程曉峰，凌學(xué)士，錢昌銀，董先敏，周佰仕，劉 華

（1. 合肥市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，安徽合肥 230091；2. 肥西縣動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，安徽肥西 231200；3. 廬江縣動(dòng)物疫病預(yù)防與控制中心，安徽廬江 231500；4. 安徽省動(dòng)物疫病預(yù)防與控制中心，安徽合肥 230091）

禽流感是由正黏病毒科流感病毒屬A 型流感病毒引起的傳染病[1]。H5、H7 亞型高致病性禽流感不僅對(duì)養(yǎng)禽業(yè)危害巨大，還能夠感染人[2-3]，被我國(guó)列為一類動(dòng)物疫病[4]。2004 年，我國(guó)開始對(duì)H5 亞型高致病性禽流感實(shí)施強(qiáng)制免疫政策[5]，2017 年又對(duì)H7 亞型實(shí)行強(qiáng)制免疫[6]，在全國(guó)推廣使用（H5+H7）禽流感二價(jià)滅活疫苗。為評(píng)價(jià)該疫苗的免疫效果，合肥市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心從2017 年10 月開始，對(duì)全市家禽H5 和H7 亞型高致病性禽流感抗體進(jìn)行檢測(cè)，為科學(xué)制定免疫計(jì)劃，研判禽流感防控形勢(shì)等提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。

1 材料與方法

1.1 抽樣方法

2017 年10 月—2018 年10 月，按 照2017和2018 年度安徽省動(dòng)物疫病監(jiān)測(cè)與流行病學(xué)調(diào)查計(jì)劃[7-8]，并結(jié)合本市實(shí)際，在春季和秋季集中強(qiáng)制免疫后，分別開展了3 次集中監(jiān)測(cè)，抽樣設(shè)計(jì)見表1。養(yǎng)殖場(chǎng)內(nèi)，按照存欄量進(jìn)行系統(tǒng)抽樣，每場(chǎng)抽取35~80 份家禽血清；在交易市場(chǎng)，按照檔口或攤位數(shù)量，每場(chǎng)抽取15~35 份家禽血清；在自然村散養(yǎng)戶，每戶抽取15~30 份家禽血清。

表1 集中監(jiān)測(cè)抽樣策略和抽樣數(shù)量

此外，選取22 個(gè)固定家禽養(yǎng)殖場(chǎng)（預(yù)期群體免疫抗體合格率為94%、可接受誤差10%、置信水平95%），在2018 年春季集中免疫前和免疫后開展定點(diǎn)監(jiān)測(cè)。免疫前，調(diào)查這些養(yǎng)殖場(chǎng)的免疫程序、飼養(yǎng)管理和高致病性禽流感病史等情況，同時(shí)在每個(gè)場(chǎng)點(diǎn)采集35 份血清樣品（預(yù)期個(gè)體免疫抗體合格率90%、可接受誤差10%、置信水平95%）；免疫后21 d，在這些場(chǎng)內(nèi)，每場(chǎng)隨機(jī)采集35 份血清樣品。固定場(chǎng)點(diǎn)及樣品數(shù)量見表2。

1.2 器材與試劑

試驗(yàn)器材包括，單道、8 道移液器（品牌Thermo）；96 孔90 V 型微量反應(yīng)板、微量振蕩器等；檢測(cè)試劑包括，H5 亞型（Re-8 株）禽流感病毒血凝抑制試驗(yàn)抗原、H7N9 亞型禽流感病毒血凝抑制試驗(yàn)抗原，均為哈爾濱維科生物科技開發(fā)公司產(chǎn)品。

1.3 檢測(cè)方法與判定標(biāo)準(zhǔn)

參照國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB/T 18936 2003[9]，采用血凝和血凝抑制試驗(yàn)，檢測(cè)H5、H7 亞型禽流感免疫抗體。HI 抗體效價(jià)≥24，判定為個(gè)體合格；存欄禽群免疫抗體合格率≥70%，判定為群體合格[10]；H5 和H7 亞型群體合格率均≥70%的場(chǎng)點(diǎn)，判為合格場(chǎng)點(diǎn)。

2 結(jié)果與分析

2.1 集中監(jiān)測(cè)

從3 次集中監(jiān)測(cè)結(jié)果（表3）來看，高致病性禽流感抗體場(chǎng)點(diǎn)合格率從2017 年秋季的48.0%，分別提高到2018 年春季的96.6%和秋季的95.5%，H5、H7 亞型個(gè)體合格率也均高于2017 年秋季水平，且差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＜0.01）。

2018 年春季和秋季的高致病性禽流感抗體場(chǎng)點(diǎn)合格率差異不顯著（P ＞0.05），H7 亞型個(gè)體合格率差異也不顯著（P ＞0.05），但秋季的H5亞型個(gè)體合格率較春季繼續(xù)升高（P ＜0.05）。

2.2 定點(diǎn)監(jiān)測(cè)

