王 平，劉夢(mèng)潔，常 娟，劉超齊，尹清強(qiáng)*，黨曉偉，高天增

（1. 河南農(nóng)業(yè)大學(xué)牧醫(yī)工程學(xué)院，河南鄭州 450002；2. 河南德鄰生物制品有限公司，河南新鄉(xiāng) 453000； 3. 河南廣安生物科技股份有限公司，河南鄭州 450001）

隨著畜牧業(yè)的迅速發(fā)展，動(dòng)物飼料、人類食物和生物燃料之間的競(jìng)爭(zhēng)日益激烈，研究不同結(jié)構(gòu)碳水化合物（如非淀粉多糖）的消化代謝利用規(guī)律及合理加工替代傳統(tǒng)的能量原料，是畜牧飼料資源開(kāi)發(fā)的熱點(diǎn)之一。

秸稈木質(zhì)纖維素作為結(jié)構(gòu)碳水化合物是自然界豐富的可再生資源，含有75% 以上的多糖[1]。目前秸稈已被廣泛應(yīng)用于反芻動(dòng)物飼料中，且效果顯著[2-3]。單胃動(dòng)物尤其是家禽，胃腸道結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，對(duì)秸稈木質(zhì)纖維素消化能力較弱，因此木質(zhì)纖維素應(yīng)用于單胃動(dòng)物難度更大。郭紅偉[4]報(bào)道，爆破- 微生物處理秸稈替代育肥豬飼料中5%～10% 的玉米是可行的。Chang 等[5]利用蒸汽爆破和米曲霉發(fā)酵相結(jié)合處理秸稈替代肉雞日糧中4%～8%的玉米對(duì)營(yíng)養(yǎng)代謝率無(wú)影響。至今關(guān)于玉米秸稈在肉雞規(guī)模化生產(chǎn)中應(yīng)用的報(bào)道不多。本研究根據(jù)單胃動(dòng)物的生理和營(yíng)養(yǎng)需要，采用物理、化學(xué)、酶解和微生物發(fā)酵相結(jié)合的方法，開(kāi)發(fā)了糖化玉米秸稈（Saccharification Corn Straw，SCS）和酵母發(fā)酵玉米秸稈（Yeast Fermented Corn Straw，YFCS），對(duì)比分析SCS 和YFCS 營(yíng)養(yǎng)價(jià)值及代謝能值，為玉米秸稈資源在飼料中應(yīng)用提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 預(yù)處理玉米秸稈 玉米秸稈經(jīng)粉碎機(jī)粉碎后（80%過(guò)16 目篩），經(jīng)40- Ⅰ型飼料膨化機(jī)膨化；按液固比13:1 加水，1 000 W、80℃超聲波處理30 min；再加入6%（w/w）CaO、2%（w/w）NaOH， 84℃水浴處理6 h；降溫至室溫加入3%（v/v）雙氧水，處理4 h，風(fēng)干。

1.1.2 SCS 制備 將上述預(yù)處理玉米秸稈酶解，液固比為10:1，用鹽酸和硫酸調(diào)pH 至4.3，加入纖維素酶量32.30 FPU/g（包含木聚糖酶50 U/g），50℃酶解82 h，風(fēng)干。

1.1.3 YFCS 制備 玉米秸稈預(yù)處理和酶解步驟與SCS相同，酶解結(jié)束后加入硫酸銨3.06 g/L，產(chǎn)朊假絲酵母2%（v/v），28℃培養(yǎng)48 h，自然風(fēng)干。

1.1.4 菌種 產(chǎn)朊假絲酵母購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院微生物研究所，經(jīng)本實(shí)驗(yàn)室對(duì)比篩選確定為產(chǎn)菌體蛋白較高的菌種。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

