王相子 徐小艷 開 妍 陳昌海 邱 冬

（江蘇省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，江蘇南京 210036）

為更好地了解我省種畜禽場(chǎng)主要?jiǎng)游镆卟∶庖咝Ч莆瘴沂≈饕獎(jiǎng)游镆卟∶庖呖贵w變化情況，為科學(xué)防控動(dòng)物疫病提供技術(shù)支撐，我省結(jié)合實(shí)際情況，開展了2018年種畜禽場(chǎng)主要?jiǎng)游镆卟《c(diǎn)監(jiān)測(cè)工作。

1 材料與方法

1.1 樣品采集

1.1.1 采樣范圍。在本省的11個(gè)縣、區(qū)選取了畜禽養(yǎng)殖密集區(qū)、水網(wǎng)地區(qū)、流通頻繁地區(qū)的18個(gè)種畜禽養(yǎng)殖場(chǎng)作為定點(diǎn)監(jiān)測(cè)點(diǎn)，其中種雞場(chǎng)9個(gè)，種鴨場(chǎng)1個(gè)，種豬場(chǎng)8個(gè)（表1）。

表1 定點(diǎn)監(jiān)測(cè)點(diǎn)分布情況表

1.1.2 監(jiān)測(cè)頻次和樣品數(shù)量。每季度（1月、4月、7月、10月）由定點(diǎn)場(chǎng)所在縣獸醫(yī)站負(fù)責(zé)采集一次樣品，并集中送至省疫控中心檢測(cè)。每場(chǎng)每次采集30份血清樣品。

1.2 實(shí)驗(yàn)器材

單道、8道、12道移液器；96孔U型反應(yīng)板；全自動(dòng)移液器；100ml量筒；超純水儀；全自動(dòng)洗板機(jī)；酶標(biāo)儀；恒溫培養(yǎng)箱。

1.3 疫苗種類與免疫程序

1.3.1 疫苗種類。10個(gè)種禽場(chǎng)均免疫禽流感病毒（H5+H7）二價(jià)滅活疫苗，9個(gè)種雞場(chǎng)免疫了新城疫弱毒疫苗或滅活聯(lián)苗；8個(gè)種豬場(chǎng)中7個(gè)免疫了口蹄疫滅活疫苗，1個(gè)免疫了口蹄疫合成肽疫苗；8個(gè)種豬場(chǎng)均免疫豬瘟活疫苗和高致病性豬藍(lán)耳病弱毒疫苗。

1.3.2 免疫程序。各種畜禽場(chǎng)均按農(nóng)業(yè)農(nóng)村部推薦免疫程序開展免疫，并要求在疫苗免疫21d后進(jìn)行采樣。

1.4 監(jiān)測(cè)方法及試劑

1.4.1 禽血清采用血凝及血凝抑制（HA/HI）方法檢測(cè)。高致病性禽流感以GB/T 18936-2003為檢驗(yàn)依據(jù)，將抗體效價(jià)≥24判定為合格，否則判為不合格[1]；雞新城疫以GB/T 16550-2008為檢驗(yàn)依據(jù)，將抗體效價(jià)≥25判定為合格，否則判為不合格[1]。H5亞型高致病性禽流感抗原和雞新城疫抗原均購(gòu)自哈爾濱維科生物技術(shù)開發(fā)公司。

1.4.2 豬血清采用ELISA方法檢測(cè)。O型口蹄疫抗體液相阻斷ELISA檢測(cè)試劑盒，購(gòu)自農(nóng)科院蘭州獸醫(yī)研究所；高致病性豬藍(lán)耳病抗體檢測(cè)試劑盒，購(gòu)自武漢科前生物股份有限公司；豬瘟抗體ELISA檢測(cè)試劑盒，購(gòu)自北京愛(ài)德士元亨生物科技有限公司。

操作方法按試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行，抗體陽(yáng)性判為合格，否則為不合格。

2 結(jié)果與分析

2.1 全省檢測(cè)結(jié)果

2018年全省分季度共開展4次定點(diǎn)監(jiān)測(cè)。全年共檢測(cè)樣品6248份，其中H5亞型高致病性禽流感檢測(cè)樣品1164份，平均免疫抗體合格率為99.74%；H7N9流感1163份，合格率97.08%；雞新城疫1045份，合格率100%；豬O型口蹄疫956份，合格率88.49%；高致病性豬藍(lán)耳病960份，合格率97.60%；豬瘟960份，合格率80.42%（表2、表3）。

