高效液相色譜法測(cè)定豬肉中喹乙醇?xì)埩袅?/h1>
2019-08-19 10:51:36張慧利成林林屈俊成
獸醫(yī)導(dǎo)刊 2019年10期 關(guān)鍵詞：標(biāo)準(zhǔn)方法
張 昕 張慧利 成林林 屈俊成
（焦作市畜產(chǎn)品質(zhì)量安全監(jiān)測(cè)中心，河南焦作 454003）
喹乙醇為廣譜抗菌藥物，是一種化學(xué)合成的生長(zhǎng)促進(jìn)劑而不是抗生素藥物，可促進(jìn)機(jī)體蛋白質(zhì)合成代謝，提高飼料能量利用率，加快了生長(zhǎng)發(fā)育。喹乙醇最初用于防治仔豬腹瀉，1976年歐共體批準(zhǔn)用于畜禽飼料添加劑，20世紀(jì)80年代初，喹乙醇作為飼料添加劑在我國(guó)開(kāi)始推廣使用，已成為我國(guó)養(yǎng)殖生產(chǎn)中最主要的促生長(zhǎng)劑之一。但該藥物毒性隨動(dòng)物種屬不同存在較大差異，特別對(duì)禽和魚(yú)類(lèi)有中度至明顯蓄積毒性和一定遺傳毒性。《中華人民共和國(guó)獸藥典》明確規(guī)定：喹乙醇作為促生長(zhǎng)劑，僅限用于35kg以下豬的促生長(zhǎng)，以及防治仔豬黃痢、白痢，豬沙門(mén)氏菌感染，休藥期35天；禁用于體重超過(guò)35kg以上的豬和禽、魚(yú)類(lèi)等動(dòng)物。
1 儀器與試劑
1.1 儀器
高效液相色譜儀（Waters e26952998 PDA Detector檢測(cè)器）；電子天平（感量0.01g）；渦旋混合器；離心機(jī)；氮吹儀。
1.2 試劑
喹乙醇標(biāo)準(zhǔn)品（德國(guó)Dr公司，濃度97.8%）；乙腈（色譜純）；正己烷；超純水。
標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：
精密稱(chēng)取喹乙醇標(biāo)準(zhǔn)品約0.0100g，用少量甲醇溶解，轉(zhuǎn)移到100ml棕色容量瓶中，用甲醇定容至刻度。制成濃度為100μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。
2 檢測(cè)方法
2.1 樣品的提取
準(zhǔn)確稱(chēng)取混合均勻的樣品2.00g（±0.02g）于50ml離心管中，加入10ml乙腈提取，渦旋混勻，震蕩10min，5000r/min離心8min，將上清液轉(zhuǎn)入另一離心管中，殘?jiān)?0ml乙腈重復(fù)提取一次，合并兩次上清液；向合并的上清液中加入15ml正己烷，渦旋混勻，震蕩5min，8000r/min離心5min，轉(zhuǎn)移乙腈層至玻璃離心管中，60℃水浴氮?dú)獯蹈?；?ml 20%的乙腈水復(fù)溶，渦勻，經(jīng)0.22μm微孔濾膜過(guò)濾后供測(cè)定。
2.2 添加回收樣的制作
稱(chēng)取空白樣品2.00g（±0.02g）于50ml離心管中，準(zhǔn)確吸取標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液50μL添加到空白樣中，制成添加量為2.5mg/kg的樣品。然后按2.1方法進(jìn)行前處理和上機(jī)。
2.3 標(biāo)準(zhǔn)工作曲線(xiàn)
取適量的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，用甲醇分別稀釋為濃度為1.0μg/ml，2.0μg/ml，2.5μg/ml，5μg/ml，10μg/ml的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)工作液。
2.4 色譜條件
色譜柱：Symmetry?C18柱（4.6×250mm，5μm）；流動(dòng)相：10%乙腈水；柱溫：35℃；進(jìn)樣量：10μL。
3 結(jié)果分析與討論
3.1 樣品分析與討論
樣品的前處理方法對(duì)喹乙醇的檢測(cè)至關(guān)重要。如果用80%的乙腈作為提取液進(jìn)行提取，在對(duì)樣品進(jìn)行濃縮時(shí)會(huì)花費(fèi)更長(zhǎng)時(shí)間，而且不易濃縮；并且會(huì)存在更多干擾物質(zhì)，降低響應(yīng)值和回收率，影響對(duì)喹乙醇的檢測(cè)。按照本實(shí)驗(yàn)方法對(duì)豬肉樣品進(jìn)行分析，節(jié)省了試劑和前處理時(shí)間，能更好的消除雜質(zhì)對(duì)喹乙醇的干擾，保證所檢驗(yàn)樣品的響應(yīng)值與回收率。本方法中喹乙醇的保留時(shí)間為5.270min，圖1為添加2.5μg/g喹乙醇豬肉樣品色譜圖，試劑和雜質(zhì)峰均能和喹乙醇很好的分開(kāi)，說(shuō)明上述前處理方法和色譜條件是可行的。