1.2.1 直接法測(cè)定玉米秸稈代謝能 選用42 日齡體重為（2.6±0.24）kg、健康的AA 商品肉雞15 只，隨機(jī)分成3 個(gè)處理，每個(gè)處理5 只雞，進(jìn)行單籠編號(hào)飼養(yǎng)。預(yù)試期3 d，期間自由采食待測(cè)飼料，在進(jìn)入正試期前饑餓2 d，期間自由飲水。在正式期第1 天08:00，3 個(gè)處理組分別強(qiáng)飼15 g 100%未處理玉米秸稈、50 g 100% SCS、50 g 100% YFCS。采用全收糞法，分別于雞肛門部系集糞袋收集排泄物。強(qiáng)飼結(jié)束后，每12 h 準(zhǔn)確收集糞樣1 次，共收集48 h 內(nèi)的糞樣。糞便收集后立即加入10%的硫酸固氮（每100 g 鮮糞加入10%硫酸10 mL），收集全部排泄物。60～65℃烘干，自然狀態(tài)下回潮24 h，稱重記錄每只試驗(yàn)雞的風(fēng)干排泄物重，粉碎過(guò)40 目篩備用。試驗(yàn)飼糧的表觀代謝能計(jì)算公式：

表觀代謝能（MJ/kg）=（食入飼料總能－排泄物總能）/飼料采食量

1.2.2 差量法[6]測(cè)定雞的代謝能 選用42 日齡體重（2.6±0.24）kg、健康的AA 商品肉雞25 只，隨機(jī)分為5 組，每組5 只雞，進(jìn)行單籠編號(hào)飼養(yǎng)。對(duì)照組飼喂基礎(chǔ)飼糧，試驗(yàn)組分別在基礎(chǔ)日糧中添加4%、8%、12%SCS 和8%YFCS 替代等量玉米。預(yù)試期5 d，正試期3 d，每天定時(shí)飼喂試驗(yàn)日糧，自由采食和飲水，記錄每天采食量。采用全收糞法，在雞籠下設(shè)糞盤，及時(shí)揀出皮屑、羽毛和飼料等雜物。每12 h 收集糞樣1 次，共收集3 d 糞樣。糞樣處理同1.2.1。試驗(yàn)飼糧營(yíng)養(yǎng)水平參照NRC（1994）配制，飼糧的飼料配方和營(yíng)養(yǎng)成分見(jiàn)表1。

SCS（YFCS）的表觀代謝能（MJ/kg）=（飼料的代謝能－玉米的代謝能值×玉米占飼糧比例－豆粕的代謝能值×豆粕占飼糧比例－魚(yú)粉的代謝能值×魚(yú)粉占飼糧比例－豆油的代謝能值×豆油占飼糧比例－麩皮的代謝能值×麩皮占飼糧比例）/ SCS（YFCS）占飼糧比例

表1 飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)成分（風(fēng)干基礎(chǔ)）

1.2.3 SCS 表觀代謝能驗(yàn)證 選擇1 日齡健康的雌性AA 肉仔雞250 只，分為前期（1～21 d）和后期（22～42 d）2 個(gè)階段進(jìn)行飼養(yǎng)。前期250 只雞，按體重分為5 個(gè)處理，每個(gè)處理5 個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)10 只雞。后期重新分組，選擇250 只體重相同的雞，分為5 個(gè)處理，每個(gè)處理5 個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)10 只雞。采用3 層籠養(yǎng)，自由采食和飲水；免疫程序按7、21 日齡免疫新-支二聯(lián)苗，14、28 日齡免疫法氏囊多價(jià)苗。

在飼養(yǎng)試驗(yàn)過(guò)程中，收集第17～19 天和37～39 天的排泄物，收集方法同1.2.2，糞樣處理同1.2.1。飼糧配方及營(yíng)養(yǎng)成分見(jiàn)表2。對(duì)照組飼喂基礎(chǔ)飼糧；SCS 組在飼糧中分別添加4%、8%、12% SCS，代謝能按照差量法計(jì)算分別為15.85、15.81、14.38 MJ/kg；8% SCS（高油）組在飼糧中添加8% SCS，代謝能按照直接法計(jì)算為4.85 MJ/kg，不足能量添加豆油調(diào)整。