表2 2018年全省種禽場(chǎng)定點(diǎn)監(jiān)測(cè)結(jié)果匯總表

表3 2018年全省種豬場(chǎng)定點(diǎn)監(jiān)測(cè)結(jié)果匯總表

從表2、表3數(shù)據(jù)看，我省定點(diǎn)監(jiān)測(cè)點(diǎn)主要?jiǎng)游镆卟≌w免疫抗體水平優(yōu)良，所監(jiān)測(cè)病種的平均免疫抗體合格率均高于農(nóng)業(yè)農(nóng)村部要求的70%標(biāo)準(zhǔn)[1]。

2.2 種禽場(chǎng)抗體情況

對(duì)10個(gè)種禽場(chǎng)的1164份禽血清樣品進(jìn)行了H5亞型高致病性禽流感免疫抗體檢測(cè)，合格1161份，合格率99.74%；共檢測(cè)H7N9流感樣品1163份，合格1129份，合格率97.08%。從表2看出，此兩種疫病平均免疫抗體合格率全年各季度均保持在90%以上的較高水平。但是以場(chǎng)點(diǎn)為單位來(lái)看，各場(chǎng)點(diǎn)的H5亞型禽流感抗體抗體水平較高（圖1），而H7N9流感的抗體水平雖然整體也保持在較高水平，但是M縣監(jiān)測(cè)點(diǎn)二季度的抗體合格率僅為46.67%（圖2）。經(jīng)查，可能與該場(chǎng)點(diǎn)禽群進(jìn)行禽流感二價(jià)苗二免后3天即進(jìn)行采樣監(jiān)測(cè)有關(guān)。

對(duì)9個(gè)種雞場(chǎng)的1045份雞血清樣品進(jìn)行了雞新城疫免疫抗體檢測(cè)，合格1045份，合格率100%。

圖1 H5亞型高致病性禽流感免疫抗體分析

圖2 H7N9流感免疫抗體分析

2.3 種豬場(chǎng)抗體情況

對(duì)8個(gè)種豬場(chǎng)的956份豬血清樣品進(jìn)行了O型口蹄疫免疫抗體檢測(cè)，合格846份，合格率88.49%。結(jié)合表3看，二季度的平均免疫抗體合格率最低，為81.25%。四個(gè)季度種豬場(chǎng)的平均免疫抗體合格率均高于80%，整體免疫抗體水平優(yōu)良。但是以場(chǎng)點(diǎn)為單位看，存在場(chǎng)點(diǎn)間的合格率差異較大，抗體水平不均衡情況。其中A區(qū)、E區(qū)、M縣的場(chǎng)點(diǎn)，均有部分季度免疫抗體合格率未達(dá)到70%，尤其是一、二、四季度中各場(chǎng)點(diǎn)的免疫抗體合格率離散度較高（圖3）。

對(duì)8個(gè)種豬場(chǎng)的960份豬血清樣品進(jìn)行了高致病性豬藍(lán)耳病免疫抗體檢測(cè)，合格937份，合格率97.60%。全年四個(gè)季度的平均免疫抗體水平均高于90%，整體處于優(yōu)良的免疫抗體水平。以場(chǎng)點(diǎn)為單位分析，所有場(chǎng)點(diǎn)各季度合格率均高于70%（圖4）。

對(duì)8個(gè)種豬場(chǎng)的960份豬血清樣品進(jìn)行了豬瘟免疫抗體檢測(cè)，合格772份，合格率80.42%。四個(gè)季度的平均免疫抗體合格率均高于70%，其中二季度的平均免疫抗體合格率最低，為71.67%。以場(chǎng)點(diǎn)為單位看，同樣存在場(chǎng)點(diǎn)間的合格率差異較大，抗體水平不均衡情況。其中A區(qū)、E區(qū)、J縣、K區(qū)、M縣的場(chǎng)點(diǎn)，均有部分季度免疫抗體合格率未達(dá)到70%。以一、二、四季度場(chǎng)點(diǎn)的免疫抗體合格率離散度較高，整體情況與豬O型口蹄疫免疫抗體情況相似（圖5）。

