黃宇豪，韋繼光，羅基同，楊秀好，吳耀軍，羅輯

(1.廣西大學(xué)農(nóng)學(xué)院，農(nóng)業(yè)環(huán)境與農(nóng)產(chǎn)品安全廣西重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室培育基地，植物科學(xué)國家級實(shí)驗(yàn)教學(xué)示范中心，廣西 南寧 530004；2.廣西壯族自治區(qū)林業(yè)有害生物防治檢疫站，廣西 南寧 530028；3.廣西壯族自治區(qū)林業(yè)科學(xué)研究院，廣西 南寧 530002)

菩提樹Ficus religiosa，又名菩提榕，是?？芃oraceae 榕屬Ficus的大喬木植物，一般高達(dá)15～25 m，葉片呈三角狀卵形，具有生長速度較快，樹齡長，樹形優(yōu)美等特點(diǎn)，具有一定的觀賞價(jià)值。菩提樹是廣西、廣東、云南等地的行道樹，也是公園、寺廟等地的觀賞樹種。菩提樹黑痣病[Phyllachora repens(Corda)Sacc.][1]在廣西憑祥市、南寧市、東興市發(fā)病較嚴(yán)重，葉片產(chǎn)生黑色的凸起斑塊，影響菩提樹的光合作用，造成葉片組織壞死并大量落葉，嚴(yán)重影響其觀賞價(jià)值、經(jīng)濟(jì)效益和引種工作。目前菩提樹黑痣病的相關(guān)研究較為缺乏，尚未有防治藥劑篩選的相關(guān)報(bào)道。筆者測定5 種殺菌劑對菩提樹黑痣病病原菌的子囊孢子萌發(fā)的抑制作用，并進(jìn)行田間防治試驗(yàn)，以期篩選出適于田間防治的藥劑。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料 防治地點(diǎn)為廣西憑祥市的綠化樹種苗圃，該苗圃菩提樹面積18 hm2。地理坐標(biāo)為:E 106°45′15″，N 22°6′38″，屬熱帶季風(fēng)氣候。土壤狀況良好，土壤質(zhì)地屬于黏質(zhì)土類，有機(jī)質(zhì)含量達(dá)平均水平，有效養(yǎng)分較為協(xié)調(diào)，土壤整體偏酸性。

試驗(yàn)用殺菌劑為:80% 代森錳鋅可濕性粉劑(WP)，河北雙吉化工有限公司；50%多菌靈WP，江蘇藍(lán)豐生物化工股份有限公司；70% 甲基硫菌靈WP，日本日友商社香港有限公司；45%咪鮮胺水乳劑(EW)，山東澳得利化工有限公司；等量式波爾多液(自配)。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 子囊孢子液制備 將葉片上的黑痣病病斑刮下經(jīng)研磨處理后放入離心管，加入3 mL 無菌水后，渦旋震蕩3 min，用4 000 r/min 的轉(zhuǎn)速進(jìn)行離心處理 3 min，過濾多余雜質(zhì)，取上清液，再用8 000 r/min的轉(zhuǎn)速離心4 min，使孢子沉淀，用移液槍吸走多余上清液，保留1 mL 液體于離心管中，得到純凈子囊孢子液備用。

1.2.2 殺菌劑對子囊孢子萌發(fā)的抑制作用測定將處理好的子囊孢子液取出，調(diào)節(jié)子囊孢子懸浮液濃度至10 ×10 倍顯微鏡下每視野有100～150 個(gè)子囊孢子。將孢子懸浮液與配置好濃度的藥劑按1∶1的體積混勻，使藥劑濃度分別為0.05，0.1，0.5，1.0，2.0 μg/mL，以不加藥劑的處理作為空白對照，每個(gè)處理吸取20 μL 液體滴在干凈的凹玻片上，于25 ℃培養(yǎng)24 h 觀察子囊孢子的萌發(fā)情況，子囊孢子的芽管長于子囊孢子的直徑視為萌發(fā)。每個(gè)處理3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)計(jì)數(shù)200 個(gè)子囊孢子的萌發(fā)情況。根據(jù)下列公式計(jì)算子囊孢子的萌發(fā)率及抑制率。

孢子萌發(fā)率(%) ＝萌發(fā)的孢子數(shù)/孢子總數(shù)×100

孢子萌發(fā)抑制率(%)＝(對照孢子萌發(fā)數(shù)-藥劑處理后孢子萌發(fā)數(shù))/對照孢子萌發(fā)數(shù)×100

1.2.3 殺菌劑對子囊孢子萌發(fā)的室內(nèi)毒力測定室內(nèi)毒力測定采用孢子萌發(fā)抑制法。先通過預(yù)試驗(yàn)將各個(gè)藥劑濃度的抑制率控制在10%～90%后，用無菌水把殺菌劑配制成有效成分含量為50 mg/L的母液，再用無菌水分別稀釋成5 個(gè)預(yù)試驗(yàn)范圍內(nèi)不同的濃度梯度 0.01，0.05，0.1，0.2，0.35 μg/mL的藥液。分別將0.1 mL 藥劑與4.9 mL 孢子液混合于試管中，以等量無菌水與孢子液混勻作為空白對照組，保證在10 ×10 倍顯微鏡每個(gè)視野下有150～200 個(gè)孢子，之后用移液槍分別取40 μL 混合液滴至凹玻片內(nèi)，將凹玻片放置于玻璃干燥器中保濕，靜置36 h 后取出用顯微鏡觀察并按上列公式計(jì)算孢子萌發(fā)抑制率。