表2 飼糧的組成及營(yíng)養(yǎng)成分（風(fēng)干基礎(chǔ)）

1.3 測(cè)定指標(biāo)及方法 副產(chǎn)物：取10 g 不同處理玉米秸稈加入到100 mL 去離子水中，在室溫浸泡攪拌2 h，用濾紙過(guò)濾，濾液經(jīng)10 000 r/min 離心10 min，上清液經(jīng)0.22 μm 濾膜過(guò)濾后，采用色譜儀測(cè)定[6]。

還原糖：取處理后玉米秸稈5.000 0 g，加入50 mL蒸餾水，浸泡24 h，濾紙過(guò)濾，取濾液測(cè)還原糖，采用DNS 法[7]。

木質(zhì)纖維素：采用Van Soest[8]濾袋法測(cè)定中性洗滌纖維（NDF）、酸性洗滌纖維（ADF）、酸性洗滌木質(zhì)素（ADL）。

真蛋白含量[9]：取2 g 待測(cè)樣品于燒杯中，在攪拌狀態(tài)下加入50 mL 蒸餾水，并煮沸，依此加入20 mL 10%硫酸銅溶液和2.5%氫氧化鈉溶液，混勻，靜置1 h，用濾紙過(guò)濾，用熱水反復(fù)沖洗直至濾液無(wú)SO42-。將濾紙與殘?jiān)?5℃烘干，用凱式定氮法進(jìn)行測(cè)定。

飼料和糞中粗蛋白質(zhì)、粗脂肪、鈣、磷測(cè)定分別采用凱氏定氮法、乙醚浸提法、乙二胺四乙酸二鈉絡(luò)合滴定法、鉬黃法；總能測(cè)定采用全自動(dòng)氧彈測(cè)熱計(jì)（IKA-C2000，德國(guó)IKA 公司）；氨基酸含量測(cè)定采用氨基酸自動(dòng)分析儀（L-8800 型，日立）[9]。

1.4 統(tǒng)計(jì)分析 試驗(yàn)數(shù)據(jù)經(jīng)Excel 初步整理后，采用SPSS 20.0 統(tǒng)計(jì)分析軟件進(jìn)行方差分析和Duncan′s 多重比較檢驗(yàn)，結(jié)果表示為平均值± 標(biāo)準(zhǔn)差，P＜0.05 表示差異顯著。

2 結(jié) 果

2.1 不同玉米秸稈化學(xué)成分分析

2.1.1 不同玉米秸稈主要營(yíng)養(yǎng)成分分析 由表3 可知，SCS 中還原糖含量較未處理玉米秸稈提高808.26%（P＜0.05），YFCS 中還原糖含量較SCS 降低78.69%（P＜0.05）。與未處理玉米秸稈相比，SCS 和YFCS 中粗蛋白質(zhì)、真蛋白、鈣、磷和灰分均顯著提高，且以YFCS 最高（P＜0.05）；NDF、ADF、半纖維素、纖維素和木質(zhì)素含量顯著降低；且YFCS 中NDF、ADF、纖維素和木質(zhì)素顯著低于SCS。

表3 不同玉米秸稈主要營(yíng)養(yǎng)成分分析（干物質(zhì)基礎(chǔ)）

2.1.2 不同玉米秸稈主要氨基酸含量 由表4 可知，與未處理玉米秸稈對(duì)比，SCS 中天冬氨酸、谷氨酸、絲氨酸、甘氨酸、蘇氨酸、丙氨酸和色氨酸均有所增加，其余氨基酸均減少。在YFCS 中除胱氨酸，其他氨基酸均高于SCS；總氨基酸含量高于未處理玉米秸稈和SCS，較SCS 提高41%；這表明酵母具有提高除胱氨酸外的所有氨基酸的能力。

