曾志能

(桂林醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科， 廣西桂林 541001)

狼瘡性腎炎(LN)不但是系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)常見的并發(fā)癥之一，而且是繼發(fā)性腎病導(dǎo)致終末期腎衰竭的一種疾病[1]。多見于中、青年女性，其發(fā)病與免疫復(fù)合物形成、免疫細(xì)胞和細(xì)胞因子等免疫異常有關(guān)。據(jù)數(shù)據(jù)顯示5年腎臟存活率為46%～95%，其75%患者可有腎臟受累的臨床征象[3]。因此，為尋找新的LN生物學(xué)指標(biāo)，研究者已經(jīng)做了大量研究，然而到目前為止，還未找到一種公認(rèn)的LN的特異性生物學(xué)標(biāo)志物[2]。目前，隨著對(duì)炎癥趨化因子和細(xì)胞因子的研究更加深入，從中發(fā)現(xiàn)新的細(xì)胞因子可以作為L(zhǎng)N的生物標(biāo)志物，LN患者和狼瘡鼠模型腎臟病理均存在血清和尿中白細(xì)胞介素-18(IL-18)，在抗微生物、抗自身免疫疾病等方面將會(huì)得到充分應(yīng)用，并且在LN的發(fā)病機(jī)制中起主要作用。而跨膜蛋白-腎損傷分子-1(KIM-1)表達(dá)于受損的近曲小管上皮細(xì)胞，也可作為檢查L(zhǎng)N早期腎損傷定量的生物學(xué)標(biāo)記物[4]。有關(guān)資料表明，LN患者血清和尿液中IL-18和KIM-1表達(dá)水平顯著升高，血清和尿液中IL-18和KIM-1表達(dá)水平和LN嚴(yán)重性及治療效果密切相關(guān)，同時(shí)對(duì)LN的復(fù)發(fā)具有預(yù)測(cè)價(jià)值[5-6]。目前血清和尿液IL-18和KIM-1表達(dá)水平在LN患者的臨床研究報(bào)道較少。為此，本研究旨在探討LN患者血清和尿液IL-18和KIM-1表達(dá)水平與反映腎臟病變常規(guī)實(shí)驗(yàn)室檢查指標(biāo)間的關(guān)系及其對(duì)活動(dòng)性LN的臨床診斷意義，為L(zhǎng)N臨床治療預(yù)后提供參考依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取本院2016年10月至2017年9月就診的LN患者60例(LN組)及60例體檢健康者(對(duì)照組)作為研究對(duì)象。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)所有納入患者均符合1997年美國(guó)風(fēng)濕病學(xué)會(huì)修訂的LN及SLE分類診斷標(biāo)準(zhǔn)[7]；(2)臨床資料詳細(xì)且真實(shí)；(3)經(jīng)腎活檢確診為L(zhǎng)N；(4)既往無(wú)高血壓、糖尿病者。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)近期行免疫抑制劑治療者；(2)合并肝腎等重要臟器損傷者；(3)類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎及自身免疫性疾病者；(4)繼發(fā)性腎臟疾病者。LN組根據(jù)系統(tǒng)性紅斑狼瘡疾病活動(dòng)指數(shù)2000(SLEDAI-2000)評(píng)分系統(tǒng)分為L(zhǎng)N活動(dòng)組(SLEDAI評(píng)分≥10分)35例和非活動(dòng)組(SLEDAI評(píng)分<10分)25例；再按照ds-DNA抗體是否陽(yáng)性分為抗ds-DNA抗體陽(yáng)性組35例，抗ds-DNA抗體陰性組25例。LN活動(dòng)組男15例，女20例，年齡19～60歲，體質(zhì)量35～75 kg；非活動(dòng)組男9例，女16例，年齡25～55例，體質(zhì)量40～65 kg。兩組患者C反應(yīng)蛋白、尿蛋白定量等指標(biāo)比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，其他基本情況比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見表1。

