE陽(yáng)性樣品，豬場(chǎng)陽(yáng)性率28.06%，1460份血清中檢出PRV gE陽(yáng)性樣品189份，樣品陽(yáng)性率12.94%，結(jié)果表明延安市豬偽狂犬野毒感染較為普遍。同時(shí)，豬偽狂犬gB抗體監(jiān)測(cè)結(jié)果表明，養(yǎng)殖戶(hù)對(duì)豬偽狂犬的防控，免疫重視程度不夠，豬偽狂犬gB抗體檢測(cè)總陽(yáng)性率僅為40.48%，部分抗體可能為非免疫抗體，而是野毒感染后產(chǎn)生的抗體。

從時(shí)間上看延安地區(qū)2017年-2018年豬偽狂犬的流行沒(méi)有大的變化，維持在12～13%左右的感染率，較同期其他文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo)的一些地區(qū)感染率相對(duì)低一些。

從延安市13個(gè)縣區(qū)采集的樣品檢測(cè)PRV感染的情況來(lái)看，黃龍及吳起縣PRV gE抗體陽(yáng)性率較高達(dá)到59.17%和46.67%，其余縣均低于14%，另安塞、甘泉、洛川及延長(zhǎng)四縣PRV gE抗體監(jiān)測(cè)為零。這表明延安地區(qū)豬偽狂犬野毒感染具有明顯的地域差異，但PRV gE抗體監(jiān)測(cè)為零并不代表本地區(qū)無(wú)豬偽狂犬病毒流行，僅代表抽查豬場(chǎng)無(wú)豬偽狂犬野毒感染，因春秋防送檢抽檢豬場(chǎng)較為有限，且存在重疊采樣的情況，數(shù)據(jù)有一定局限性。

不同飼養(yǎng)類(lèi)型豬偽狂犬抗體檢測(cè)結(jié)果，野毒感染率散養(yǎng)戶(hù)（36.13%）明顯高于養(yǎng)殖場(chǎng)（6.87%），黃龍及吳起兩縣PRV gE抗體陽(yáng)性較高，很大原因是抽查豬場(chǎng)均來(lái)自散養(yǎng)戶(hù)。主要原因是散養(yǎng)戶(hù)防疫意識(shí)弱，飼養(yǎng)環(huán)境差，生物安全措施不到位等原因?qū)е赂吒腥韭省，F(xiàn)豬偽狂犬的免疫主體主要是規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)，因此gB抗體規(guī)模場(chǎng)明顯高于散養(yǎng)戶(hù)，同時(shí)對(duì)照同一份血清gE及gB抗體檢測(cè)結(jié)果，來(lái)自散養(yǎng)戶(hù)豬只gB抗體陽(yáng)性部分可能來(lái)自野毒感染產(chǎn)生。

通過(guò)血清學(xué)監(jiān)測(cè)，大致掌握延安市豬偽狂犬流行狀況，為下一步制定凈化方案提供依據(jù)，為制定詳細(xì)的監(jiān)測(cè)技術(shù)方案、凈化措施和合適的免疫程序打下基礎(chǔ)。