2.1.3 不同處理玉米秸稈副產(chǎn)物分析 由表5 可知，未處理玉米秸稈含有少量的5- 羥甲基糠醛和糠醛。玉米秸稈經(jīng)物理+ 化學(xué)復(fù)合處理后，5- 羥甲基糠醛含量提高2 倍，糠醛含量降低33.33%，出現(xiàn)新的產(chǎn)物4 -羥基苯甲醛和香豆酸。預(yù)處理玉米秸稈經(jīng)纖維素酶糖化后5-羥甲基糠醛和4-羥基苯甲醛降低50%和58.33%，而未檢出糠醛和香豆酸。SCS 經(jīng)酵母發(fā)酵后，5- 羥甲基糠醛降低16.67%，而4-羥基苯甲醛和香豆酸含量增加。

2.2 不同玉米秸稈表觀代謝能分析

2.2.1 直接法測(cè)定玉米秸稈代謝能 由表6 可知，肉雞對(duì)未處理玉米秸稈表觀代謝率和代謝能均為負(fù)值，表明肉雞無(wú)法利用未處理玉米秸稈，且直接強(qiáng)飼大量木質(zhì)纖維素對(duì)肉雞應(yīng)激較大。SCS 和YFCS 的表觀代謝率、代謝能均無(wú)顯著差異。

2.2.2 差量法測(cè)定玉米秸稈代謝能分析 由表7 可知，肉雞對(duì)4%、8%、12%SCS 和8%YFCS 飼糧的表觀能量代謝率與基礎(chǔ)飼糧差異不顯著；而8%YFCS 組的表觀代謝率顯著低于4%SCS 組。對(duì)照組與4%、8% 和12%SCS 組肉雞代謝能差異不顯著；8%YFCS 組肉雞代謝能顯著低于其他各組。通過(guò)差量法計(jì)算，從4%、8%和12%SCS 飼糧組分別推算出SCS 的代謝能為15.85、15.81、14.38 MJ/kg；從8%YFCS 飼糧中推算出YFCS的代謝能為8.61 MJ/kg。