表1 兩組患者臨床資料比較

1.2 檢測(cè)方法 首先收集患者的基本情況及生化指標(biāo)等。血清IL-18和KIM-1水平測(cè)定：抽取受試者第1天早上8:00時(shí)空腹靜脈血5 mL，低溫狀態(tài)下在4 000 r/min的離心機(jī)中離心5 min，留取上清液分裝貯藏在-80 ℃低溫冰箱中保存待檢。尿液IL-18和KIM-1水平測(cè)定：同時(shí)，用無(wú)菌試管收集受試者早晨尿10 mL，4 000 r/min并離心5 min收集血清和尿液上清液，放置于56 ℃水浴鍋30 min滅活，然后用0.22 μm微孔濾膜濾過除菌，最后放入在-20 ℃冰箱中保存?zhèn)溆谩２捎妹嘎?lián)免疫吸附法檢測(cè)血液及尿液中IL-18和KIM-1水平。具體操作步驟嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行，其來源于北京奇松生物科技有限公司。

2 結(jié) 果

2.1 比較3組血清和尿液IL-18和KIM-1水平的變化 3組血清和尿液IL-18和KIM-1水平比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，其中LN活動(dòng)組血清和尿液IL-18和KIM-1水平明顯高于非活動(dòng)組與對(duì)照組，非活動(dòng)組血清和尿液IL-18和KIM-1水平明顯高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表2。

2.2 LN患者血清及尿液IL-18和KIM-1水平與ds-DNA抗體之間的關(guān)系 LN患者血清和尿液中IL-18和KIM-1水平在抗ds-DNA抗體陽(yáng)性組與抗體陰性組之間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見表3。

表2 3組血清和尿液IL-18和KIM-1水平比較

注：*P<0.05,與對(duì)照組比較；#P<0.05,與非活動(dòng)組比較

表3 各組血清和尿液IL-18和KIM-1水平比較

2.3 LN患者血清及尿液中IL-18和KIM-1水平與臨床指標(biāo)的相關(guān)性分析 根據(jù)相關(guān)性結(jié)果顯示：LN患者血清中的IL-18和KIM-1水平與白細(xì)胞計(jì)數(shù)、C反應(yīng)蛋白、尿蛋白定量之間均呈負(fù)相關(guān)(P<0.05)，且補(bǔ)體C3、補(bǔ)體C4、紅細(xì)胞沉降率及SLEDAI評(píng)分之間均呈正相關(guān)；LN患者尿液中的IL-18和KIM-1水平與白細(xì)胞計(jì)數(shù)、補(bǔ)體C3、補(bǔ)體C4之間呈負(fù)相關(guān)，與C反應(yīng)蛋白、尿蛋白定量、紅細(xì)胞沉降率及SLEDAI評(píng)分之間均呈正相關(guān)(P<0.05)。見表4。

表4 LN患者血清及尿液中IL-18和KIM-1水平

注：*P<0.05

3 討 論

SLE患者中約有1/3～1/2存在腎臟受累的臨床表現(xiàn)，LN是最常見的繼發(fā)性腎病之一，也是SLE患者主要死亡原因之一。近年來，腎臟活檢是診斷LN嚴(yán)重程度及其腎臟功能損害的金標(biāo)準(zhǔn)并是LN治療的重要參考指標(biāo)[8-10]。但有創(chuàng)性及風(fēng)險(xiǎn)性限制了其臨床應(yīng)用[11]。因此探索判斷LN嚴(yán)重程度重要性和活動(dòng)性的實(shí)驗(yàn)室檢查指標(biāo)顯得尤為重要，尋找一種操作方面及簡(jiǎn)單的指標(biāo)來評(píng)估LN患者腎病變的活動(dòng)性，這是許多醫(yī)務(wù)人員及研究者們的共同目標(biāo)。