將各藥劑抑制率與對應(yīng)濃度用DPS 軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，可以取得濃度對數(shù)與萌發(fā)率的線性回歸方程y＝ax+b，以及藥劑對菩提樹黑痣病的抑制中量濃度(EC50)、濃度對數(shù)、萌發(fā)率三者之間的相關(guān)系數(shù)r。

1.2.4 田間防治試驗(yàn) 在憑祥市苗圃園區(qū)內(nèi)選取統(tǒng)一大小的菩提樹進(jìn)行室外防治試驗(yàn)。每種藥劑根據(jù)使用說明確定其濃度，80%代森錳鋅WP 1 000 倍液，70%甲基硫菌靈WP 1 200 倍液，450 g/L咪鮮胺EW 1 000 倍液，等量式波爾多液(硫酸銅∶生石灰∶水 ＝1∶1∶200)。每種藥劑選擇 10 株健康的菩提樹，設(shè)置重復(fù)。在3月初剛展葉時(shí)采用噴霧器對菩提樹進(jìn)行2 次藥劑噴灑，每次間隔期15 d，以噴清水作為對照組。分別于第一次施藥后15 d，第二次施藥后15 d 進(jìn)行調(diào)查，在每種藥劑噴灑的10 棵樹上隨機(jī)選取100 片葉片，記錄葉片的病害級別，計(jì)算每個(gè)處理的病情指數(shù)，最終獲得藥劑的防效。

病情指數(shù)＝[∑(各病級株數(shù)×各病級代表數(shù)值)/(株數(shù)總和×發(fā)病最高級的代表數(shù)值)]×100。

相對防治效果(%) ＝(對照病情指數(shù)-處理病情指數(shù))/對照病情指數(shù)×100[6-7]。

2 結(jié)果與分析

2.1 殺菌劑對孢子萌發(fā)的抑制作用 菩提樹黑痣菌的子囊孢子對藥劑比較敏感，在0.05 μg/mL 濃度條件下5 種殺菌劑對孢子的萌發(fā)已經(jīng)顯現(xiàn)出不同程度的抑制作用。在1.0 μg/mL 的濃度條件下除了70%甲基硫菌靈WP 外，其余4 種殺菌劑都能完全抑制孢子萌發(fā)。其中等量式波爾多液對黑痣菌游動孢子的抑制效果最強(qiáng)，在0.5 μg/mL 的濃度下對孢子萌發(fā)的抑制率就達(dá)到100%。相比之下，70%甲基硫菌靈WP 的抑制效果較差，藥劑濃度需達(dá)到2.0 μg/mL 時(shí)才能完全抑制孢子萌發(fā)。而其余3 種殺菌劑均有較理想的抑制效果(表1)。

表1 5 種殺菌劑不同濃度對黑痣菌子囊孢子萌發(fā)的抑制率%

2.2 5 種殺菌劑對菩提樹黑痣病病菌的抑制中量濃度比較 5 種供試藥劑對菩提樹黑痣病菌的室內(nèi)毒力以80%代森錳鋅 WP 和等量式波爾多液的EC50值較小，其次是50%多菌靈WP。70%甲基硫菌靈WP 和45%咪鮮胺EW 毒力相對較弱(表2)。

表2 5 種殺菌劑對菩提黑痣病的室內(nèi)毒力

2.3 殺菌劑田間防治試驗(yàn)結(jié)果 所選藥劑對菩提樹黑痣病都有一定預(yù)防作用，以波爾多液的防效最好，代森錳鋅和咪鮮胺防效中等，70%甲基硫菌靈防效較低(表3)。

表3 4 種殺菌劑對菩提樹黑痣病的田間防治試驗(yàn)結(jié)果

3 討論

Hsieh T J 和Hsieh W H(2003)報(bào)道用免賴得和代森錳鋅對菩提樹黑痣病菌子囊孢子有較好的抑制作用[8]。本試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)代森錳鋅對菩提樹黑痣病防效較好，與臺灣報(bào)道的結(jié)果一致，還發(fā)現(xiàn)波爾多液也是一個(gè)較好的防治藥劑。在后續(xù)調(diào)查中，施藥植株比未施藥植株發(fā)生病害的程度明顯減少，可見代森錳鋅和波爾多液也起到了一定的預(yù)防作用，并且施藥植株沒有發(fā)生藥害。在實(shí)際生產(chǎn)應(yīng)用中，菩提樹的長葉期是防治效果最好時(shí)期。由于病害發(fā)生的復(fù)雜性，在病害防治時(shí)不能僅依靠化學(xué)防治，還應(yīng)該合理運(yùn)用抗病品種，或根據(jù)種植地形、種植分布等合理布局來對病害的發(fā)生進(jìn)行研究。