表4 不同玉米秸稈氨基酸含量（干物質(zhì)基礎(chǔ)） %

表5 不同處理玉米秸稈副產(chǎn)物分析（干物質(zhì)基礎(chǔ)） %

表6 直接法測(cè)定肉雞對(duì)不同玉米秸稈表觀代謝率和表觀代謝能（風(fēng)干基礎(chǔ)）

表7 差量法測(cè)定不同玉米秸稈肉雞表觀代謝率和表觀代謝能（風(fēng)干基礎(chǔ)）

2.3 SCS 表觀代謝能驗(yàn)證 由表8 可知，無(wú)論肉雞前期和后期試驗(yàn)，4%、8%和12%SCS 組飼糧代謝能與對(duì)照組均差異不顯著，8% SCS（高油）組顯著高于其他各組。

表8 肉雞飼糧和SCS 代謝能（風(fēng)干基礎(chǔ)） MJ/kg

3 討 論

3.1 不同玉米秸稈化學(xué)成分分析 玉米秸稈經(jīng)過(guò)預(yù)處理和酶解后，其原有的木質(zhì)纖維素形態(tài)結(jié)構(gòu)、物理特性和化學(xué)成分均發(fā)生很大變化[10]。物理性狀由原來(lái)的體積膨大、容重小、系水性強(qiáng)的蓬松短桿狀物質(zhì)變成體積小、容重大、易溶于水的固體粉狀顆粒。SCS 經(jīng)酵母菌發(fā)酵后具有香味。在秸稈飼料化研究中，酵母菌和產(chǎn)纖維素酶菌種混合固體發(fā)酵產(chǎn)生菌體蛋白，可提高秸稈的適口性[11]。本研究結(jié)果顯示，與SCS 對(duì)比，YFCS 中還原糖降低78.69%，粗蛋白質(zhì)提高77.49%，真蛋白提高29.64%，總氨基酸含量增加。這表明酵母菌滿足自身生長(zhǎng)消耗大量還原糖并轉(zhuǎn)化成菌體蛋白，也證明產(chǎn)朊假絲酵母具有較強(qiáng)的氨基酸合成能力。因部分無(wú)機(jī)氮?dú)埩?，粗蛋白質(zhì)顯著高于真蛋白。本研究中，SCS 中氨基酸的組成和含量與未處理玉米秸稈相比有明顯不同，其原因?yàn)閴A性氧化熱處理改變了氨基酸的組成和含量。楊林等[12]報(bào)道，堿處理能夠影響蛋白質(zhì)中氨基酸的組成和含量。在秸稈預(yù)處理時(shí)添加適量氧化鈣使得SCS 中鈣含量增加，適量的鈣含量依據(jù)SCS 在飼料中的添加量可以部分或全部替代飼料中的石粉。YFCS 中NDF、ADF、纖維素顯著降低，其原因?yàn)檫€原糖被酵母大量消耗后，剩余的纖維素酶繼續(xù)發(fā)生酶解[13]。YFCS 中5-羥基糠醛較SCS 低，表明酵母菌具有去除糠醛的能力；而木質(zhì)素的降低和木質(zhì)素分解產(chǎn)物4- 羥基苯甲醛和香豆酸的增加證明該酵母菌與纖維素酶酶解共同作用時(shí)對(duì)木質(zhì)素分解具有一定促進(jìn)作用。預(yù)處理玉米秸稈經(jīng)酶解糖化后，副產(chǎn)物減少或消除，證明纖維素酶酶解也具有消除糠醛及木質(zhì)素分解產(chǎn)物的能力。

3.2 直接法和差量法對(duì)不同玉米秸稈代謝能分析 客觀精確評(píng)定飼料原料的代謝能值是確定該原料在動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)配方中作用的依據(jù)，對(duì)新型飼料資源營(yíng)養(yǎng)價(jià)值評(píng)定具有重要的意義。在飼料原料的代謝能評(píng)定過(guò)程中，往往受飼料原料、動(dòng)物自身生理特性、飼料間組合效應(yīng)等不可控因素影響，在代謝能評(píng)定方面很難真正精確地體現(xiàn)該原料的代謝能[14]。目前關(guān)于飼料代謝能評(píng)定常用的方法有直接法（強(qiáng)飼法）[15]、套算法[6]和差量法[16]，三者各自具有優(yōu)缺點(diǎn)。

本研究根據(jù)待測(cè)原料的物理性狀、化學(xué)組成和適口特性，選擇直接法和差量法測(cè)定其表觀代謝能，結(jié)果表明通過(guò)直接法測(cè)定未處理玉米秸稈表觀代謝率和代謝能均為負(fù)值。玉米秸稈因容積大，容重小，營(yíng)養(yǎng)元素含量低，單獨(dú)強(qiáng)飼玉米秸稈對(duì)肉雞造成嚴(yán)重應(yīng)激，刺激內(nèi)源代謝。從SCS 和YFCS 的營(yíng)養(yǎng)成分分析，SCS 中還原糖顯著高于YFCS，推測(cè)其代謝能應(yīng)高于YFCS，而直接法測(cè)得2 種玉米秸稈代謝能差異不顯著，這表明SCS和YFCS 同樣對(duì)肉雞代謝產(chǎn)生應(yīng)激，未能表現(xiàn)出真實(shí)代謝能值。SCS 和YFCS 雖在容積、容重和營(yíng)養(yǎng)價(jià)值上較未處理玉米秸稈有很大改善，但在玉米秸稈處理過(guò)程中加入大量Ca2+和Na+，單獨(dú)飼喂SCS 和YFCS 造成這些離子超出動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)需求，對(duì)動(dòng)物機(jī)體產(chǎn)生刺激（如飲水量增加、拉?。?，造成代謝能值低估。本研究結(jié)果表明，對(duì)動(dòng)物產(chǎn)生應(yīng)激較大的待測(cè)原料不適宜采用直接強(qiáng)飼法。