圖1 添加2.5μg/g喹乙醇豬肉樣品色譜圖
3.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)結(jié)果
實(shí)驗(yàn)表明，在1～10μg/ml濃度范圍內(nèi)，線(xiàn)性關(guān)系良好，回歸方程及相關(guān)系數(shù)見(jiàn)圖2。
圖2 喹乙醇標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)圖
3.3 加標(biāo)回收率及精密度
空白樣品經(jīng)測(cè)定，不含喹乙醇，加標(biāo)量在2.5μg/g濃度下，回收率在80.7～85.5之間，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于10%，表明該方法回收率和精密度滿(mǎn)足獸藥殘留檢測(cè)需要。
3.4 檢驗(yàn)過(guò)程注意事項(xiàng)
喹乙醇見(jiàn)光易分解，整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程要嚴(yán)格注意避光；特別是氮吹過(guò)程尤其注意避光，所有溶液盡量用棕色瓶保存。另外，氮吹吹干與吹盡干對(duì)回收率影響不大，但不能干的時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，會(huì)降低添加回收率。
4 結(jié)論
本實(shí)驗(yàn)方法操作簡(jiǎn)單，準(zhǔn)確率高，回收率高，重現(xiàn)性好，結(jié)果令人滿(mǎn)意，適用于豬肉中喹乙醇的批量檢測(cè)。
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標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：
精密稱(chēng)取喹乙醇標(biāo)準(zhǔn)品約0.0100g，用少量甲醇溶解，轉(zhuǎn)移到100ml棕色容量瓶中，用甲醇定容至刻度。制成濃度為100μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。
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2.1 樣品的提取
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2.3 標(biāo)準(zhǔn)工作曲線(xiàn)
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2.4 色譜條件
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圖1 添加2.5μg/g喹乙醇豬肉樣品色譜圖
3.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)結(jié)果
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圖2 喹乙醇標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)圖
3.3 加標(biāo)回收率及精密度
空白樣品經(jīng)測(cè)定，不含喹乙醇，加標(biāo)量在2.5μg/g濃度下，回收率在80.7～85.5之間，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于10%，表明該方法回收率和精密度滿(mǎn)足獸藥殘留檢測(cè)需要。
3.4 檢驗(yàn)過(guò)程注意事項(xiàng)
喹乙醇見(jiàn)光易分解，整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程要嚴(yán)格注意避光；特別是氮吹過(guò)程尤其注意避光，所有溶液盡量用棕色瓶保存。另外，氮吹吹干與吹盡干對(duì)回收率影響不大，但不能干的時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，會(huì)降低添加回收率。
4 結(jié)論
本實(shí)驗(yàn)方法操作簡(jiǎn)單，準(zhǔn)確率高，回收率高，重現(xiàn)性好，結(jié)果令人滿(mǎn)意，適用于豬肉中喹乙醇的批量檢測(cè)。
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