IL-18是1989年有研究者發(fā)現(xiàn)從痤瘡丙酸桿菌和LPS致內(nèi)毒素休克的小鼠血清中分離出一種類似IL-12的因子，相對(duì)分子質(zhì)量約為75×103。其作用是由巨噬細(xì)胞樣細(xì)胞產(chǎn)生，具有誘導(dǎo)Th1細(xì)胞產(chǎn)生IFN-γ；促進(jìn)T細(xì)胞增殖；加強(qiáng)FasL介導(dǎo)的細(xì)胞效應(yīng)；與IL-12共同作用誘導(dǎo)B細(xì)胞產(chǎn)生IFN-γ等多種生物學(xué)功能。這預(yù)示著IL-18是一種具有廣泛應(yīng)用的細(xì)胞因子，血清和尿中IL-18的表達(dá)水平和LN病理密切相關(guān)。KIM-1是免疫球蛋白基因超家族的一員，其生物學(xué)作用尚不明確，可能參與免疫反應(yīng)和腎臟疾病的損傷及修復(fù)過程及釋放細(xì)胞外對(duì)抗損傷性黏附[12]。既往研究發(fā)現(xiàn)原位雜交和免疫組化顯示，KIM-1表達(dá)于再生近曲小管含有細(xì)胞增殖的標(biāo)記物的上皮細(xì)胞和含有細(xì)胞去分化的標(biāo)記物的上皮細(xì)胞，提示KIM-1的表達(dá)與上皮細(xì)胞的去分化和增殖有關(guān)，并借此參與小管上皮組織形態(tài)和功能完整性的恢復(fù)[13-14]。因此，血清和尿KIM-1可判斷預(yù)后及藥物腎毒性的鑒定中發(fā)揮重要作用。研究證明，血清和尿中IL-18和KIM-1能夠更早反映腎損傷[15]。

本研究通過ELISA方法對(duì)LN患者血清及尿液中的IL-18和KIM-1水平進(jìn)行了檢測(cè)，結(jié)果表明：3組血清和尿液IL-18和KIM-1水平比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，其中LN活動(dòng)組血清和尿液IL-18和KIM-1水平明顯高于非活動(dòng)組與對(duì)照組，且非活動(dòng)組血清和尿液IL-18和KIM-1水平明顯高于對(duì)照組，由此可見，血清和尿液中IL-18和KIM-1表達(dá)水平高低和LN的病情活動(dòng)度、狼瘡病情復(fù)發(fā)有關(guān)，甚至和LN的病理類型密切相關(guān)[16]。同時(shí)LN患者血清和尿液中的IL-18水平與補(bǔ)體C3、補(bǔ)體C4、紅細(xì)胞沉降率及SLEDAI評(píng)分之間均呈正相關(guān)，此結(jié)果和近幾年活動(dòng)性LN血清和尿液中IL-18和KIM-1升高報(bào)道一致[17-18]。臨床上判斷病情活動(dòng)性的指標(biāo)，如補(bǔ)體C3、C4、紅細(xì)胞沉降率、dcDNA滴度可反映整體狼瘡病情控制的情況，補(bǔ)體C3在肝損害時(shí)，也不能很好地反映狼瘡病情的活動(dòng)性；紅細(xì)胞沉降率還受感染等多種因素影響。因此，深入研究LN的生物學(xué)作用及其在腎臟中的表達(dá)水平及臨床意義，對(duì)完善LN的發(fā)病機(jī)制和提供新的治療思路可能具有重要意義。根據(jù)相關(guān)性結(jié)果顯示，LN患者血清及尿液中的KIM-1水平與C反應(yīng)蛋白、尿蛋白定量、紅細(xì)胞沉降率及SLEDAI評(píng)分之間均呈正相關(guān)，這一結(jié)果提示，尿液KIM-1水平可可能與LN密切相關(guān)，而且有可能成為L(zhǎng)N疾病活動(dòng)的預(yù)測(cè)因子，從而更好地反映LN患者病情變化。

綜上所述，血液和尿液中的IL-18和KIM-1表達(dá)水平可能作為L(zhǎng)N疾病的生物標(biāo)記物，且二項(xiàng)指標(biāo)檢測(cè)對(duì)病情的預(yù)后及治療具有積極的指導(dǎo)意義。