由于SCS 和YFCS 容重大，且含有大量Ca2+和Na+，飼糧中替代比例越大對(duì)肉雞造成應(yīng)激越大，因此本試驗(yàn)僅選擇4%、8%、12%SCS 和8%YFCS 進(jìn)行差量法測(cè)定。通過(guò)差量法得出飼糧表觀能量代謝率、代謝能、SCS 和YFCS 表觀代謝能顯著高于強(qiáng)飼法。從代謝試驗(yàn)實(shí)際觀察，在差量法測(cè)定過(guò)程中，肉雞在強(qiáng)飼代謝試驗(yàn)中所表現(xiàn)出的異常癥狀消失，這表明差量法消除了肉雞應(yīng)激，能較好地體現(xiàn)待測(cè)原料的代謝能。常娟等[6]研究表明，強(qiáng)飼法和套算法均低估了生物玉米秸稈的代謝能，差量法更能準(zhǔn)確反映代謝能值。同時(shí)由于不同添加比例表現(xiàn)出不同的表觀代謝能，也進(jìn)一步證明待測(cè)原料和飼糧中其他原料產(chǎn)生的組合效應(yīng)。Sibbald 等[17]指出，飼糧中各原料間的組合效應(yīng)及待測(cè)原料所占飼糧比例是導(dǎo)致待測(cè)原料表觀代謝能變異的主要原因。張子儀等[18]指出，能量原料（如玉米）的表觀代謝能值隨待測(cè)原料在飼糧中所占比例的增加而減小，而粗飼料則相反。本研究中SCS 已屬于能量飼料的范圍，代謝能值隨著添加量的增加逐漸減少，與前人報(bào)道一致。YFCS組成的飼糧中能量代謝率和代謝能均低于SCS 組，且YFCS 表觀代謝能低于SCS，這與酵母消耗大量還原糖有關(guān)，這一結(jié)果符合理論推理。本試驗(yàn)未考慮氮校正會(huì)造成代謝能低估，通過(guò)氮校正AME 的精確度會(huì)提高。

3.3 SCS 表觀代謝能驗(yàn)證分析 根據(jù)強(qiáng)飼法和差量法獲得不同比例SCS 的表觀代謝能，設(shè)計(jì)肉雞飼糧配方并調(diào)整各營(yíng)養(yǎng)水平平衡，進(jìn)行飼養(yǎng)試驗(yàn)。本研究結(jié)果顯示，8%SCS 高油組的飼糧表觀代謝能顯著高于配方設(shè)計(jì)水平，這說(shuō)明強(qiáng)飼法極大地低估了SCS 代謝能。

4 結(jié) 論

本研究結(jié)果顯示，玉米秸稈經(jīng)過(guò)處理后再經(jīng)過(guò)酶解轉(zhuǎn)化成富含還原糖和鈣的SCS；SCS 經(jīng)酵母發(fā)酵后還原糖降低，氨基酸含量提高，并且經(jīng)過(guò)酶解和酵母發(fā)酵后副產(chǎn)物含量降低。通過(guò)直接法和差量法測(cè)定不同玉米秸稈表觀代謝能，表明對(duì)雞產(chǎn)生較大應(yīng)激的待測(cè)原料不適宜采用直接法測(cè)定代謝能。利用差量法測(cè)得不同比例SCS 飼糧的雞表觀代謝能為14.38～15.85 MJ/kg，顯著高于玉米的代謝能值（13.56 MJ/kg）和YFCS 代謝能值（8.61 MJ/kg），并通過(guò)飼養(yǎng)試驗(yàn)驗(yàn)證差量法測(cè)定的SCS 表觀代謝能結(jié)果可信。這表明SCS 可以作為飼料能量原料；YFCS 同時(shí)富有蛋白、能量和酵母菌可以作為多功能玉米秸稈飼料進(jìn)一步研究。