2018 年春季集中強(qiáng)制免疫前（4 月）、免疫后21 d（5 月）進(jìn)行的定點(diǎn)監(jiān)測(cè)結(jié)果（表4）顯示：免疫后21 d，H5 亞型禽流感抗體個(gè)體合格率由92.6%降到58.2%，免疫后60 d，又大幅回升到90.8%，差異極顯著（P ＜0.01）；而H7 亞型抗體合格率呈直線上升，個(gè)體合格率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＜0.01）。

表3 合肥市高致病性禽流感抗體集中監(jiān)測(cè)結(jié)果

表4 合肥市高致病性禽流感抗體定點(diǎn)監(jiān)測(cè)結(jié)果

3 討論

禽流感（H5+H7）二價(jià)滅活疫苗使用初期，H5 亞型抗體合格率較高，但H7 亞型抗體合格率較低。按照《農(nóng)業(yè)部關(guān)于切實(shí)做好全國(guó)高致病性禽流感秋季免疫工作的通知》要求，2017 年秋季全國(guó)統(tǒng)一用（H5+H7）二價(jià)滅活疫苗替代重組禽流感病毒H5 二價(jià)或三價(jià)滅活疫苗，對(duì)家禽實(shí)施免疫[6]。合肥市參考農(nóng)業(yè)農(nóng)村部推薦的免疫方案，對(duì)轄區(qū)內(nèi)家禽進(jìn)行了免疫。不過，從采樣信息的匯總情況看，免疫密度并未達(dá)到100%。通過電話回訪，分析原因?yàn)椋阂皇怯械姆N禽場(chǎng)和蛋禽場(chǎng)仍遵循本場(chǎng)的免疫程序，未及時(shí)更換免疫（H5+H7）二價(jià)滅活疫苗；其次，部分肉禽場(chǎng)在監(jiān)測(cè)采樣開展時(shí)仍在免疫有效期內(nèi)，未再次實(shí)施免疫；二是（H5+H7）二價(jià)滅活疫苗當(dāng)時(shí)尚未在水禽場(chǎng)中推廣使用。種禽場(chǎng)、蛋禽場(chǎng)或水禽場(chǎng)普遍使用過重組禽流感病毒H5 二價(jià)或三價(jià)滅活疫苗進(jìn)行程序免疫，導(dǎo)致H5 亞型基礎(chǔ)免疫抗體一直維持在較高水平，因而H5 亞型抗體合格率一直較高。肉禽場(chǎng)的H5 亞型抗體合格率較高，也可能與母源抗體較高有關(guān)。

生產(chǎn)實(shí)踐中，一般采用歷史對(duì)照調(diào)查方法，對(duì)疫苗進(jìn)行免疫效果評(píng)價(jià)[11]。本研究在2018 年春季集中免疫前后，對(duì)家禽群體進(jìn)行抗體水平檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)免疫后21 d 的H5 亞型抗體個(gè)體合格率明顯下降，而H7 亞型抗體合格率卻明顯升高（P ＜0.01）。從反饋的采樣信息看，5 月開展的監(jiān)測(cè)中，有9 個(gè)場(chǎng)點(diǎn)采樣時(shí)間沒有達(dá)到免疫后21 d 的要求，可能由于采樣時(shí)間的提前，致使疫苗刺激的免疫效果沒有完全展現(xiàn)出來，導(dǎo)致抗體合格率偏低，也可能與不同抗原刺激機(jī)體免疫應(yīng)答的時(shí)間不一致有關(guān)。隨后6 月的跟蹤監(jiān)測(cè)發(fā)現(xiàn)，H5 和H7 亞型抗體合格率均顯著提升。

從2017 年10 月開始，（H5+H7）二價(jià)滅活疫苗逐步被廣大養(yǎng)殖戶使用，使得高致病性禽流感場(chǎng)點(diǎn)合格率增幅較大，個(gè)體合格率也均有提升，表明該疫苗的免疫效果較好，這與國(guó)內(nèi)其他省市的臨床應(yīng)用結(jié)果一致[12-15]。因此，各地要繼續(xù)加強(qiáng)免疫、監(jiān)測(cè)，結(jié)合“先打后補(bǔ)”政策，對(duì)免疫抗體水平不達(dá)標(biāo)和增補(bǔ)欄的養(yǎng)殖場(chǎng)（戶）及時(shí)補(bǔ)免。

4 結(jié)論

研究發(fā)現(xiàn)，（H5+H7）二價(jià)滅活疫苗能夠顯著提升H5 和H7 亞型抗體的場(chǎng)點(diǎn)合格率和個(gè)體合格率，特別是H7 亞型抗體，最終都達(dá)到了95%以上，說明該疫苗對(duì)H5 和H7 亞型禽流感具有較好的防護(hù)效果，可使禽群達(dá)到有效的免疫保護(hù)水平。因此，建議各地繼續(xù)加強(qiáng)（H5+H7）二價(jià)滅活疫苗的免疫和監(jiān)測(cè)，根據(jù)實(shí)際情況及時(shí)補(bǔ)免，保證免疫密度。