圖3 豬O型口蹄疫免疫抗體分析

圖4 高致病性豬藍(lán)耳病免疫抗體分析

圖5 豬瘟免疫抗體分析

3 討論

3.1 我省主要?jiǎng)游镆卟≌w免疫抗體水平較高

2018年四個(gè)季度的定點(diǎn)監(jiān)測(cè)中，我省種畜禽場(chǎng)主要?jiǎng)游镆卟〉钠骄庖呖贵w合格率處于較高的水平，說(shuō)明近年來(lái)我省的主要?jiǎng)游镆卟》揽啬芰θ员３州^高水平，使用免疫程序合理，種畜禽場(chǎng)管理嚴(yán)格，為保障全省商品代畜禽養(yǎng)殖提供良好基礎(chǔ)。

3.2 種畜禽場(chǎng)的免疫程序應(yīng)根據(jù)抗體水平及時(shí)調(diào)整

從場(chǎng)點(diǎn)分析中能看出，部分場(chǎng)點(diǎn)的免疫抗體水平在四個(gè)季度的監(jiān)測(cè)中呈現(xiàn)出一、三季度較好，二、四季度較差的波動(dòng)態(tài)勢(shì)。通過(guò)追溯這部分場(chǎng)點(diǎn)的免疫記錄，發(fā)現(xiàn)該部分場(chǎng)點(diǎn)存在春秋季集中免疫，而平時(shí)不開展群體抗體水平調(diào)查，造成二、四季度免疫抗體合格率較低的情況。這樣易使群體形成免疫空檔，增加畜禽群出現(xiàn)疫病感染后爆發(fā)疫情的風(fēng)險(xiǎn)。種畜禽場(chǎng)應(yīng)根據(jù)需要建立群體免疫抗體水平監(jiān)控機(jī)制，定期檢測(cè)養(yǎng)殖場(chǎng)內(nèi)不同群體的抗體水平，根據(jù)檢測(cè)結(jié)果及時(shí)調(diào)整免疫程序，填補(bǔ)免疫空檔。

3.3 豬的O型口蹄疫和豬瘟防控不容忽視

盡管此兩種病的平均免疫抗體合格率均高于70%，但是場(chǎng)群間存在合格率差異較大的情況。經(jīng)調(diào)查，問(wèn)題主要表現(xiàn)在：各養(yǎng)殖場(chǎng)的防控意識(shí)水平不一，免疫程序不符合場(chǎng)群實(shí)際情況；免疫接種劑量不足；豬群存在疫苗免疫空檔等方面。針對(duì)這兩種動(dòng)物疫病免疫抗體水平差異較大的情況，種豬場(chǎng)應(yīng)加強(qiáng)生物安全措施，根據(jù)場(chǎng)群實(shí)際情況調(diào)整豬群免疫程序及劑量，定期開展抗體監(jiān)測(cè)，提高動(dòng)物疫病防控能力。

3.4 群體感染免疫抑制病會(huì)影響疫苗免疫效果

除去疫苗免疫程序不合理、存在免疫空擋等問(wèn)題，群體的野毒感染也會(huì)對(duì)疫苗免疫效果構(gòu)成威脅。通過(guò)對(duì)監(jiān)測(cè)豬群開展豬偽狂犬病gE抗體ELISA試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，部分豬瘟免疫抗體不合格的場(chǎng)群存在豬偽狂犬病gE抗體陽(yáng)性較高的情況，原因可能是群體感染豬偽狂犬病，會(huì)抑制或干擾其他疫苗的免疫，使豬瘟疫苗的免疫應(yīng)答下降[2]。

3.5 下一步應(yīng)同步開展病原學(xué)監(jiān)測(cè)

通過(guò)對(duì)這些場(chǎng)點(diǎn)長(zhǎng)達(dá)一年的定點(diǎn)監(jiān)測(cè)發(fā)現(xiàn)，即使是生產(chǎn)管理更規(guī)范、疫病防控意識(shí)更強(qiáng)的種畜禽場(chǎng)，仍然存在疫病防控問(wèn)題。目前，血清學(xué)監(jiān)測(cè)幫助我們很好的掌握了全省種畜禽場(chǎng)免疫抗體水平，提示相關(guān)場(chǎng)點(diǎn)及時(shí)調(diào)整免疫程序、定期加強(qiáng)補(bǔ)免，但場(chǎng)點(diǎn)的疫病感染情況、全省的病原分布情況等還不能通過(guò)定點(diǎn)監(jiān)測(cè)進(jìn)行掌握。下一步，應(yīng)考慮在定點(diǎn)監(jiān)測(cè)中對(duì)種畜禽場(chǎng)同步開展病原學(xué)監(jiān)測(cè)，進(jìn)一步掌握全省的疫情動(dòng)態(tài)，為全省的疫病防控提供數(shù)據(jù)支撐。